嗜盐菌H.Sp.XZ515中古紫质的光化学和质子泵特性

应用视黄醛蛋白在介质中有羟胺存在时由光照而引起的漂白反应,再一次确定了在嗜盐菌Ｈ．Ｓｐ．ＸＺ５１５中含有古紫质。利用不同ｐＨ时的差光谱确定了这种古紫质属于类ＢＲ蛋白。这种蛋白所具有的质子泵功能也如同ＢＲ一样是使质子自膜内侧转运至膜外侧。但质子在膜上转运的动力学过程与ＢＲ有区别。如果ＢＲ中质子在膜上转运过程通常是质子释放先于质子接收,则在ＸＺ５１５中是质子释放落后于质子接收。     

嗜盐菌的培养及紫膜分离纯化方法的改进

嗜盐菌的培养及紫膜分离纯化方法的改进@徐兵$中国科学院生物物理研究所!北京100101 @陈德亮$中国科学院生物物理研究所!北京100101 @胡坤生$中国科学院生物物理研究所!北京100101~~     

嗜盐菌的嗜盐机制

嗜盐菌是生活在高盐环境中的细菌。它们的细胞结构和生理机能特殊,要求有高盐浓度维持其生存;同时,它们的细胞膜结构和细胞内的溶质,都能适应高盐环境。     

极端嗜盐古菌蛋白类抗生素——嗜盐菌素

古菌(Archaea)是一类与细菌及真核生物显著不同的生命的第三种形式[1],大多生活在极端或特殊环境,主要包括产甲烷古菌(Methanogenic Achaea)、极端嗜盐古菌(Extremely Halophilic Archaea)和极端嗜热古菌(Extremely Thermophilic Archaea)等三大类.极端古菌是极端环境微生物的重要成员,也是极端环境微生物资源开发的重要领域.其中,嗜盐古菌可产生一类蛋白类抗生素,称为嗜盐菌素(halocin).     

菌紫质（bR）光驱动质子泵的分子机制

一、引言 太阳能是人类取之不尽、用之不竭的永远的能量宝厍,如何将太阳能有效地转换为电能、化学能等其它形式的能量是解决下一世纪能源危机的一个重大研究课题。在无机界人们已经发现了多种具有光能转换特性的材料,并成功地把半导体光电转换器件应用于科学研究和生产实践中。但其使用范围和能量转换效率受到了很大限制。在有机界,各种功能高分子材料的研究蓬勃发展,应用化学的方法制造出了各种功能各异、性能奇特的材料,其中光     

用自旋标记研究嗜盐菌紫膜的相变

本文用5′酮基软脂的甲酯的N′氧基4、4-二甲基(口恶)唑衍生物、TEMPO和4-(乙氧基氟代磷酸))-TEMPO′研究了嗜盐菌紫膜的相变.ESR测定表明:在醋酸钠缓冲溶液中(100mM、pH7.0)、30至70℃没有观察到相转变;在81℃附近获得了紫膜类脂的另一相变点,此转变点可能与紫膜类脂及蛋白质晶格的分离有关.紫膜蛋白质的热变性点则在100℃附近.当温度升至110℃时紫膜类脂烃链则趋“熔化”,紫膜蛋白质的热变性也呈不可逆的.文中还就不同的物理因素对紫模相变的影响进行了讨论.     

极端嗜盐古生菌(Natrinema sp.)R6-5胞外嗜盐蛋白酶的纯化和性质研究

采用bacitracin-Sepharose 4B亲和层析的方法得到凝胶电泳均一的来自极端嗜盐古生菌(Natrinema sp.)R6-5的胞外嗜盐蛋白酶。经SDS-PAGE分析该酶亚基分子量为62kDa。PMSF对它的活性完全抑制,表明它是一种丝氨酸蛋白酶,该酶反应的最适NaCl浓度为3mol/L,最适温度为45℃,最适pH值为8.0。在高盐条件下能维持高活性并十分稳定,具有重要的潜在应用价值。     

紫膜蛋白(菌紫质)的应用前景

简要综述了紫膜蛋白(菌紫质)作为光驱动质子泵,光电换能器及光敏材料等方面的应用前景;谈到了通过基因工程和生化手段可优化设计菌紫质的物理和化学特性,将其应用在信号的存储和处理中的可能性,并探讨了菌紫质在实际应用中可能存在的问题.     

极端嗜盐古菌蛋白类抗生素——嗜盐菌素

古菌 (Ａｒｃｈａｅａ)是一类与细菌及真核生物显著不同的生命的第三种形式[1] ,大多生活在极端或特殊环境 ,主要包括产甲烷古菌 (ＭｅｔｈａｎｏｇｅｎｉｃＡｃｈａｅａ)、极端嗜盐古菌 (ＥｘｔｒｅｍｅｌｙＨａｌｏｐｈｉｌｉｃＡｒｃｈａｅａ)和极端嗜热古菌 (ＥｘｔｒｅｍｅｌｙＴｈｅｒｍｏｐｈｉｌｉｃＡｒｃｈａｅａ)等三大类。极端古菌是极端环境微生物的重要成员 ,也是极端环境微生物资源开发的重要领域。其中 ,嗜盐古菌可产生一类蛋白类抗生素 ,称为嗜盐菌素 (ｈａｌｏｃｉｎ)。与细菌素相似[2 ] ,嗜盐菌素是由质粒编码、核糖体合…     

超滤膜分离纯化珊瑚藻溴过氧化物酶

利用超滤膜对珊瑚藻中溴过氧化物酶(EC 1.11.1.18,分子质量740kDa)进行分离纯化,对膜的截留分子质量、操作压力、起始蛋白质浓度、搅拌速率、pH、离子强度等条件进行了优化。超滤分离纯化最优条件为:截留分子质量为100kDa的聚偏氟乙烯(PVDF)膜,操作压力为0.02MPa,搅拌速率为600r/min,起始蛋白质浓度为0.1g/L,pH=6.0。对粗酶液先进行热沉淀纯化,再进行超滤纯化,溴过氧化物酶被纯化了21倍,比活为212U/mg,酶活回收率为96%。     

毛壳霉内切菊粉酶的纯化与性质

毛壳霉 (Chaetomiumsp .)C34发酵液经硫酸铵分级沉淀、DEAE 纤维素 11离子交换层析、Q SepharoseFastFlow离子交换层析、SephacrylS 2 0 0凝胶过滤、PhenolSepharoseTM HP疏水层析 ,得到电泳纯的内切菊粉酶组分 ,纯化倍数为 30 8倍 ,活力回收率为 7 7%。用SDS PAGE测得该酶亚基的分子量为 6 6kD。菊粉酶的最适pH为 6 0 ,最适温度为 5 0～ 5 5℃。菊粉酶在 5 0℃以下 ,pH5 0～ 8 0时较稳定。Cu2 完全抑制酶的活性 ,Mn2 、Zn2 、Fe2 、EDTA以及NBS(N bromosuccinimide ,N 溴代丁二酰亚胺 )对该酶有很强的抑制作用。该酶对菊粉有较强底物专一性 ,产物主要为低聚果糖 ,也可作用于蔗糖 ,I S值为 2 0。以菊粉为底物时 ,Km 为 0 199mmol L ,Vmax为 115 μmol (mg·min)。     

芽孢杆菌(Bacillus sp.)脂肽抗生素发酵工艺及分离纯化

微生物脂肽具有抗菌谱广、热稳定性高、低毒、低抗药性等优点,近年来受到国内外广泛关注。综述了芽孢杆菌脂肽抗生素的发酵和分离纯化工艺的最新研究进展。在发酵工艺中,培养基营养组成、发酵温度、搅拌转速和通气量等参数对脂肽的产量至关重要,碳源、氮源和金属离子的组成与配比都会影响芽孢杆菌的生长与产物的合成,适当控制搅拌转速和通气量可提高脂肽产量。此外,近年来一些新型发酵工艺,如泡沫回流、固定化细胞、无泡发酵、固态发酵等被用于脂肽生产,通过改进发酵方式,在降低成本的同时提高了脂肽抗生素产量。抗菌脂肽分离纯化的主要方法包括超滤、吸附、泡沫分离及色谱法等,这些方法相对于传统的酸沉和萃取,具有可连续生产、脂肽提取量高及成本低等优点。同时,多种纯化方法的组合应用大幅度提高了抗菌脂肽的提取效果,有效降低了成本,是脂肽抗生素分离提取的发展方向。     

螺旋藻的纯化

观察了螺旋藻生长过程中藻丝和杂菌的生长规律,发现中性细菌和碱性细菌的数量始终是藻丝的10^5～10^6倍。采用常规的稀释平板法、毛细管法和挑单藻法均无法可靠地获得无菌纯藻。设计用低速离心法洗涤下沉性藻丝,用过滤法洗涤上浮性藻丝,对藻丝进行预处理洗去大量杂菌;对迁移性和非迁移性藻株分别采用夹层法和平板法纯化藻株,使得单根藻丝在平板上形成藻落,获得无菌纯藻。     

香灰菌凝集素的纯化及其部分性质

香灰菌菌丝体经磷酸缓冲液抽提、20%-70%饱和浓度的硫酸铵沉淀、DEAE-Cellulose和SephadexG-100柱层析纯化得到香灰菌凝集素(Hypoxylonsp.lectin,简称HSL)。HSL经PAGE检测为单一蛋白条带,SDS-PAGE测得其亚基分子量为15.9kD。过碘酸-Schiff染色法表明HSL为一种糖蛋白,糖基的含量为15.5%,β-消去反应测得其糖和蛋白质的连接键为O-型糖肽键。HSL能凝集多种动物红细胞和人的红细胞,在所测试的红细胞中,对兔红细胞的凝集作用最强。HSL对热较敏感,经50°C处理10min,其凝集活性明显降低,其在碱性环境中较稳定,而在酸性环境中较不稳定。HSL的凝集活性受Al3+、Fe3+、Ca2+和Zn2+等阳离子的影响。对鼠红细胞的凝集作用可被半乳糖和乳糖所抑制。     

嗜碱菌(Bacillus sp.)ZBAW6的木聚糖酶的分离纯化及其性质

通过硫酸铵分级沉淀 ,阴离子交换层析 ,凝胶过滤 3步从嗜碱菌Bacillussp .ZBAW6纯化了木聚糖酶。结果表明该酶分子量为 4 5kD。N末端序列为DPFAAAVAPL。在pH5 5～ 1 0 5范围内均具有较高酶活性和稳定性 ;最适反应温度为 6 5℃ ,酶活力基本不变。该酶作用于Beech xylan的Km 为 0 1 1mg mL ,Vmax 为 2 3 89μmol (min·mg)。Hg2 + 对该酶有强的抑制作用     

Aspergillus sp. RSD生淀粉糖化酶的分离纯化及酶学性质

【目的】纯化得到一种生淀粉糖化酶,并对其酶学性质进行分析。【方法】从曲霉RSD发酵液中,经过硫酸铵分级盐析,HiPrep DEAE FF16/10弱阴离子交换层析,凝胶过滤层析,Hiprep 16/10 source 30S阳离子交换层析最终纯化出一种电泳纯的生淀粉酶。【结果】粗酶液纯化倍数为12.65倍,活力回收率为9.02%,SDS-PAGE结果显示该酶的相对分子质量约为82 kD。对该酶的酶学性质分析结果表明,该酶最适作用温度为50°C,在50°C以下稳定性很好,对高温较为敏感;最适作用pH为4.5,在pH 3.5-7.0范围内酶活力较为稳定,在40°C、pH 4.6条件下以可溶性淀粉为底物时的Km值和Vmax值分别为7.44 g/L和1.45 g/(L·min);金属离子对酶活性的影响试验表明,Fe2+对该酶具有显著激活效果,EDTA、Cu2+、K+对该酶酶活力有不同程度的抑制作用;底物特异性研究表明该酶对麦芽糊精具有较高酶活力。【结论】与市售糖化酶及生淀粉糖化酶相比,该酶对生淀粉的降解能力更高,在工业应用上有较好的前景。     

Purification and characterization of a novel phytase from Nocardia sp. MB 36

Phytase from Nocardia sp. MB 36 was purified (9.65-fold) to homogeneity by acetone precipitation, ion exchange, and molecular sieve chromatography. Native polyacrylamide gel electrophoresis (PAGE) and zymogram analysis showed a single active protein in the purified enzyme preparation. Sodium dodecyl sulfate (SDS)-PAGE analysis showed that phytase was a monomeric protein with a molecular weight of approximately 43 kDa. Phytase exhibited activity and stability over a broad pH range (2–8) and elevated temperatures (50–80°C), and utilized several phosphate compounds as substrates. Phytase was extremely resistant to pepsin and trypsin. Various metal ions viz. Fe²⁺, Co²⁺, and Mn²⁺, and NH₄⁺, ethylenediaminetetraacetic acid or EDTA and phenylmethylsulfonyl fluoride or PMSF had no influence on activity, while Ca²⁺ and Zn²⁺ enhanced activity by 15 % and 3.58 %, respectively. SDS caused significant reduction in enzyme activity (41.8 %), while 2,3-butanedione did so moderately (15.9 %). Features of Nocardia sp. MB 36 phytase suggest a potential for animal feed applications.     

木聚糖酶分离纯化技术

木聚糖酶应用广泛,其分离纯化是进行酶学性质研究、分子研究的前提条件,是成功确定氨基酸序列和三维结构的基础。综述微生物木聚糖酶分离纯化的方法,分析了常用方法在其分离纯化中的优缺点;强调了特异性分离纯化技术是高效的分离纯化方法;并对其它方法进行了概括。     

Purification and characterization of an exo-polygalacturonase from the tomato vascular wilt pathogen Fusarium oxysporum f.sp. lycopersici

Abstract An exo-polygalacturonase (EC 3.2.1.15) was purified to apparent homogeneity from cultures of Fusarium oxysporum f.sp. lycopersici on synthetic medium supplemented with citrus pectin, using preparative isoelectric focusing. The enzyme, denominated PG2, had an apparent M _r of 74000 Da upon SDS-PAGE. The pI of the main PG2 isoform was 4.5, and pH and temperature optima were 5.0 and 55 °C, respectively. PG2 hydrolyzed polygalacturonic acid in an exo-manner, as demonstrated by anaysis of degradation products. The enzyme was N-glycosylated. The N-terminal amino acid sequence, L-A-F-N-V-P-S-K-P-P, has no identity to other known polygalacturonases.