紫外诱变选育木聚糖酶高产菌株及产酶条件初步研究

以短小芽孢杆菌(Bacillus pumilus)HJ-04为出发菌株,通过紫外诱变的方法筛选得到一株木聚糖酶高产菌株B6,其酶活提高约30%.通过因素轮换试验和L9(34)正交试验结果得出B-6菌株产酶的最佳营养条件及发酵条件.结论:4%啤酒糟、2%玉米芯、2%牛肉膏、0.15%FeSO4、1.5%Na2HPO4,pH 8～9,35℃,170r/min培养60h,产酶活力达到536.72IU/mL.     

产碱性木聚糖酶菌株的筛选及酶学性质

从青海盐碱湖土壤中筛选到25株产碱性木聚糖酶的菌株,其中编号为QH14的菌株产酶量达648.79U/mL,纯化后比活可达1148.56 U/mg。16 SrDNA鉴定表明菌株QH14属于短小芽孢杆菌,命名为Bacillus sp.QH14。从该菌株的基因组中克隆获得了碱性木聚糖酶编码基因XynQH14,并在大肠杆菌E.coliBL21(DE3)中获得重组表达。通过Ni-NTA亲和层析分离纯化后的重组QH14木聚糖酶比活达700.47 U/mg。该碱性木聚糖酶的酶促反应最适温度为60℃,最适pH为9.2;55℃处理1h仍保持50%的活力;在pH7.0~11条件下37℃处理酶液24 h后均保持80%以上的活力,且在pH11缓冲溶液中50℃处理24 h仍保持31.02%的酶活,显示了该碱性木聚糖酶较好的热稳定性和碱稳定,提示该碱性木聚糖酶在制浆造纸、纺织等行业的应用潜力。     

产碱性木聚糖酶菌株的筛选及酶学性质

从青海盐碱湖土壤中筛选到25株产碱性木聚糖酶的菌株, 其中编号为QH14的菌株产酶量达648.79 U/mL, 纯化后比活可达1148.56 U/mg。16 SrDNA鉴定表明菌株QH14属于短小芽孢杆菌, 命名为Bacillus sp. QH14。从该菌株的基因组中克隆获得了碱性木聚糖酶编码基因XynQH14, 并在大肠杆菌E.coliBL21(DE3)中获得重组表达。通过Ni-NTA亲和层析分离纯化后的重组QH14木聚糖酶比活达700.47 U/mg。该碱性木聚糖酶的酶促反应最适温度为60℃, 最适pH为9.2; 55℃处理1h仍保持50%的活力; 在pH7.0~11条件下37℃处理酶液24 h后均保持80%以上的活力, 且在pH11缓冲溶液中50℃处理24 h仍保持31.02%的酶活, 显示了该碱性木聚糖酶较好的热稳定性和碱稳定, 提示该碱性木聚糖酶在制浆造纸、纺织等行业的应用潜力。     

耐碱性木聚糖酶产酶菌株的选育

目的:筛选出产碱性木聚糖酶酶活力高的菌株。方法:从碱性环境中采集样品,以自制木聚糖为惟一利碳源,采用刚果红透明圈法于摇瓶发酵法相结合筛选出18株产木聚糖酶酶活较高的菌株,其中1株酶活最高可达335.14 IU/ml。结果:通过培养特性及形态特征初步鉴定为芽孢杆菌。对部分酶学性质研究的结果表明:其作用最适温度60℃,最适pH8.0,在pH9.0条件下仍具有80%酶活力。结论:属于耐碱性木聚糖酶,具有很好的工业应用前景。     

Bacillus pumilus WL-11木聚糖酶A的纯化、鉴定及其底物降解方式

对一株BacilluspumilusWL_11木聚糖酶的纯化、酶学性质及其底物降解模式进行了研究。经过硫酸铵盐析、CM_Sephadex及SephadexG_75层析分离纯化,获得一种纯化的WL_11木聚糖酶A ,其分子量为2 6 0kD ,pI值9 5 ,以燕麦木聚糖为底物时的表观Km 值为16 6mg mL ,Vmax值为12 6 3μmol (min·mg)。木聚糖酶A的pH稳定范围为6 0至10 4 ,最适作用pH范围则在7 2至8 0之间,是耐碱性木聚糖酶;最适作用温度为4 5℃～5 5℃,在37℃、4 5℃以下时该酶热稳定性均较好;5 0℃保温时,该酶活力的半衰期大约为2h ,在超过5 0℃的环境下,该酶的热稳定较差,5 5℃和6 0℃时的酶活半衰期分别为35min和15min。WL_11木聚糖酶A对来源于燕麦、桦木和榉木的可溶性木聚糖的酶解结果发现,木聚糖酶A对几种不同来源的木聚糖的降解过程并不一致。采用HPLC法分析上述底物的降解产物生成过程发现木聚糖酶A为内切型木聚糖酶,不同底物的降解产物中都无单糖的积累,且三糖的积累量都较高;与禾本科的燕麦木聚糖底物降解不同的是,木聚糖酶A对硬木木聚糖降解形成的五糖的继续降解能力较强。采用TLC法分析了WL_11粗木聚糖酶降解燕麦木聚糖的过程,结果表明燕麦木聚糖能够被WL_11粗木聚糖酶降解生成系列木寡糖,未检出木糖,这说明WL_11主要合成内切型木聚     

产碱性木聚糖酶芽孢杆菌HSⅠ的筛选及发酵条件研究

通过碱性培养基分离到耐碱的芽孢杆菌HSⅠ,研究了碳源,氮源,培养温度,培养基起始pH,培养时间,接种量,通气量,添加物对HSⅠ菌产木聚糖酶的影响。测定出其产酶最佳培养条件;麸皮6%,（NH4）2SO40。2%,NaNO30.4%。蛋白胨0.6%,起始pH为10.5,接种量为5%,250mL三角瓶装液量为50mL。最佳培养温度为37℃,培养时间为96h,其酶活力最高达54IU/mL。     

产木聚糖酶厌氧真菌菌株筛选及产酶培养条件研究*

从12株分离自反刍动物瘤胃及粪样的厌氧真菌中筛选到一株木聚糖酶高产菌,编号为A4,初步鉴定为Neocallimastix属菌。以稻草秸、玉米秸、花生秸、滤纸片段为发酵底物,经39℃厌氧培养,A4菌产生的木聚糖酶活分别为14.31U/mL、11.39U/mL、6.99U/mL和13.38U/mL。对A4菌产生木聚糖酶的条件进行优化,结果发现,培养基中无细胞瘤胃液浓度对A4菌产生的木聚糖酶活无显著影响;但酵母膏浓度从1.0g/L降至0.5g/L后,A4菌产生的木聚糖酶活显著下降(P<0.05)。     

碱性木聚糖酶产酶菌株—芽胞杆菌M-26的选育

从造纸厂的废水中采集样品,以木聚糖为唯一碳源初筛菌株,然后用刚果红透明圈平板选育,最后通过摇瓶发酵选育出碱性木聚糖酶高产菌株M-26,基础产酶活力达330 IU/mL;通过菌种形态学、培养特征和16S rDNA鉴定为短小芽胞杆菌;酶学性质研究表明:最适作用温度和pH分别为55℃和8.0,且具有一定的耐碱性;通过发酵条件研究,M-26最高产酶活力可达625 IU/mL。     

高产木聚糖酶菌株筛选、鉴定及产酶条件的研究

以半纤维素、桦木木聚糖为唯一碳源,两步透明圈法从10种混合土壤样品中,分离到一株木聚糖酶高产菌株HJ-04,通过形态学观察、生理生化特征及16SrDNA序列分析,鉴定为短小芽胞杆菌（Bacillus pumilus）;通过因素轮换试验和正交试验结果得出最佳培养基及发酵条件为：麸皮5%,玉米芯2%,KH2PO41%,MgSO4.7H2O0.5%,尿素0.2%,NH4NO30.1%,Tween-800.2%,起始pH为9,培养温度38℃,180r/min振荡培养60h,酶活力可达358.8IU/mL。在最适反应体系及反应条件下,酶活力高达942.4IU/mL。HJ-04所产木聚糖酶的最适作用温度为60℃,最适作用pH为6.5。对该酶酶学性质的研究结果表明,其将有望应用于食品及饲料工业。     

产纤维素酶菌株的筛选、鉴定及产酶条件的优化

采集新疆吐鲁番地区土样,从中分离筛选1株产纤维素酶菌株C-8;经形态观察、生理生化及16S rRNA序列分析,初步鉴定为芽孢杆菌属(Bacillus sp.)。该菌株所产纤维素酶的最适合作用pH和温度分别为9.0、40℃,且具有良好的pH稳定性和温度稳定性。为了提高C-8菌株产纤维素酶能力,利用响应面法对其发酵产酶条件进行优化。采用Plackett-Burman设计筛选出影响其产酶条件的3个主效应因素,最陡爬坡试验逼近最大响应值区域,利用Box-Behnken响应面分析法优化发酵产酶条件。结果表明,起始pH、CMC-Na%和培养温度为主要影响因素。通过三因素三水平的响应面分析得到最优条件为起始pH8.0、CMCNa%2.5%、培养温度28℃。在此条件下纤维素酶活可达193.89 U/mL,与优化前相比,酶活提高2.35倍。     

产胞外青霉素酰化酶菌株的选育

以短小杆菌（B．pumilus）B－97为出发菌株,经过连续两次紫外线诱变处理,分离得一突变株B－U－29。其酶活力为4．56U／ml,较出发菌株酶活力提高113．3％。对B－U－29菌株进行连续两次亚硝酸处理,分离得一正变稳定株B—H－29,酶活力为4．93u／ml,较出发菌株酶活力提高了20％。     

产耐碱性β-1，4-聚糖酶芽孢杆菌A-30液体发酵研究

研究了搅拌转速、ＰＨ控制以及插瓶发酵过程中不同时间硫酸铵的补加对β－１,４聚糖酶形成的影响,优化得到Ａ－３０的β０１,４－聚糖酶分批发酵操作条件和初步优化了（ＮＨ４）２ＳＯ４流加发酵条件。研究结果显示麸皮表面有大量Ａ－３０菌体细胞的吸附,搅拌转速对菌体吸附和β－１,４－聚糖酶的形成有明显影响;发酵过程中ＰＨ下降有利于β－１,４－聚糖酶形成。采用了实期以５ｍｌ／ｈ的速率恒速流加,后期测定（ＮＨ４）２     

短小芽胞杆菌产碱性木聚糖酶发酵条件的研究

碱性木聚糖酶在碱性条件下催化水解木聚糖,广泛应用于造纸、纺织等领域.着重对短小芽胞杆菌M-11产碱性木聚糖酶的发酵条件进行初步的探索.研究了菌株的生长曲线、确定最佳接种龄为16 h、最佳接种量为1％;确定最适碳源浓度为7％、最适单一氮源为氯化铵、其浓度为1.0％、最适无机盐为氯化铁、其浓度为3 mmol/L;在此基础之上进行6因素3水平的正交试验,确定最适产酶培养基组成:麸皮5％,接种量3％,氯化铵1.2％,氯化铁3.5 mmol/L,硫酸镁0.03％,氯化钠5 mmol/L,磷酸氢二钾0.4％;最适培养条件:接种龄16 h,初始pH 8.0,温度37℃,300 mL摇瓶装液量50 mL,摇床转速220 r/min,发酵周期48 h.通过对发酵条件的优化使发酵液酶活达613 IU/mL.无机氮源为其最适氮源,因此短小芽胞杆菌M-11在碱性木聚糖酶的产品开发上优于短小芽胞杆菌M -26.     

碱性淀粉酶产生菌的筛选和产酶条件的研究

对采自全国各地的５０份上样进行筛选,获得一株产酶活性较高的菌株Ｂ－９５４５,通过摇瓶培养确定了产酶的最适培养基Ⅱ（ｇ／１００ｍｌ）：复合蛋白胨１．０;玉米淀粉１．５;玉米浆１．５;ＮａＣ１０．５;Ｋ２ＨｐＯ４０．１;ＭｇＳＯ４０．０２;ＣａＣＯ３０．５;Ｔｗｅｅｎ８００．１;ｐＨｇ—１０,在该条件下,３０℃荡培养４８ｈ,酶活力可达５９６ｕ／ｍｌ。对菌株Ｂ—９５４５的产酶特性研究表明：该酶对高ｐＨ环境有较强的适应性,因此,可用于碱性洗涤用酶。     

ISOLATION,SCREENING AND PRODUCTION STUDIES OF URICASE PRODUCING BACTERIA FROM POULTRY SOURCES

Uricase (urate oxidase EC 1.7.3.3) is a therapeutic enzyme that is widely used to catalyze the enzymatic oxidation of uric acid in the treatment of hyperuricemia and gout diseases. In this study, three bacterial species capable of producing extracellular uricase were isolated from a poultry source and screened based on the size of the clear zone using a uric acid agar plate. The bacterial species capable of producing uricase with the highest uricolytic activity was identified as Bacillus cereus strain DL3 using a 16SrRNA gene sequencing approach. The time-course study of uricase production was performed and the medium was optimized. Carboxymethylcellulose and asparagine were found to be the best carbon and nitrogen sources. Maximum uricolytic activity was observed at pH 7.0 with an inducer concentration of 2.0 g/L. Inoculum size of 5% gave maximum uricolytic activity. The maximum uricolytic activity of 15.43 U/mL was achieved at optimized conditions, which is 1.61 times more than the initial activity. Further, enzymatic stability was determined at different pH and temperature.     

利用原生质体诱变筛选碱性蛋白酶高产菌株

本实验以枯草杆菌ＡＸ—４６为出发菌株,在原生质体形成及再生的最佳条件下制备原生质体,并对原生质体进行紫外诱变处理,对大量的再生突变株进行发酵筛选,获得高产菌株ＡＰ—１２,碱性蛋白酶产量由原来的３２００．８ｕ／ｍｌ提高到４３５３．１ｕ／ｍｌ,提高率达３６％。同时又对ＡＰ—１２菌株进行遗传稳定性考查,考查结果,ＡＰ—１２是高产稳定菌株。     

微波诱变结合化学诱变选育酸性蛋白酶高产菌

酸性蛋白酶是酶制剂工业比较重要的酶种,广泛应用于饲料、食品、皮革、医药和酿造工业中［１～４］,具有较大的市场潜力。本研究以宇佐美曲霉（Ａｓｐｅｒｇｉｌｕｓｕｓａｍｉ）白色突变株Ｂ１为出发菌株,通过微波诱变和亚硝基胍、硫酸锂复合诱变剂点试平板法诱变,选...     

短小芽孢杆菌碱性蛋白酶BP的纯化和性质

短小芽孢杆菌产生的碱性蛋白酶BP经CM—Sephadex-C-50和Sephadex-G75两个柱层析,得到了聚丙烯酰胺凝胶电泳纯的酶组分,比活力从1307μ/mg提高到5538μ/mg.活力回收为21%,酶水解酪蛋白的最适反应温度为50℃,最适pH为9.5,Mn^2+、Ca^2+对酶有激活作用,Hg2+、Ag^+对酶有抑制作用.酶的热稳定性不高,但在Ca^2+保护下,热稳定性明显提高.酶的最适作用底物为酪蛋白,对血红蛋白、蛇毒蛋白、牛血清蛋白、卵蛋白、核糖核酸酶也有水解作用.对酪蛋白的Km为0.62%,V_max为50μg/min.DFP可完全抑制酶活性,PMSF和NBS也严重抑制酶活力,PCMB、_o-PTH和EDTA几乎不抑制酶活力.纯酶的分子量为25000Dal.该酶蛋白含有17种氨基酸,其中甘氨酸(Gly)和丙氨酸(Ala)为主要氨基酸.     

一株芽孢杆菌产生脲酶条件及脲酶提取研究

研究了一株芽孢杆菌(Bacillus sp.)产生脲酶的条件及脲酶提取。结果表明,芽孢杆菌适宜的生长及产酶温度为35～37℃,产酶受底—尿素的诱导。静止培养有利于产酶,Ni²⁺对产酶没有影响,脲酶粗提物经硫酸铵盐析、热处理,Sephadex G-200及DEAE-纤维素柱层析提取步骤脲酶比活力提高了近70倍,回收率15.5%.