一种双歧杆菌鉴别计数培养基的研制

目的 研制一种双歧杆菌鉴别计数培养基。方法 研制的改良ＭＲＳ培养基补充了双歧杆菌和乳酸菌需要的特殊营养成分,并依据大多数双歧杆菌具有半乳糖苷酶能特异性水解含半乳糖低聚糖的特征,加入５－溴－４－氯－３－吲哚－β－Ｄ－半乳糖物质,作为底物,使双歧杆菌水解底物释放出吲哚,产生颜色反应。结果 双歧杆菌菌落呈蓝色,乳酸菌一般为白色或淡蓝色。结论 改良ＭＲＳ培养基上的双歧力和乳酸菌菌落有明显的鉴别性,适用于双歧杆菌和乳酸菌联合制剂的菌落计数。     

一种快速检测β－半乳糖苷酶活性的试纸方法

建立了一种检测β-半乳糖苷酶活性的5-溴-4-氯-3-吲哚-β-半乳糖苷(X-gal)试纸方法,其原理在于酶色原底物X-gal在β-半乳糖苷酶作用下产生蓝色5-溴-4-氯-吲哚.此方法X-gal用量少、操作简便、省时.适用于基因克隆的检定.     

人肾细胞癌细胞阳离子脂质体的转染效率

以ＭＴＳ染色法测定实验剂量的Ｌｉｐｏｆｅｃｔｉｎ对细胞的毒性作用,以β－半乳糖苷酶基因为报告基因,通过Ｌｉｐｏｆｅｃｔｉｎ而转染,用Ｘ－ｇａｌ染色法,测定转染效率,结果表明实验剂量（１０μｇ／ｍｌ）的Ｌｉｐｏｆｅｃｔｉｎ对细胞生长无明显毒性。Ｌｉｐｏｆｅｃｔｉｎ对多数肾细胞癌细胞的转染是有效的,且转染效率随Ｌｉｐｏｆｅｃｔｉｎ 度的增高（２．５－１０μｇ／ｍｌ）而增高,说明Ｌｉｐｏｆｅｃｔｉｎ可安     

一种改良大便双歧杆菌计数方法

目的：研制一种大便双歧杆菌鉴别计数培养基。方法：利用大多数双歧杆菌具有半乳糖苷酶且活性较高的特性,在自制改良BS培养基中加入X-Gal(5-溴-4-氯-3-吲哚-β-D-半乳糖苷）作为底物,双歧杆菌水解底物释放出吲哚,产生颜色反应。结果：双歧杆菌菌落呈深蓝色。乳酸菌和其它细菌一般为白色或淡蓝色。结论：自制改良BS培养基上双歧杆菌与乳酸菌及其他细菌菌落有明显的鉴别性。适用于大便双歧杆菌鉴别计数。     

鼠伤寒沙门氏菌嘌呤生物合成的调控研究：VI.超阴遏突变体的分离和遗传 …

从鼠伤寒沙门氏菌的ＴＴ１２３０６（ｐｕｒＤ∷ｌａｃ）株出发,对８６个对数生长期培养物作了诱变处理,在Ｅ＋Ａｄｏ＋Ｘ－ｇａｌ平板上得到６６个独立的白色或浅蓝色菌落,经测定它们在阻遏和去阻遏条件下的β－半乳糖苷酶活性、回复突变频率、突变位点的转导分析和显性实验。证明其中１１株为嘌呤生物合成途径中的超阻遏突变体。     

影响非洲绿猴肾细胞脂质体转染效率的因素

已有实验表明,细胞转染效率可能决定于ＤＮＡ－脂质体复合物的形成以及所转染的细胞种类。利用脂质体ＬｉｐｏｆｅｃｔＡＭＩＮＥ,研究了影响Ｖｅｒｏ细胞转染效率的参数如ＤＮＡ和脂质体的用量,转染的细胞数量以及细胞暴露于ＤＮＡ－脂质体复合物的时间长度。通过检测报告基因β－半乳糖苷酶（β－ｇａｌ）的表达,发现最高转染率只在一较窄范围内获得。β－ｇａｌ的表达随脂质体量增加而显著增加。在标准转染条件下,增加ＤＮＡ用量和延长细胞暴露时间反而使转染效率下降。转染细胞数量为４×１０４细胞／２４孔时,细胞转染效率最高。     

Kl LAC4用作白色念珠菌的报告基因

由于ｌａｃＺ基因在白色念珠菌中不能工作。将克氏酵母的β－半乳糖苷酶基因Ｋｌ ＬＡＣ４构建了能在白色念珠菌中工作的报告基因。Ｋｌ ＬＡＣ４基因融合到白色念珠菌乙醇脱氢酶基因（ＡＤＨ１）的启动子后面,在ＡＤＨ１终止子的共同控制下构建Ｋｌ ＬＡＣ４的表达质粒ｐＹＰＢ１－ＬＡＣ４。ＰＹＯＢ１－ＬＡＣ４转化白色念珠菌并测定了在固体培养基中的β－半乳糖苷酶活性以及在液体增减基的β－半乳糖苷酶活力。结果表明Ｋｌ     

酿酒酵母（Saccharomyces cerevisiae）半乳糖可诱导表达系统特性的研究

把大肠杆菌β－半乳糖苷酶基因克隆到带有酵母半乳糖可诱导启动子ＧＡＬ１的穿梭表达质粒ｐＹＥＳ２中,并把得以的重组质粒分别转化到两种不同遗传性状的宿主菌中,其中一株菌为蛋白酶活性缺失９０％以上的ｐｅｐ４－３突变菌株。通过比较两株重组菌产生的β－半乳糖苷酶活性水平发现在所述实验条件下,蛋白酶缺失突变菌株中产生的β－半乳糖苷酶少水平不仅均要高于另一对照菌株,并且ｐｅｐ４－３突变菌株表现受葡萄糖阻遏的严紧程     

慈菇（Sagittaria safittifolia）α－半乳糖苷酶的纯化与性质

以对硝基苯糖苷基为底物,测定了慈菇的１２种糖苷酶,其中α－甘露糖苷酶、α－和β－半乳糖苷酶活力较高;经硫酸铵分级沉淀,ＳｅｐｈａｄｅｘＧ－１５０分子筛层析,ＣｏｎＡＳｅｐｈａｒｏｓｅ４Ｂ亲和层析,ＤＥＡＥ－ＳｅｐｈａｒｏｓｅＣＬ－６Ｂ离子交换层析,从慈菇抽提液纯化了α－半乳糖苷酶。纯化酶的比活提高１０７２倍,活力回收１５．６％,在圆盘聚丙烯酰胺凝胶电泳和ＳＤＳ－ＰＡＧＥ上均显示１条蛋白质带,在α－半乳糖苷酶浓度为１５０ｍＵ／ｍｌ的溶液中测不到其他糖苷酶的活力。慈菇α－半乳糖苷酶的分子量用ＳｅｐｈａｄｅｘＧ－１００凝胶过滤柱测定或在ＳＤＳ－ＰＡＧＥ上测定均为６０ｋＤ,酶反应的最适ｐＨ在５．８附近,最适温度为６０℃。该酶分解对硝基苯基－α－半乳糖苷的Ｋ＿ｍ值为３．７×１０￣（－４）ｍｏｌ／Ｌ,Ｖ＿ｍ值为２．１×１０￣（－４）ｍｏｌ／Ｌ。银离子、汞离子显著抑制酶活力,Ｄ－半乳糖和密二糖均竞争性地抑制该酶水解对硝基苯基α－Ｄ－半乳糖苷的活力,根据Ｄｉｘｏｎ作图求得其Ｋ＿ｉ值分别为０．９２×１０￣（－３）ｍｏｌ／Ｌ和１．９８×１０￣（－３）ｍｏｌ／Ｌ。２－脱氧－Ｄ－半乳糖和Ｌ－岩藻糖为酶活力的非竞争性抑制剂。化学修饰     

影响非洲猴肾细胞脂质体转染效率的因素

已有实验表明,细胞转染效率可能决定于ＤＮＡ－脂质体复合物的形成以及所转染的细胞种类。利用脂质体ＬｉｐｏｆｅｃｔＡＭＩＮＥ,研究了影响Ｖｅｒｏ细胞转染效率的参数如ＤＮＡ和脂质体的用量,转染的细胞数量以及细胞暴露子ＤＮＡ－脂质体复合物的时间长度。通过检测报告基因β－半乳糖苷酶（β－ｇａｌ）的表达,发现最高转染率在一较窄范围内获得。β－ｇａｌ的表达随脂质体量增加而显著增加。在标准转染条件下,增加ＤＮＡ用     

nutR中的突变对λ噬菌体早期转录抗终止作用的影响

将λＤＮＡ的ｎｕｔＲ序列位置于Ｌａｃ启动子的下游,在ｎｕｔＲ和β－半乳糖苷酶基因（ｇａｌＫ）之间插入λ噬菌体依赖ｒｈｏ的终止子ｔＲｌ,使ｇａｌＫ的表达取决于Ｎ蛋白介导的突变（Ａ－Ｃ,Ｇ－Ｔ,Ｃ－Ａ,Ｃ－Ａ及Ｔ－Ｇ）,结果表明ｂｏｘＡ中有两个碱基（位置２和５）的突变对抗终止作用是至关重要的,使抗终止效率降低了１０倍;而其他位置的改变影响甚微,ｂｏｘＡ的缺失在ｎｕｓ＾＋宿主中使抗终止数率降低了４０％,     

乳酶克鲁维酵母β—半乳糖苷酶的分离纯化及性质研究

乳酸克鲁维酵母经高压破壁后的粗提液,其β－半乳糖苷酶比活力为５．５６ｕ／ｍｇ．经硫酸铵沉淀,丙酮沉淀,ＰＡＰＭＡ－Ａｅｐｈａｒｏｓｅ ４Ｂ柱层析后,乳糖酶比活力达３７０ｕ／ｍｇ,纯化了６６．２倍,ＳＤＳ－ＰＡＧＥ鉴定为一条带,分子量８５０００Ｄａ。酶作用的最适ｐＨ在６．４－６．８之间,最适温度４０℃,５０℃保温１５ｍｉｎ酶活丧失９０％,以邻硝基苯－β－半乳糖苷为底物的米氏常数为２．７８ｍｍｏｌ／Ｌ     

广泛用于基因表达调控研究中的LacZ基因

ＬａｃＺ基因是大肠杆菌乳糖操纵子中的一个基因,１９６９年,美国哈佛大学以Ｂｅｃｋｗｉｔｈ博士为首的研究小组,应用ＤＮＡ分子杂交技术首次分离到该基因。ＬａｃＺ基因编码的ｂｅｔａ－半乳糖苷酶（简称ｂｅｔａ－ｇａｌ）是由４个亚基组成的四聚体,可催化乳糖的水...     

番茄叶片胞外β—N—乙酰氨基已糖苷酶的部分性质研究

用从系统感染ＴＭＶ（ｔｏｂａｃｃｏｍｏｓａｉｃｖｉｒｕｓ）的番茄叶胞外蛋白提取液中纯化的β－Ｎ－酰氨基已糖苷酸为材料,研究了该酶的部分性质,以Ｐ－硝基苯基－Ｎ－乙酰－β－Ｄ－氨基葡萄糖苷（ｐＮＰ－β－Ｄ－ＧＮＡｃ）或Ｐ－硝基苯基－Ｎ－乙酰－β－Ｄ－Ｄ氨基半乳糖苷（ｐＮＰ－β－Ｄ－ＧａｌＮＡｃ）为底物,该酶的最适ＰＨ在４．８－５．０之间,最适温度在４４－４７℃之间,对酶的热稳定性研究表明,温度对酶的     

β—半乳糖苷酶基因在猕猴桃果实成熟过程的表达

从成熟中华猕猴桃果实中克隆以了一个β－半乳糖苷酶基因ｃＤＮＡ片段,其长度为７４７ｂｐ,有一由２４９个氨基酸组成的开放阅读框架它与苹果、 芦笋、绿药椰菜、番匣中β－半乳糖苷酶基因ｃＤＮＡ相应区段的的核同源性为７６．３％～７０．３％,氨基酸同源性为６９．１％～７２．７％,用该片段为探针进行Ｎｏｒｔｈｅｒｎ分析表明,果实采收时,β－半乳糖苷酶ｍＲＮＡ水平最高,随后呈下降变化,同时β－半乳糖苷酶ｍＲＮＡ水     

乳清酸蛋白(WAP)基因调控序列的鉴定及在小鼠乳腺细胞表达LacZ基因的研究

乳清酸蛋白（ＷＡＰ）是小鼠乳中的主要蛋白质．在亚克隆该基因的基础上,对其进行了酶切鉴定,并对该基因５′区进行克隆和序列分析,在核实序列正确后,构建了以其为调控序列,指导β－半乳糖苷酶基因的真核表达质粒,采用直接注射质粒的方法在小鼠乳腺中表达出β－半乳糖苷酶活性,从而证实基因调控序列的功能正确性,可以用于转基因动物乳腺表达研究,同时证实该方法可以作为一种暂时性表达载体的验证方法．     

慈菇（Sagittaria safittifolia）α—半乳糖苷酶的纯化与性质

以对硝基苯糖苷基为底物,测定了慈菇的１２种糖苷酶,其中α－甘露糖苷酶,α－和β－半乳糖苷酶活力较高,经硫酸铵分级沉淀,ＳｅｐｈａｄｅｘＧ－１５０分子筛层析,ＣｏｎＡ－Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ４Ｂ亲和层析,ＤＥＡＥ－ＳｅｐｈａｒｏｓｅＣＬ－６Ｂ离子交换层析,从慈菇抽提液纯化了α－半乳糖苷酶,纯化酶的比活提高１０７２倍,活力回收１５．６％,在圆盘聚丙烯酰胺凝胶电泳和ＳＤＳ－ＰＡＧＥ上均显示了１条蛋白质带,在     

人乳头瘤病毒6b型H增强子样序列在大肠杆菌中增强基因转录和β-干扰素表达

将人乳头瘤病毒６ｂ型（ＨＰＶ６ｂ）基因组上游调控区（ＵＲＲ）５４０ｂｐ的Ｓａｕ３Ａ－ＮａｒＩ片段（Ｈ序列）,正反向插入β－干扰素表达载体Ｔｒｐ启动子上游,使β－ＩＦＮ表达明显增强,可使基因表达水平提高３．６倍（正向）和２．１倍（反向）。Ｈ序列正反向插入增强子检测载体不仅使β－半乳糖苷酶表达活性增加５－１０倍,还能使半乳糖苷酶ｍＲＮＡ量明显增高,证明Ｈ序列对被调控基因的增强作用是发生在转录水平。     

酿酒酵母（Saccharomyces cereuisiae）基因启动子的分离和鉴定

肜动子探针载体ｐＦＲ１０９从酿酒酵母总ＤＮＡ中克隆到多个启动子片段,它们在大肠杆菌中均能启动β－半乳糖苷酶基因因的表达。对其中Ｙ８片段的进一步分析结果表明：该片段不仅来自酿酒酵母基因组,而且是以多拷贝的形式存在。当Ｙ８片段再次转入供体酵母时它仍能动β－半乳糖苷酶基因表达,但经次克隆去牛Ｙ片段５端部分顺序后,它就失去了启动子的功能。     

番茄叶片胞外β-N-乙酰氨基己糖苷酶的部分性质研究

用从系统感染ＴＭＶ（ｔｏｂａｃｃｏ ｍ ｏｓａｉｃ ｖｉｒｕｓ）的番茄叶胞外蛋白提取液中纯化的β－Ｎ－乙酰氨基己糖苷酶为材料,研究了该酶的部分性质。以ｐ－硝基苯基－Ｎ－乙酰－β－Ｄ－氨基葡萄糖苷（ｐＮＰ－β－Ｄ－ＧｌｃＮＡｃ）或ｐ－硝基苯基－Ｎ－乙酰－β－Ｄ－氨基半乳糖苷（ｐＮＰ－β－Ｄ－ＧａｌＮＡｃ）为底物,该酶的最适ｐＨ在４．８—５．０ 之间,最适温度在４４—４７℃之间。对酶的热稳定性研究表明,温度对酶的热变性作用表现为两相变性曲线,Ｋｍ 值分别为０．３６ ｍ ｍ ｏｌ／Ｌ （ｐＮＰ－β－Ｄ－ＧｌｃＮＡｃ为底物）和０．６７ ｍ ｍ ｏｌ／Ｌ （ｐＮＰ－β－Ｄ－ＧａｌＮＡｃ 为底物）,Ｎ－乙酰氨基葡萄糖（ＧｌｃＮＡｃ）和Ｎ－乙酰氨基半乳糖（ＧａｌＮＡｃ）是酶活性的竞争性抑制剂,Ａｇ＋ 和Ｈｇ２＋ 是酶活性的强抑制剂,金属离子Ｆｅ２＋ 、Ｆｅ３＋ 和Ｃｕ２＋ 也抑制酶活性。