胎盘型谷胱甘肽S－转移酶基因在胃癌中的表达

用Dig-GST-πcDNA探针分子杂交方法,检测了正常胃组织、胃癌及相应癌旁正常组织中GST-πDNA和GST-πRNA水平.发现GST-πDNA水平没有明显变化,而CST-πRNA在8例胃癌组织中有6例高于正常胃组织,在12例低分比腺癌中有7例癌旁正常组织高于相应癌组织.表明GST-π基因表达增加与胃癌有关,而且早于细胞形态的变化.     

谷胱甘肽S－转移酶基因P1的研究进展

谷胱甘肽S－转移酶P1－1在癌变细胞和抗药性肿瘤细胞中表达水平发生变化,提示可以作为恶性转化及肿瘤抗药性的标志物．对大鼠谷胱甘肽S－转移酶P1基因上游调控序列的研究发现在－2.5kb及－2.2kb各存在一增强子序列GPEⅠ,GPEⅡ,－400bP存在一沉寂子．GPEⅠ、沉寂子上均至少结合有3种反式作用因子．人谷胱甘肽S－转移酶P1基因上游区域中迄今尚未发现增强子或沉寂子,但却发现了胰岛素及视黄酸的应答序列,在癌变细胞和抗药性的肿瘤细胞中该基因表达的调控机制有别于正常细胞．     

胎盘型谷胱甘肽S-转移酶研究新进展

主要介绍了近年来关于胎盘型谷胱甘肽S-转移酶的生化特性、基因结构和调节、在癌及癌前病变中的表达以及与肿瘤细胞耐药性关系研究的新进展。     

GSTs同工酶基因在乳腺癌中的扩增与基因的表达

采用ＤＮＡ和ＲＮＡ的斑点杂交分析方法,对３２例乳腺癌和相应的癌旁正常组织中ＧＳＴ－π,ＧＳＴ－α和ＧＳＴ－μ基因的ＤＮＡ扩增和ＲＮＡ转录表达情况进行研究,发现ＧＳＴ－π在乳腺癌中存在基因扩增和明显的ｍＲＮＡ表达升高,ＧＳＴ－π基因表达调控主要在转录水平进行了;ＧＳＴ－α和ＧＳＴ－μ在乳腺癌中表达水平较低,但仍可见α和μ类ＧＳＴ同工酶ｍＲＮＡ转录在肿瘤和正常组织中发生了较大的变化。结合乳腺癌中雌激素     

性激素对大鼠诱发肝癌中胎盘型谷胱甘肽S-转移酶(GST-P)表达的影响

本实验利用Solt-Farber顺序诱发大鼠肝癌,观察肝组织中GST活性及GST-P含量在化学诱癌中的变化,并观察性激素对大鼠化学诱发肝癌的早期病变中GST-P表达的作用。结果显示无论是GST活性或GST-P的含量,在诱癌至第三周开始升高,第五周升至最高。利用此模式,选择诱癌至第五周,免疫组化法检测各种处理后肝组织中GST-P的表达。发现睾丸假切除的雄性大鼠经化学诱癌后,肝中有高的GST-P表达,睾丸假切除的雄性大鼠诱癌合并雌二醇处理,明显降低肝组织GST-P阳性灶的面积和数量;合并睾丸酮处理,虽减少GST-P阳性灶的面积,但其数量略有升高。与睾丸假切除后诱癌的雄性大鼠相比,切除睾丸的大鼠经诱癌,有更低的GST-P阳性灶的面积;睾丸切除合并雌二醇处理,GST-P阳性灶的面积进一步降低。与仅化学诱癌的卵巢假切除雌性大鼠比,卵巢切除鼠诱癌后,GST-P阳性灶的面积稍有增加;对卵巢切除合用睾丸酮的大鼠诱癌,阳性灶的面积进一部增加。无论性腺切除与否,雄性大鼠比雌性大鼠有更高的GST-P表达。这些结果提示雌激素可抑制而雄激素则可促进化学诱癌大鼠肝中GST-P的表达。这一结果可能与临床上男性较女性易患肝癌有关。     

人胎盘谷胱甘肽S-转移酶的纯化和性质

将人胎盘组织粗匀浆经105000×g超速离心后,用S-已基谷胱甘肽-琼脂糖-6B亲和层析一步纯化法获得电泳纯的人胎盘GST(简称GST-π)。其比活性较粗匀浆高194.7倍,回收率为50％。再经DE_(52)交换柱进一步纯化,用KCl浓度梯度洗脱后为单一锐峰,等电聚集电泳呈一条带,等电点(pI)为4.60。GST-π经TSKgel-G3000SW柱高效液相层析,也为单一对称锐峰,测得其分子量为45.2kD;在SDS-PAGE电泳也为单一区带,测得其亚基单位的分子量为22.5kD。GST-π氨基酸组成分析可检出十六种氨基酸,其中以谷氨酸、亮氨酸、丙氨酸、天冬氨酸及甘氨酸含量较高。 GST-π酶动力学研究证明GST-π以GST和CDNB为底物时km值分别为0.16mmol/L和0.55mmol/L,经测定表明,GST-π的最适作用pH值为7.5,在pH6.5—9的范围内较为稳定,体外GST-π在温度超过25℃对容易失活。以GST-π为抗原,得到兔抗人GST-π抗血清,其效价为1:32,与人肝GSTs不发生免疫交叉反应。     

人胎盘型谷胱甘肽S-转移酶的ELISA及用于肝癌的诊断

从人体胎盘提纯GST-π,制备兔抗GST-π血清,纯化其IgG,并降解成Fab′片断,通过SMCC与HRP交联成Fab′-HRP,用于夹心ELISA以测定GST-π,灵敏度可达11pg,超过国外的放射免疫法。用此法测定正常人血清GST-π为1.06±0.94ng/ml,原发性肝癌血清较正常高20倍以上。阳性率达90％左右。     

谷胱甘肽S-转移酶的诱导表达及提纯

含有日本血吸虫谷胱甘肽S -转移酶基因的质粒 pGEX - 5X - 1在大肠杆菌BL2 1 (DE3)菌株中得到表达。 37℃[1 ]下用 1 %乳糖诱导谷胱甘肽S -转移酶 (GST)的最适表达时间为 3h。盐析粗提酶液并以Habig法[2 ] 监测GST的活性 ,用pH6 .0 ,饱和度为 30 %硫酸铵去除杂蛋白 ,并调 pH7.5 ,饱和度 70 %硫酸铵使GST大量析出并保持活性。用透析法脱盐 ,并用Sephadex -G5 0凝胶对GST进行了初步纯化。初步探讨了GST的保存方法     

甘薯谷胱甘肽-S-转移酶基因在胁迫条件下的表达分析

成功地构建了甘薯谷胱甘肽-S-转移酶基因IBGSTU1 的原核表达质粒pET-IbGST, 并在大肠杆菌 BL21(DE3)中进行IPTG 诱导表达。重组蛋白部分以包涵体形式存在, 部分以可溶性蛋白形式存在。酶活性测定表明可溶的重组蛋白具有GST的活性。纯化的重组蛋白质用于多克隆抗体的制备。半定量RT-PCR 和 Western blotting 分析结果显示, 在正常的生长条件下, 甘薯组织不启动IBGSTU1 基因的转录和翻译, 但是在冷胁迫或重金属离子等的作用下, 可以检测到该基因的mRNA和编码的蛋白质, 表明该基因在甘薯的胁迫耐受中行使重要功能, 并发现该基因的表达具有组织特异性。     

日本血吸虫28kDGST基因在家蚕细胞和幼虫中的表达

应用修饰的家蚕核型多角体病毒为载体在家蚕细胞和幼虫中表达日本血吸虫中国大陆株２８ＫＤ胱甘肽Ｓ－转移酶基因。Ｓｏｕｔｈｅｒｎ杂交证实该基因被插入到病毒基因组中的正确位置。在家蚕培养细胞中的产量为０．７７ｍｇ,在家蚕幼虫中则超过５ｍｇ／条蚕。     

高效液相层析法纯化人胎盘谷胱甘肽硫转移酶

足月分娩的新鲜胎盘组织制成匀浆后,经高速离心、超速离心,谷胱甘肽(GSH)Sepharose 6B亲合层析,Amicon pM-10膜超过滤及高效液相层析,最终经SDS-PAGE鉴定,结果呈现单一亚基区带,其亚基分子量为25000。 根据我们现有高效液相设备条件,用ODS柱代替RadulovicL等报道的特异阴离子柱,用磷酸盐洗脱液代替含谷胱甘肽、二硫苏糖醇及氯化钾的梯度洗脱液,从人胎盘组织成功地制备了谷胱甘肽硫转移酶(GST)纯酶,全过程在15min内完成,保留时间及主峰面积的重复性均较理想,7次实验结果的变异系数为0.2％,最终纯化578.9倍。本研究为各种形式GST的纯化制备提供了一个新的、重复性好、分辨率高及回收理想的简易方法。     

人胎盘谷胱甘肽S-转移酶动力学及抑制剂的研究

研究了人胎盘型谷胱甘肽S-转移酶(GST-π)的动力学。底物GSH和1-氯-2,4-二硝基苯(CDNB)的km分别为0.109和0.870mmol/L。苯唑青霉素和先锋霉素Ⅰ能抑制GST—π,以先锋霉素较明显,属非竞争性抑制。溴磺酜对CDNB也是非竞争作用,但胆红素则对CDNB竞争而对GSH非竞争地抑制酶活力。S-正辛烷和S-正已烷谷胱甘肽与GSH竞争而与CDNB非竞争地抑制GST-π。已充分证明GST-π所催化的双底物反应属随机顺序机制。化学修饰实验发现:巯基、胍基、氨基、羧基和吲哚基可能参与酶活性中心的组成。