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相似文献
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1.
修饰SOD及未修饰SOD的稳定性比较研究   总被引:1,自引:0,他引:1  
测定了分子修饰SOD的酶活力及其在不同温度下的稳定性,与未修饰的SOD进行了比较,对在不同温度下测定的结果进行数据处理,经推算得出分子修饰SOD在25℃条件下,保存95%的酶活力达3.5年,保存90%的酶活力达7.2年,未修饰SOD在25℃条件下,保存95%的酶活力为103d,保存90%的酶活力为213d。  相似文献   

2.
报道了用以环氧乙烷为活性基的多孔颗粒状载体(Eupergit-C)制备固定由巨大芽孢杆菌(B.megaterium)产生的青霉素酰化酶的研究。用已二胺,赖氨酸对载体进行化学修饰后制备固定化酶,获得了较好的固定结果。用未修饰的载体制备固化酶,经24h固定反应,酶活力达176.5IU/g(wet),酶活力总叫率达53.7%,酶蛋白的固定量为19=7mg/g(dr),酶蛋白的固定效率达87.5%。游离酶的酶浓度对制备固定化酶的活力无显影响。当加酶量从312IU/g(dry)上升到6250IU/g(dry)时,固定化酶活力从89IU/g(wet)上升到475IU/g(wet),总收率和固定化效率分别从99%和99%下降到26.5%和32.5%,酶蛋白的固定量从6.9mg/g(dry)上升到112mg/g(dry),酶蛋白的固定效率从99%下降至80.5%。以酶活力为155IU/g(wet),酶蛋白固定量为22mg/g(dry)的固定化酶水解青霉素G钾盐,经过20批循环水解后,剩余酶活力为92.5%。  相似文献   

3.
用马来酸酐及环己二酮分别对天花粉蛋白上的Lys,Arg残基侧链进行修饰,并以竞争性酶免疫测定检查了化学修饰对TCS与小鼠抗TCS单抗TE-1(IgE)反应活性的影响。两种修饰均使TCS与单抗TE-1反活性下降,推测Lys残基可能直接参了与单抗TE-1的结合,热变性实验提示TCS上单抗TE-1识别部位需要一定的空间构象。  相似文献   

4.
α-天冬氨酰二肽酶基因的高表达和产物回收   总被引:2,自引:0,他引:2  
构建了α天冬氨酰二肽酶基因(pepE)与载体pBV220连接的高表达重组质粒(pBVPEP,4337bp)。转化大肠杆菌后,目的基因表达为两种形式的产物,即细胞质中可溶性蛋白(~75%)和包含体蛋白,共占细菌总蛋白的30%左右。SDSPAGE分析温敏诱导的表达蛋白,可以观察到约27kDa的高表达蛋白条带,与提纯的酶带一致。用不同于以往的萃取包含体蛋白的方法,回收了包含体中95%以上的表达蛋白。  相似文献   

5.
高等植物光系统Ⅱ(PSⅡ)中膜结合的33kD外周蛋白对锰分子簇的稳定及PSⅡ高放氧活力的维持具有重要意义。本文通过NBS对菠菜33kD蛋白中唯一的色氨酸残基(近C端241Trp)的修饰研究了该残基在光合放氧系统中的作用。结果表明241Trp位于33kD蛋白内部的疏水区。修饰后的33kD外周蛋白对PSⅡ颗粒的重组能力减弱。部分重组上经NBS修饰的33kD蛋白的PSⅡ颗粒放氧活力得不到恢复。表明241Trp对33kD蛋白与PSⅡ的结合及功能的实现有着特殊意义。  相似文献   

6.
用马来酸酐及环己二酮分别对天花粉蛋白上的Lys、Arg残基侧链进行修饰,并以竞争性酶免疫测定检查了化学修饰对TCS与小鼠抗TCS单抗TE-1(IgE型)反应活性的影响。两种修饰均使TCS与单抗TE-1反应活性下降。推测Lys残基可能直接参予了与单抗TE-1的结合。热变性实验提示TCS上单抗TE-1识别部位需要一定的空间构象。  相似文献   

7.
天花粉蛋白基因的克隆及序列分析   总被引:7,自引:0,他引:7  
本文应用DNA多聚酶链式反应(PCR)技术,从括楼基因组DNA中扩增并克隆了天花粉蛋白(TCS)基因。核酸序列分析结果表明,克隆片段包括TCS的前原蛋白的编码序列和5'一侧翼区段。其编码序列与已发表的不同来源的3种TCS基因的核苷酸序列的同源性分别为99.20%,98.74%和98.64%。推导出的氨基酸序列与已发表的4种TCS的氨基酸序列的同源性分别为98.62%、98.62%、97.41%和9  相似文献   

8.
限制性内切酶及其它DNA与RNA修饰酶是分子克隆技术的基本工具。1限制性内切醉和DNA甲基化酶限制性内切酶能特异地结合于一段被称为限制性内切酶识别序列的特定的DNA序列或附近的序列,并在此切割DNA双链。它可以分成3类:Ⅰ类和Ⅲ类在同一蛋白分子中兼有修饰(甲基化)作用及依赖于ATP的限制(切割)活性。Ⅰ类酶结合于识别序列,但随机切割DNA;Ⅲ类酶能在识别序列位点切割DNA。在分子克隆中1类和皿类酶都不常用。D类限制一修饰系统限制性内切醇和修饰(甲基化)酶不在同一蛋白分子中,限制性内切酶能专一地切割识别序列,并不依…  相似文献   

9.
基因工程表达产物的体外酰胺化加工   总被引:5,自引:0,他引:5  
以C端为甘氨酸的修饰型人降钙素(mhCT-Gly)的融合蛋白为底物和利用重组酰胺化酶,研究建立基因工程表达产物的体外酰胺化加工系统。首先,人工合成mhCT-Gly基因,并构建其融合表达质粒pGEXCT,在大肠杆菌中获得了高效表达并通过新和层析分离纯化获得谷胱甘太S-转移酶(GST)融合蛋白(GST-mhCT-Gly)。同时,从稳定表达在鼠酰胺化酶的CHO细胞株中制备了重组酶腕化酶。然后,利用此重组  相似文献   

10.
利用离子交换和分子筛层析技术从拟康氏木霉S-38固态发酵液中提纯了两个内切葡聚糖苷酶组分。测定了一个组分的内源荧光性质。结果表明:该酶分子的内源荧光几乎都来自色氨酸。N-溴代琥珀酰亚胺(NBS)修饰导致了酶活力的完全丧失,但是酶荧光残留了25%,抑制剂纤维二糖与酶结合可使部分酶荧光得到保护,同时这种结合也可以保护一定的色氨酸荧光不被外来淬灭剂淬灭。  相似文献   

11.
内切葡聚糖苷水解酶的分离纯化和内源荧光性质   总被引:2,自引:0,他引:2  
利用离子交换和分子筛层析技术从拟康氏木霉S-38固态发酵液中提纯了两个内切葡聚糖苷酶组分.测定了一个组分的内源荧光性质,结果表明:该酶分子的内源荧光几乎都来自色氨酸.N-溴代琥珀酰亚胺(NBS)修饰导致了酶活力的完全丧失,但是酶荧光残留了25%,抑制剂纤维二糖与酶结合可使部分酶荧光得到保护,同时这种结合也可以保护一定的色氨酸荧光不被外来淬灭剂淬灭.  相似文献   

12.
应用多聚酶链反应(PCR),直接从SIV感染的猴艾滋病(SAIDS)模型猴的外周血淋巴细胞总DNA中扩增出767bp的SIV核心蛋白P27基因片段。扩增产物经EcoRI及SalI双酶切后,克隆入相同酶切的表达质粒pBV220中,获得含SIV核心蛋白基因片段的重组质粒pBVSG,并进行DNA序列分析。用该重组质粒转化大肠杆菌DH5a经筛选、增殖及42℃温度诱导,SDS-PAGE表明外源基因表达蛋白含量占菌体总蛋白14.5%,Western-blot证实表达产物能被SIVP27单克隆抗体及SAIDS模型猴血清中特异性抗体识别。  相似文献   

13.
采用cDNA-PCR技术,从人胎盘cDNA文库DNA中克隆了人碱性成纤维在子(hbFGF)基因,用PCR突变法对其5&端序列进行修饰,奖天然和修饰后的hbFGF基因分别克隆至表达载体pBV221,免疫抑迹和SDS-PAGE结果证明,经修饰后的基因在大肠杆菌DS5α中获得了表达,表达量占菌体总蛋白9%。  相似文献   

14.
减蛋综合征病毒100K蛋白基因的克隆与序列分析   总被引:2,自引:0,他引:2  
用常规方法提取减蛋综合征病毒(EDSV)中国分离株(AA2株)病毒DNA,分别构建了限制性内切酶HindⅢ、SphⅠ、PstⅠ水解片段的全基因文库,并对其中100K蛋白基因的序列进行了分析。EDSV100K蛋白基因位于减蛋综合征病毒基因组55.7~64.8物理图谱单位(m.u),共2091个核苷酸(nt),其编码产物由696个氨基酸(aa)组成,推测其分子量为77.7kD。编码蛋白氨基酸同源性分析表明,EDSV100K蛋白与人腺病毒(Ad2、Ad5、Ad12、Ad41)、Ⅰ群禽腺病毒(CELO和FAV10)的同源性为32.3~34.4%之间,而与羊腺病毒(OAV)的同源性达到56.4%。  相似文献   

15.
文摘     
基因工程970082用修饰的色氨酸酶启动子指导大肠杆菌高水平表达外源蛋白[会,英]/Sitney,K.C…//Ann.N.Y.Aead.Sci.-1996,782.-297~310[译自DBA,1996,15(21),96—12079]优化了不依赖温度的色氨酸酶启动子(plnaA)以用于在大肠杆菌中生产重组蛋白。该启动子在所有生理相关温度(20~42℃)下起作用。在低于37℃下的诱导作用可避免引发热休克反应,有利于可溶性蛋白质生产。用含有分解代谢物激活蛋白(CAP)结合位点,但不含色氨酸效应元件…  相似文献   

16.
在氰基硼氢化钠存在下用乙醛酸修饰含铁超氧化物歧化酶(Fe-SOD)的氨基可使酶的热稳定性显著提高,酶在80℃时的半寿期增加一倍。  相似文献   

17.
C6大白鼠神经胶质瘤细胞HSP68的修饰和降解分析   总被引:7,自引:0,他引:7  
本文用蛋白水解酶复性电泳、放射自显影和Western印迹等方法分析C6细胞HSP68在体内、外修饰和降解表明:(1)C6细胞的中性蛋白水解酶几乎不参与HSP68降解;(2)HSP68降解涉及到胞液ATP结合蛋白水解酶和溶酶体酸性蛋白水解酶,其中,ATP结合蛋白水解酶在起动HSP68降解和把HSP68降解成多肽大片段方面起重要作用,溶酶体酸性蛋白水解酶主要参与把多肽大片段彻底降解;(3)热休克诱导H  相似文献   

18.
国产硅藻土经氢氧化铵处理后可用于从发酰液中直接取青霉素G酰化酶,平均吸附量为90U/g。吸附的酶可用22%硫酸铵-0.3mol/LPBS(pH8.0)溶液洗脱。平均比18U/18Umg蛋白(NIPAB法)。硅藻土可反复使用。苯乙酰胺-Sepharose4B树脂可对酶作进一步的纯化。  相似文献   

19.
NBS修饰^241Trp对33kD外周蛋白与PSⅡ的结合及放氧活 …   总被引:1,自引:0,他引:1  
高等植物光系统Ⅱ(PSⅡ)中膜结合的33kD外周蛋白对锰分子的稳定及PSⅡ高放氧活力的维持具有重要意义。本文通过NBS对菠菜33kD蛋白中唯一的色氨酸残基(近C端^241Trp)的修饰研究了该残基在光合放氧系统中的作用。  相似文献   

20.
通过全化学法按大肠杆菌密码偏性合成了乙肝炎病毒(HBV)前S2抗原(PreS2)抗原决定簇基因,与霍乱毒素B亚基基因的3’端融合。重组质粒转化大肠杆菌后融合基因得到高效表达,表达量达30μg/mL,表达产物95%以上分泌到胞外。表达的融合蛋白能与神经节苷脂GM1结合,说明融合蛋白保持了霍乱毒素B亚基(CTB)的基本高级结构和生物学功能;酶联免疫吸附实验证明融合蛋白具有CTB和HBVPreS2的抗原性;应用亲和层析纯化后得到了电泳纯融合蛋白制品,为研究融合蛋白免疫原性并进一步构建基因工程肽苗奠定了基础。  相似文献   

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