产β-内酰胺酶鲍曼不动杆菌基因型研究

目的了解临床科室分离的鲍曼不动杆菌耐药状况并分析多重耐药株产β-内酰胺酶基因型,为有效的临床治疗和医院感染控制提供实验室依据。方法采用纸片扩散（K-B）法测定临床分离的312株鲍曼不动杆菌对13种抗菌药物的敏感性,对其中120株多重耐药株用聚合酶链反应（PCR）扩增β-内酰胺酶基因,并对其扩增产物进行基因测序。结果鲍曼不动杆菌对美洛培南、亚胺培南、头孢哌酮/舒巴坦和替卡西林/克拉维酸的耐药率分别为0.0%、1.0%、30.8%和31.4%,其余抗菌药物耐药率在38.5%-80.1%;120株多重耐药菌株中,β-内酰胺酶基因分布AmpC型基因阳性率为66.7%（80/120）、SHV-12型基因阳性率为14.2%（17/120）,PER-1型基因阳性率为16.7%（20/120）,CTX-M-9型基因阳性率为8.2%（10/120）,TEM-1型基因阳性率为9.2%（11/120）;VER-1,CTX-M-1,CTX-M-2,OXA型均阴性。同时携带2种基因型有16株,携带3种基因型有14株。结论临床分离的鲍曼不动杆菌流行株主要是产AmpC酶,且呈多重耐药。     

大肠杆菌中一种新类型的超广谱β—内酰胺酶

出现于北京协和医院的一耐头孢噻甲羧肟的临床分离菌株大肠杆菌(E.coli 5518),含有一约7.5kb的耐药质粒,编码产生一种新类型的超广谱β-内酰胺酶(ESbla).除了头霉甲氧噻吩和亚胺硫霉素外,产酶菌株对所测定的多种β-内酰胺类药物都耐药.该菌株耐β-内酰胺类药物的特性可接合传递给E.coli JP559菌株,与之一起转移的还有耐氨基糖甙类和磺胺类药物的特性.β-内酰胺酶抑制剂棒酸能抑制此酶的活性.此ESbla基因既不与SHV-1也不与TEM-1的结构基因片段杂交.     

沈阳市售乳制品中β-内酰胺酶残留状况初探

目的 调查沈阳市售乳制品中添加生鲜牛乳抗生素分解剂β-内酰胺酶的情况.方法 按照卫生部颁发的“乳及乳制品中舒巴坦敏感β-内酰胺酶类药物检验方法——杯碟法”检测.结果 七个品牌的乳制品样品50份中共有四个品牌19份样品中检出β-内酰胺酶,检出率达到38％.结论 沈阳市售乳制品中不仅检测出β-内酰胺酶,且添加率较高.希望引起政府相关部门的重视,建议修订相关国家标准,改进检测方法,加大监管力度.     

多聚酶链反应技术在细胞β—内酰胺酶研究方面的应用

多聚酶链反应（ＰＣＲ）是体外酶促扩增特异ＤＮＡ片段的一种技术,具有特异性强、敏感度高、简便、快速等优点。本文就ＰＣＲ在细菌β－内酰胺酶研究方面的应用作一综述。     

儿童呼吸道流感嗜血杆菌分离株耐药性与β-内酰胺酶基因研究

目的 调查儿童呼吸道流感嗜血杆菌分离株的耐药性和产β-内酰胺酶情况,研究分离株β-内酰胺酶基因的特征.方法 2011年1月到2012年6月,从儿童呼吸道分离流感嗜血杆菌,用微量肉汤稀释法测定常用抗生素最低抑菌浓度;用Nitrocefin纸片法检测β-内酰胺酶;用PCR扩增结合限制性内切酶酶切分析对分离株β-内酰胺酶基因进行分型;比较TEM+菌株和ROB-1+菌株、TEM-1+菌株和TEM-2+菌株对常用抗生素的耐药性.结果 537株流感嗜血杆菌的β-内酰胺酶产酶率为52.3％(281/537);产酶株对氨苄西林、头孢克洛、头孢呋辛的MIC50、MIC90和耐药率明显高于非产酶株(P＜0.05);产酶株TEM基因阳性率为91.8％(258/281),其中90.3％为TEM-1型(233/258),7.4％为TEM-2型(19/258),ROB-1基因阳性率为8.2％(23/281);ROB-1+菌株对氨苄西林和阿莫西林/克拉维酸的MIC50和MIC90高于TEM+菌株,但头孢菌素类的MIC50和MIC90低于TEM+菌株;除头孢呋辛外,TEM-1+菌株和TEM-2+菌株对β-内酰胺类的MIC50和MIC90差异无统计学意义.结论 成都地区儿童呼吸道流感嗜血杆菌分离株β-内酰胺酶产酶率较高,产酶株主要携带TEM-1基因,对氨苄西林、头孢克洛和头孢呋辛等β-内酰胺类的影响明显.     

产β-内酰胺酶金黄色葡萄球菌的耐药分析

目的对产β-内酰胺酶金黄色葡萄球菌的标本分布和药物敏感试验进行分析,为临床使用抗生素提供依据。方法按照《全国临床检验操作规程》的要求接种．对分离出的220株金黄色葡萄球菌（Sta phylococcs aureus,Sau）,用头孢菌素显色法测定其β-内酰胺酶。结果220株金黄色葡萄球菌中产β-内酰胺酶171株,产酶率为77．7％,产酶株除对万古霉素、替考拉宁、利福平及复方新诺明敏感外,对其它的抗生素均呈现不同程度耐药,其中青霉素G、氨苄西林耐药率均为99．4％,红霉素为86．1％。结论产β-内酰胺酶株对青霉素类、大环内酯类抗生素呈现高度耐药,临床治疗不宜使用此类抗生素,提示临床选择药物时,应在药敏试验的指导下合理选择抗生素。     

产超广谱β-内酰胺酶细菌感染临床流行病学

目的:了解产超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)肺炎克雷伯菌(Kpn)和大肠埃希菌(Eco)感染的影响因素.方法:根据我院实验室登记的各种标本中细菌培养的阳性报告,回顾调查了1999年2月～2000年12月在我院住院的201份病历.结果:201份病例送检的标本中,检出产ESBLs细菌76株,检出率37.8%(其中Kpn 25株,Eco 51株).非产ESBLs细菌为125株(其中Kpn 24株,Eco 101株).多因素分析结果表明侵袭性操作、第三代头孢菌素及其他β-内酰胺类药物的应用、医院感染为产生ESBLs肺炎克雷伯菌和大肠埃希菌感染的危险因素(OR值分别为2.314、3.433、2.276、2.665);而基础疾病、免疫抑制剂、喹诺酮类药物的应用,与产ESBLs肺炎克雷伯菌和大肠埃希菌感染无统计学意义(P＞0.05).结论:影响产ESBLs菌感染的临床危险因素为第三代头孢菌素及其他β-内酰胺类药物的应用、医院感染、侵袭性操作.     

肠杆菌科细菌产金属β-内酰胺酶的研究进展

肠杆菌科细菌是社区获得性感染和院内感染的重要病原菌,近年来由于抗生素的大量、不合理使用,导致临床肠杆菌科细菌耐碳青霉烯类抗生素情况日趋严重,其中产金属β-内酰胺酶是导致细菌耐药的主要机制之一.本研究就对碳青霉烯类抗生素耐药的肠杆菌科细菌产生的金属β-内酰胺酶的研究进展作一综述.     

肠杆菌科细菌产金属β-内酰胺酶的研究进展

金属β-内酰胺酶(MBL)可广泛水解多种抗生素,对常规β-内酰胺酶抑制剂如克拉维酸、舒巴坦等不敏感。产MBL肠杆菌科细菌一直是临床公认的多重耐药病原体。尤其是在发现新德里金属β-内酰胺酶后,人们更加重视肠杆菌科细菌中检出MBL的情况,因为其所致感染日渐严重。因此,快速、准确检测出产MBL菌株是有效预防、控制感染发生与播散的重要环节。本文就肠杆菌科细菌MBL的发现及分类、耐药基因传播、检测方法等进行简要概述。     

细菌超广谱β-内酰胺酶提取方法研究进展

超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)可水解β-内酰胺类抗生素,使产ESBLs细菌对目前常用的头孢菌素和青霉素类等抗生素产生多耐药性和高耐药性,由此使得产ESBLs细菌感染的诊断和治疗成为临床抗感染诊疗工作的重点。目前细菌的ESBLs提取主要包括超声波破碎法、溶菌酶法和反复冻融法等。本文对现有文献中此三种方法的提取原理、提取步骤和影响因素进行了综述,同时对各种提取方法的优缺点进行了分析比较,并对采用反复冻融法联合超声法和溶菌酶法联合超声法等联合提取法提高酶提取效率的展望予以了简要分析,以期为产酶多重耐药菌的控制提供参考。     

粪标本大肠埃希菌超广谱β-内酰胺酶的检测分析

通过对粪标本中大肠埃希菌超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)的检测,调查头孢菌素使用较多临床科室ESBLs大肠埃希菌菌株阳性率,分析ESBLs可能感染或产生的相关因素,为改变抗生素临床用药方法和采取必要控制感染的措施提供实验依据,减少院内ESBLs产生率.     

脆弱拟杆菌β-内酰胺酶的纯化及免疫学特性

利用层析结合PAGE回收蛋白的方法对临床分离的脆弱拟杆菌(Bacteroides tragilis)55的β-内酰胺酶进行纯化,纯酶与Liposome-CPS-K混合制备抗血清,并建立了lgG—ELISA和western blotting方法。其测定结果表明,脆弱拟杆菌的β-内酰胺酶不同于其它拟杆菌和肠道杆菌染色体编码的β-内酰胺酶(p<0.001),具有种的特异性。     

新德里金属β-内酰胺酶基因序列比对与蛋白分子结构

目的 分析不同来源细菌新德里金属β-内酰胺酶(NDM)编码基因序列的相似性和同源性,并分析其蛋白分子结构.方法 在GenBank中检索目前已经注册的NDM编码基因序列88个(包括NDM-1～ NDM-6),利用ClustalW2生物软件在线分析NDM基因序列的相似性和同源性,建立基因进化树,分析编码基因序列的特点;利用ESyPred3D软件构建三维结构图,并用Molsoft ICM-Pro软件进行编辑处理.结果 88个NDM编码基因是完全一致的长度为813 bp的基因序列,具有很高的同源性;NDM蛋白由270个氨基酸组成并借助Zn2+和枸橼酸维持其分子空间结构.结论 NDM编码基因具有很高的同源性,本研究成功构建了NDM的三维结构图,为NDM宿主菌基于NDM核酸序列的分子生物学快速检测和其对各种抗生素产生耐药的机制研究奠定了理论基础.     

大肠埃希菌临床分离株CTX—M型超广谱β-内酰胺酶基因型研究

目的了解我院临床分离大肠埃希菌产CTX-M型超广谱β-内酰胺酶（ESBLs）的基因型分布情况。方法收集我院临床分离大肠埃希菌200株,按美国临床和实验室标准协会2006年制订的标准确定ESBLs表型。PCR扩增CTX—M耐药基因,扩增产物测序,测序结果与GenBank比对,确定CTX．M基因型。结果200株大肠埃希菌中有94株ESBLs阳性,其中92株CTX-M基因扩增阳性。测序结果表明,大肠埃希菌CTX．M基因型以CTX．M14为主,占67．4％,同时CTX—M3占27．2％,5株未分型。结论大肠埃希菌中产CTX．M型ESBLs的检出率较高,其基因型以CTX．M14和CTX．M3型为主。     

细菌超广谱β-内酰胺酶的研究进展

由于抗生素的选择压力,目前产超广谱β-内酰胺酶细菌在临床标本中的分离率逐渐增加,由其引起的医院内感染也经常暴发.本文综述了其的类型、作用、实验室确证和检查方法、产超广谱β-内酰胺酶菌的耐药机制和临床防治方法,进一步强调了准确检测ESBL和正确选择抗生素在降低耐药性传递中的重要作用.     

217株铜绿假单胞菌产β-内酰胺酶状况及血清学分型的调查研究

目的了解广州地区铜绿假单胞菌（PA）3种主要β-内酰胺酶（金属β-内酰胺酶、超广谱β-内酰胺酶和AmpC酶）的产生情况和血清型分布,观察这些铜绿假单胞菌的耐药差别.方法用法国生物梅里埃公司的VITEK-2细菌鉴定与药敏系统进行217株铜绿假单胞菌的鉴定与药敏,对可疑产金属β-内酰胺酶、超广谱β-内酰胺酶、AmpC酶的菌株,用双纸片协同试验和头孢西丁三维试验进行3种酶的表型确证,同时采用玻片凝集试验对这些菌进行血清分型.结果217株铜绿假单胞菌的β-内酰胺酶产酶率为20.7%（45/217）,其中产金属β-内酰胺酶的有26株,占12.0%（26/217）,产AmpC酶的有11株,占5.1%（11/217）,产超广谱β-内酰胺酶的有8株,占3.7%（8/217）;对氨曲南、头孢吡肟、头孢他啶、环丙沙星、亚胺培南、左旋氧氟沙星、哌拉西林、哌拉西林/他唑巴坦、替卡西林/棒酸和美洛培南这些临床常用抗生素,产酶菌较不产酶菌敏感性明显降低（P均小于0.05）;217株铜绿假单胞菌的血清分型以G型为主,占39.6%（86/217）,其次为L型,占19.8%（43/217）;产酶菌株的血清型以B和L型为主.结论广州地区引起临床感染的铜绿假单胞菌产生的β-内酰胺酶以金属酶最常见,其次为AmpC酶和超广谱β-内酰胺酶;产酶株对临床常用抗生素敏感性降低;广州地区铜绿假单胞菌的血清型以G型为主,产酶菌株以L和B型为主,临床上治疗铜绿假单胞菌引起的感染应根据实验室的药敏结果选择抗生素.     

OKP-B-13型β-内酰胺酶的克隆与表达

目的构建OKP-B-13型β-内酰胺酶的表达载体。方法抽提菌株的质粒,应用PCR扩增OKP-B-13基因全长编码序列,扩增产物经Nde I、Xho I酶切后连接至pET-26b(+)表达载体,重组质粒经酶切及DNA测序确证后,转入大肠埃希菌BL21(DE3),IPTG诱导表达。超声破碎法提取表达蛋白产物,检测其活性,等电聚焦电泳检测蛋白的等电点(pI)。结果PCR扩增获得879 bp的产物,重组表达载体经Nde I、Xho I酶切及DNA测序后表明,目的基因已成功接入表达载体,重组菌的粗提物经头孢硝噻吩检测显示具有β-内酰胺酶活性,显示载体[pET-26b(+)/OKP-B-13]构建成功。目的等电点为7.1。结论β-内酰胺酶OKP-B-13在原核表达细胞中实验了基因重组表达,为进一步分析酶的特性提供条件。     

SHV-59型β-内酰胺酶的克隆与表达

目的构建SHV-59型β-内酰胺酶的表达载体。方法抽提菌株的质粒,应用PCR扩增SHV-59基因全长编码序列,扩增产物经NdeI、XhoI酶切后连接至pET-26b（＋）表达载体,重组质粒经酶切及DNA测序确证后,转入大肠埃希菌BL21（DE3）,IPTG诱导表达。超声破碎法提取表达蛋白产物,检测其活性,等电聚焦电泳检测蛋白的等电点（PI）。结果PCR扩增获得879bp的产物,重组表达载体经NdeI、XhoI酶切及DNA测序后表明,目的基因已成功接入表达载体,重组菌的粗提物经头孢硝噻吩检测显示具有β-内酰胺酶活性,表明载体[pET-26b（＋）／SHV-59]构建成功。目的等电点为7．6。结论β-内酰胺酶SHV-59在原核表达细胞中实验了基因重组表达,为进一步分析酶的特性提供条件。