CCK－8和NDAP对大鼠脑和脊髓组织c－fos表达的影响

为探讨八肽胆囊收缩素（ＣＣｋ－８）和阿片肽相互作用的分子机理,利用抗体免疫沉淀技术研究了ＣＣＫ－８与ＮＤＡＰ（ｋ阿片受体激动剂）对大鼠脑（去皮层和小脑）和脊髓背柱组织Ｆｏｓ蛋白的影响。结果表明,０．１μｍｏｌ／ＬＣＣＫ－８可显著刺激脑和脊髓组织中Ｆｏｓ蛋白增加（分别是对照组的３．８倍和３．６倍）。相同浓度的ＮＤＡＰ对Ｆｏｓ蛋白的生成亦有一定的诱导作用,分别是对照组的２．７倍和２．６倍。ＣＣＫ－８和ＮＤＡＰ共同处理组织,Ｆｏｓ蛋白生成水平相似（脑）或高于（脊髓）ＣＣＫ~－８单独诱导的水平。结果表明,ＣＣＫ－８和ＮＤＡＰ均可直接诱导大鼠脑和脊髓组织ｃ－ｆｏｓ的表达,它们对ｃ－ｆｏｓ表达的相互作用在脑和脊髓中呈现不同的模式。     

CCK—8和NDAP对大鼠脑和脊髓组织c—fos表达的影响

为探讨八肽胆囊收缩素（ＣＣＫ－８）和阿片肽相互作用的分子机理,利用抗体免疫沉淀技术研究了ＣＣＫ－８与ＮＤＡＰ（κ阿片受体激动剂）对大鼠脑（去皮层和小脑）和脊髓背柱组织Ｆｏｓ蛋白的影响。结果表明,０．１μｍｏｌ／Ｌ ＣＣＫ－８可显著刺激脑和脊髓组织中Ｆｏｓ蛋白增加（分别是对照组的３．８倍和３．６倍）。相同浓度的ＮＤＡＰ对Ｆｏｓ蛋白的生成亦有一定的诱导作用,分别是对照组的２．７倍和２．６倍。ＣＣＫ－８     

α受体激动对绵羊心肌瞬时性内向离子流的影响

用乙酰毒毛旋花子甙元（ＡＳ）０．０５μｍｏｌ／Ｌ诱发绵羊心浦肯野纤维产生稳定的瞬时性内向离子流（Ｉｔｉ）,用普萘洛尔０．５μｍｏｌ／Ｌ阻断β受体,观察α受体激动剂苯肾上腺素（ＰＥ）０．３,１．０μｍｏｌ／Ｌ对Ｉｔｉ幅值与时程的影响。ＰＥ１．０μｍｏｌ／Ｌ灌流２０,５０ｍｉｎ时Ｉｔｉ幅值分别由对照值１２．８±１．９ｎＡ减小至１０．７±１．２ｎＡ（ｎ＝５,Ｐ＜０．０５）与９．６±１．９ｎＡ（ｎ＝５,Ｐ＜０．０１）;ＩｔｉＤ５０时程分别由对照值１４５±２４．４ｍｓ延长至１８３．３±２８．１ｍｓ（ｎ＝５,Ｐ＜０．０５）与２０７．５±３４．２ｍｓ（ｎ＝５,Ｐ＜０．０１）,ＰＥ对Ｉｔｉ的抑制作用呈剂量依赖性与时间依赖性。Ｉｔｉ到达峰值的时间和回复到基线的时间都延长,提示ＰＥ作用下Ｉｔｉ通道动力学发生了变化。如果在β受体激动剂异丙肾上腺素（ＩＳＯ）１．０μｍｏｌ／Ｌ增强Ｉｔｉ的基础上,ＰＥ１．０μｍｏｌ／Ｌ灌流１０ｍｉｎ,对Ｉｔｉ幅值的抑制及时程的延长作用更显著,Ｉｔｉ幅值由对照值１５．６±３．２ｎＡ减小到１０．３±２．２ｎＡ;ＩｔｉＤ５０由９２．５±１４．３ｍｓ延长到１３２．５±３６．０ｍｓ（ｎ＝５,Ｐ＜０．０１）。     

α受体激动对绵羊心脏浦肯野纤维延迟后除极的影响

用乙酰毒毛旋花子成元０．２μｍｏｌ／Ｌ诱发绵羊心脏浦肯野纤维产生延迟后除极（ＤＡＤ）,采用细胞内微电极记录。在用普奈洛尔１．０μｍｏｌ／Ｌ阻断β受体条件下,苯肾上腺素１．０μｍｏｌ／Ｌ使ＤＡＤ幅值由８．１±２．２ｍＶ增至９．５±２．８ｍＶ,时程由２４０±４７ｍｓ延长到２７３±４７ｍｓ（ｎ＝１３,ＰＭ＜０．０１）,ＤＡＤ上升速率由０．０３９±０．０２３Ｖ／ｓ增至０．０５１±０．０２６Ｖ／ｓ（ｎ＝１３,Ｐ＜０．０５）,ＤＡＤ在动作电位后出现的时间提前了３０±４７ｍｓ（ｎ＝１３,Ｐ＜０．０５）。用去甲肾上腺素１．０μｍｏｌ／Ｌ增强ＤＡＤ引起触发活动时,酚妥０拉明１．８μｍｏｌ／Ｌ不能抑制触发活动,普奈洛尔１．０μｍｏｌ／Ｌ能抑制之。上述结果表明α受体激动对ＤＡＤ有轻度增强作用,但由ＤＡＤ引起的触发活动,α受体阻滞剂的抑制作用不如β受体阻滞剂有效。     

逆转录病毒介导CD基因在人结肠癌细胞中表达

构建了含有大肠杆菌胞嘧啶脱氨酶基因（ＥＣ－ＣＤ）的重组逆转录病毒载体ＬＣＤＤＳＮ。经ＰＡ３１７细胞包装后,感染人结肠癌细胞株ＬｏＶｏ。Ｇ４１８筛选得一的稳定表达ＥＣ－ＣＤ基因的细胞克隆ＬｏＶｏ／ＬＣＤＳＮ。ＬｏＶｏ／ＬＣＤＳＮ鹜型ＬｏＶｏ相比,生长曲线无明显差异,细胞形态亦无改变。ＬｏＶｏ／ＬＣＤＳＮ都对５－ＦＵ很敏感（ＩＣ５０约为０．５μｍｏｌ／Ｌ）。表达ＣＤ基因使细胞对基本无毒性的原药５－ＦＣ     

EDRF对PE引起的大鼠主动脉缩血管效应的作用

本文研究ＥＤＲＦ（ｅｎｄｏｔｈｅｌｉｕｍ－ｄｅｒｉｖｅｄｒｅｌａｘｉｎｇｆａｃｔｏｒ,ＥＤＲＦ）对ＰＥ（ｐｈｅｎｙｌｅｐｈｒｉｎｅ）引起的大鼠主动脉收缩反应的影响。内皮完整和去内皮的大鼠主动脉环悬挂于器官浴槽中,测定血管的张力和收缩速度的变化。所有的实验在消炎痛（ｉｎｄｏｍｅｔｈａｃｉｎ,１０μｍｏｌ／Ｌ）存在下进行。用美兰（ｍｅｔｈｙｌｅｎｅｂｌｕｅ,ＭＢ,１０μｍｏｌ／Ｌ）或左旋硝基精氨酸（ＮＧ－ｎｉｔｒｏ－Ｌ－ａｒｇｉｎｉｎｅ,Ｌ－ＮＮＡ,３０μｍｏｌ／Ｌ）处理内皮完整的大鼠主动脉环,ＰＥ的剂量－收缩张力曲线明显左移,ＥＣ３０值均降低５倍,最大反应比率分别为１．６±０．４和１．６±０．５。在去内皮的大鼠主动脉环中,经ＭＢ和Ｌ－ＮＮＡ处理后,仍可见ＥＣ３０下降３倍,最大反应比率均为１．０±０．２。后者可能与血管平滑肌产生少量ＥＤＲＦ有关。我们的结果提示ＰＥ对血管的收缩反应也受血管内皮和平滑肌产生的ＥＤＲＦ的调控     

PKC,PKA和TPK在血小板激活中的作用

利用＾３２Ｐ－ＮａＨ２ＰＯ４标记猪血小板,然后,以ＰＭＡ,凝血酶,ＰＧＥ１腺苷等处理,结果表明,随着ＰＭＡ激活ＰＫＣ,血小板发生聚集,３５μｍｏｌ／ＬＰＧＥ１或１ｍｍｏｌ／ＬｄｂｃＡＭＰ不能抑制５０ｎｍｏｌ／ＬＰＭＡ诱导的血小板聚集,腺苷却能抑制ＰＭＡ诱导的血小板聚集（ＥＣ５０＝０．１ｍｍｏｌ／Ｌ,ｄｂ－ｃＡＭＰ,腺苷都不能抑制１００ｎｍｏｌ／ＬＰＭＡ诱导的４０ｋＤ蛋白磷酸化,ＰＫＡ激活不能抑制Ｐ     

抗真菌蛋白Rs—AFPs基因在大肠杆菌中的表达

将抗真菌蛋白Ｒｓ－ＡＦＰ１和Ｒｓ－ＡＦＰ２全长ｃＤＮＡ插入表达质粒ｐＥＴ－２２ｂ／ＮｃｏＩ＋ＳａｃＩ位点,构建成融合蛋白表达载体ｐＲＡＦ１和ｐＲＡＦ２．将不含信号肽编码序列的Ｒｓ－ＡＦＰ１和Ｒｓ－ＡＦＰ２ｃＤＮＡ分别插入ｐＥＴ－２２ｂ／Ｎｃｏｌ＋Ｓａｃｌ和ｐＥＴ－２２ｂ／Ｎｄｅｌ＋ＳａｃＩ位点,构建成不含信号肽序列的融合蛋白表达载体ｐＲＡＦ３、ｐＲＡＦ４和非融合蛋白表达载体ｐＲＡＦ５和ｐＲＡＦ６．将构建的上述各种表达载体转化Ｅ．ｃｏｌｉＢＬ２１,挑菌落培养,ＩＰＴＧ诱导,使Ｒｓ－ＡＦＰｓ基因得到表达,并用体外抑菌试验检测表达产物的活性,结果表明,各种表达载体的表达产物均具有不同程度的抑菌活性,其中,ｐＲＡＦ３和ｐＲＡＦ４表达产物的抑菌活性较明显．     

运动对大鼠血小板L—精氨酸转运的影响

本工作在游泳大鼠模型上,观察血小板Ｌ－精氨酸（Ｌ－Ａｒｇ）转运特征,并观察凝血酶和ＰＡＦ对血小板Ｌ－Ａｒｇ转运的影响。结果发现,运动大鼠血小板Ｌ－Ａｒｇ转运明显高于未运动对照大鼠,表现在高亲和性最大转运速率（Ｖｍａｘ）明显增高（５０．５６±３．２７ｐｍｏｌ／１０８ｖｓ４５．８４±２．３６ｐｍｏｌ／１０８血小板／ｍｉｎ。Ｐ＜０．０５）,米氏常数亦显著增加（２．１４±０．２３μｍｏｌ／Ｌｖｓ１．４６±０．１３μｍｏｌ／Ｌ,Ｐ＜０．０１）。应用刺激剂凝血酶和ＰＡＦ诱导运动大鼠血小板Ｌ－Ａｒｇ转运速率增加的幅度明显高于未运动对照大鼠（Ｐ＜０．０１）。实验结果表明,运动能增强血小板转运Ｌ－Ａｒｇ的效率。提示,运动可能促进血小板一氧化氮（ＮＯ）生成,抑制血小板聚集,防治血管栓塞性疾病     

长时间给予高选择性δ阿片受体激动剂抑制δ受体mRNA表达

我们采用反转录－聚合酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）方法,观察了δ阿片受体肽类激动剂「Ｄ－Ｐｅｎ＾２．５」ｅｎｋｅｐｈａｌｉｎ（ＤＰＤＰＥ）及非肽类激动剂ＢＷ３７３Ｕ８６对δ受体ｍＲＮＡ表达的影响,并比较了两者作用的差异性。结果如下：（１）ＤＰＤＰＥ作用２４及４８ｈ可使δ受体ｍＲＮＡ表达水平显著降低,则ＢＷ３７３Ｕ８６只在２４ｈ有显著抑制作用;（２）ＤＰＤＰＥ在１０＾－６ｍｏｌ／Ｌ时即可使δ受体的ｍＲＮＡ     

抗癌胚抗原单链抗体基因在家蚕细胞和幼虫中的表达

将抗癌胚抗原（ＣＥＡ）单链抗体基因插入家蚕杆状病毒转移载体ｐＢａｃＰＡＫＨｉｓ, 与修饰的家蚕核型多角体病毒ＢｍＢａｃＰＡＫＤＮＡ共转染家蚕细胞, 经同源重组得到含有在多角体蛋白基因启动子控制下的抗ＣＥＡＳｃＦｖ 基因的重组病毒ＢｍＢａｃＳｃＦｖ。用重组病毒分别感染家蚕细胞和幼虫, 在两者中均得到了高效表达, 产物分子量为２８ｋＤ, 前者占细胞总蛋白的６ ％ , 后者为０ ．３ ｍｇ／ 蚕。目的基因在家蚕细胞和幼虫中表达产物经Ｎｉ２＋ＩＤＡＳｅｐｈａｒｏｓｅ６Ｂ亲和柱纯化, 前者纯度可达９０％ 以上, 后者纯度较低; 纯化后的融合蛋白具有ＣＥＡ 结合活力, 其亲和常数分别为５ ．４×１０８／ｍｏｌ·Ｌ－ １ 和２．３ ×１０８／ｍｏｌ·Ｌ－１ , 略低于其亲本单抗Ｅ７Ｂ１０ ２．７ ×１０９／ｍｏｌ·Ｌ－ １ 。     

神经营养因子GDNF编码顺序的克隆及表达产物的纯化

根据基因库中的顺序,设计了胶质细胞源神经营养因子（ＧＤＮＦ）基因的ＰＣＲ引物,以此从人基因组ＤＮＡ中扩增并克隆了ＧＤＮＦ的编码序列,经ＤＮＡ测序确认后,该片段克隆到表达质粒ｐＥＴ－３ａ中,转化大肠杆菌ＢＬ２１（ＤＥ３）．培养的重组菌经ＩＰＴＧ诱导,在Ｔ７启动子调控下表达出ｈＧＤＮＦ蛋白．经电泳分析表明ＧＤＮＦ主要存在于细菌包涵体中．从培养菌中制备包涵体,经充分洗涤,溶解于含８ｍｏｌ／Ｌ尿素的变性缓冲液中．经ＳＰ－Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ柱层析分离,梯度洗脱,以１５％ＳＤＳ－ＰＡＧＥ检查含ＧＤＮＦ的部分．将含单体ＧＤＮＦ部分进行复性,再次用ＳＰ－Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ离子柱分离同源二体ＧＤＮＦ．最后经ＳＤＳ－ＰＡＧＥ制备电泳纯化,纯度大于９５％．经Ｎ端测序表明序列正确．经测定,每升培养菌可得约１０ｍｇ纯化的ＧＤＮＦ．     

盐生杜氏藻甘油-3-磷酸脱氢酶的分离纯化及其特性的研究

利用ＰＥＧ分级,ＤＥＡＥ离子交换层析,ＢｌｕｅＳｅｐｈａｒｏｓｅ拟亲和层析,ＭｏｎｏＱ离子交换层析等手段,分离纯化盐生杜氏藻（Ｄｕｎａｌｉｅｌａｓａｌｉｎａ（Ｄｕｎａｌ）Ｔｅｏｄ．）甘油三磷酸（Ｇ３Ｐ）脱氢酶（ＥＣ１．１．１．８）,得到比活为１２．６Ｕ／ｍｇ的电泳纯的酶,并对此酶的生化特性进行了研究。４％～２０％非变性聚丙烯酰胺梯度凝胶电泳测得全酶分子量约为２７０ｋＤ,ＳＤＳＰＡＧＥ表明该酶只有一种分子量约为６５ｋＤ的亚基,据此推测该酶应为同四聚体。酶催化磷酸二羟丙酮（ＤＨＡＰ）还原的最适ｐＨ值为７．５,催化Ｇ３Ｐ脱氢的最适ｐＨ值为１０。该酶对４个底物还原型辅酶Ⅰ（ＮＡＤＨ）,二磷酸吡啶核苷酸（ＤＨＡＰ）,辅酶Ⅰ（ＮＡＤ）,Ｇ３Ｐ的表观Ｋｍ值分别为６３μｍｏｌ／Ｌ,２７２μｍｏｌ／Ｌ,１．５３ｍｍｏｌ／Ｌ,６．５２ｍｍｏｌ／Ｌ。该酶在保存过程中易失活。ＮＡＤＨ能降低酶失活的速度,而ＮＡＤ则不然。低浓度ＮａＣｌ对酶略有保护作用,但高浓度ＮａＣｌ加快酶的失活,且浓度越高效应越明显。     

水稻叶片中过氧化氢与核酮糖—1,5—二磷酸羧化酶／加氧酶降解 …

甲基紫精（ＭＶ）处理水稻植株能快速诱导核酮糖－１,５－二磷酸羧化酶／加氧酶（Ｒｒｂｉｓｃｏ,ＥＣ４．１．１．３９）及其它可溶性蛋白的降解。ＭＶ浓度越高,降解速率越高。ＭＶ能诱发叶片内源Ｈ２Ｏ２迅速积累。光合电子传递抑制剂ＤＣＭＵ（１５０μｍｏｌ／Ｌ）能显著抑制ＭＶ（１００μｍｏｌ／Ｌ）诱导的Ｒｕｂｉｓｃｏ及其它可溶性蛋白的降解;活性氧清除剂抗坏血酸（５ｍｍｏｌ／Ｌ）、甘露醇（１０ｍｍｏｌ／Ｌ）、苯     

人IL-2/IFNα2b融合基因在肝癌细胞中靶向表达

 根据细胞因子之间协同作用的特点,采用重组 Ｄ Ｎ Ａ 技术设计并构建了人 Ｉ Ｌ ２ 与 Ｉ Ｆ Ｎα融合基因,并用肝癌组织特异的 Ａ Ｆ Ｐ增强子／ Ａ Ｌ Ｂ启动子调控融合基因在肝癌细胞中的靶向表达．实验结果表明,克隆的 Ｅ Ａ Ｆ Ｐ Ｐ Ａ Ｌ Ｂ联合转录调控序列能调控细胞因子基因在 Ａ Ｆ Ｐ阳性人肝癌细胞中靶向表达, Ｉ Ｌ ２／ Ｉ Ｆ Ｎα２ｂ 融合基因的表达水平与感染肝癌细胞的 Ａ Ｆ Ｐ表达水平呈正相关性．实验证明表达的融合蛋白具有 Ｉ Ｌ ２ 和 Ｉ Ｆ Ｎ 两种生物学活性的细胞因子．这可能为肝癌基因治疗开辟新途径．     

南方鲇碱性磷酸酶的分离纯化及部分性质的研究

用正丁醇抽提,硫酸铵分级沉淀,ＤＥＡＥ－纤维素和ＳｅｐｈａｃｒｙｌＳ－２００柱层析,从南方鲇（Ｓｉｌｕｒｕｓ　ｍｅｒｉｄｉｏｎａｌｉｓ　Ｃｈｅｎ）肠粘膜中提取出碱性磷酸酶（ＡＫＰ）。提纯倍数为３９．５０倍,比活为６８．３５μ／ｍｇ蛋白,提取酶液经ＰＡＧＥ和ＳＤＳ－ＰＡＧＥ只呈现一条区带。该酶的分子量为１３２１４０,Ｎ末端氨基酸为门冬氨酸,最适ｐＨ为１０．１０,７．５＞ｐＨ＞１１．５时不稳定,最适温度为４０℃左右,对热不很稳定,以磷酸苯二钠为底物其Ｋ_ｍ值为１．７２×１０~（－３）ｍｏｌ／Ｌ。Ｍｇ~（２＋）、Ｍｎ~（２＋）为该酶的激活剂,ＫＨ_２ＰＯ_４、Ｌ－ＣｙＳ、ＭＥ、ＤＦＰ、ＥＤＴＡ－Ｎａ_２为抑制剂。选用ＫＨ_２ＰＯ_４和ＤＦＰ作抑制类型的判断,结果表明,ＫＨ_２ＰＯ_４属竞争性掏剂,其抑制常数为２．３ｍｍｏｌ／Ｌ;ＤＦＰ为非竞争性抑制剂,抑制常数为１．０５ｍｍｏｌ／Ｌ。     

牛脑V型质子转运ATP酶复合体依赖于温度的活性变化

在ＫＣ１介质中牛脑Ｖ－型质子转运ＡＴＰ酶复合体活力温度的Ａｒｒｈｅｎｉｕｓ图在３３℃附近呈现明显的折点,同样做其Ｎ－［１－芘］马来酰亚胺（Ｎ－［１－Ｐ］Ｍ）的荧光－温度的Ａｒｒｈｅｎｉｕｓ图,发现其折点温度也为３３℃,当加入１００μｍｏｌ／Ｌ ＮＥＭ（Ｎ－ｅｔｈｙｌｍａｌｅｉｍｉｄｅ）,ＡＴＰ酶复合体活力部分被抑制后的Ａｒｒｈｅｎｉｕｓ图折点下降为２７℃,加入０．７５－０．８５ｍｏｌ／Ｌ尿素则活力     

α_1肾上腺素能受体介导去甲肾上腺素促大鼠培养心肌细胞蛋白质合成效应

在无血清和含１．０％、５．０％血清培养的新生大鼠心肌细胞标本上,去甲肾上腺素（ＮＥ,２．０μｍｏｌ／Ｌ）使细胞蛋白质含量（Ｌｏｗｒｙ法）分别比相应对照组增加４０％、２６％、１９％（Ｐ均＜０．０１）;细胞３Ｈ－亮氨酸参入量与ＮＥ浓度呈正性剂量依赖性,最大效应浓度为２０．０μｍｏｌ／Ｌ;无血清培养体系中,０．２、２．０、２０μｍｏｌ／Ｌ的ＮＥ使参入量分别比对照增加１７．８％、３５３％、３７．７％;１．０％血清培养体系中分别比对照增加１６．２％、２７．９％、３１．６％（Ｐ均＜０．０５）;哌唑嗪（２．０μｍｏｌ／Ｌ）可阻断ＮＥ的促蛋白质合成作用,心得安（２．０μｍｏｌ／Ｌ）则无此效应。提示在无血清或低浓度血清培养体系中,ＮＥ可促进心肌细胞蛋白质合成,增加细胞蛋白质含量,该作用可能是通过α１肾上腺素能受体介导。     

VNP减弱NE刺激的心肌细胞c-fos表达

目的：研究血管利钠肽（ＶＮＰ）对去甲贤上腺素（ＮＥ）刺激的心肌细胞ｃ－ｆｏｓ表达的影响。方法：分离纯化ＳＤ乳鼠心肌细胞,随机分为四组：对照组、ＮＥ组、ＶＮＰ组和ＶＮＰ＋ＮＥ组。以免疫组织化学染色方法观察各组ｃ－ｆｏｓ的表达情况,采用放射免疫方法测定了细胞内ｃＧＭＰ水平。结果：ＮＥ（１０＾－６ｍｏｌ／Ｌ）可以显著升高Ｆｏｓ样免疫阳性细胞数及染色强度（Ｐ〈０．０５,ｖｓ对照组）,ＶＮＰ（１０＾－７ｍｏ     

江浙蝮蛇神经生长因子在大肠杆菌中的表达及纯化

将江浙蝮蛇（ＡｇｋｉｓｔｒｏｄｏｎｈａｌｙｓＰａｌａｓ,Ａ．ｈ．Ｐ．）神经生长因子（Ｎｅｒｖｅｇｒｏｗｔｈｆａｃｔｏｒ,ＮＧＦ）基因克隆于分泌型原核表达载体ｐＥＴ２２ｂ＋,以Ｃ端融合了６个组氨酸的形式在大肠杆菌ＢＬ２１（ＤＥ３）中进行了ＩＰＴＧ诱导表达。ＳＤＳＰＡＧＥ分析确定有一比理论值略大的诱导表达条带,其表达量占全菌蛋白质的２０％左右,且表达蛋白质主要是以包涵体的形式存在。用６ｍｏｌ／Ｌ的盐酸胍溶解包涵体后,利用固定化金属离子（Ｎｉ２＋）配体亲和层析一步纯化目的蛋白质,纯度可达８０％左右。对该重组肽进行变复性研究。利用ＰＣ１２细胞进行生物活力测定,证明表达产物具有ＮＧＦ生物活力。