重组人脑乙酰胆碱酯酶的基因表达和生化毒理学性质

人脑乙酰胆碱酯酶的全长cDNA序列克隆到真核高效表达载体pcDNA3.1中 ,并将pcDNA AChE转染人胚肾细胞株 2 93细胞 ,进行rhAChE的暂时表达 .真核细胞表达的rhAChE的生化性质与天然人脑AChE十分相似 .rhAChE的Km 值约为 137μmol L ;有过量底物抑制现象 ;可被胆碱酯酶抑制剂huperzineA和eserine抑制 (IC50 分别为 2 5× 10 -8mol L和 1 0× 10 -7mol L) ;肟类化合物HI 6 (10 -4 mol L)可以有效地重活化被sarin(10 -6mol L及 10 -7mol L)抑制的rhAChE ,4h内重活化率分别达 86 %和 97% .rhAChE反复冻融 3次 ,酶活性没有损失 .     

生化毒理学的研究——梭曼与乙酰胆碱酯酶作用的生化机理

梭曼(soman,特己基甲基氟膦酸酯)、沙林(sarin,异丙基甲基氟膦酸酯)、维埃克斯[VX,O-乙基-S-(2-二异丙胺乙基)甲基膦酸酯]等是一类重要的神经性化学战剂,其中以梭曼中毒最难防治。它们对乙酰胆碱酯酶(AChE)产生极强的抑制作用,使乙酰胆碱在神经末梢大量集聚,引起抽筋、惊厥,最后死亡。氯磷啶、双磷啶等重活化剂是神经性毒剂中毒急救中的重要药物,它们可以使沙林和VX抑制的AChE恢复活性,但对梭曼抑制的AChE很     

乙酰胆碱酯酶与拟胆碱酯酶

胆碱酯酶分为乙酰胆碱酯酶和拟胆碱酯酶两类,这两类酶的分子类型十分相似。许多学者在催化性质、热稳定性及免疫学性质等方面对它们进行了大量的平行性研究,进而对二者的相互关系及拟胆碱酯酶的生理学作用从分子生物学的角度进行了有益的探讨。本文着重叙述了近年来这几个方面主要的研究进展。     

乙酰胆碱酯酶参与细胞凋亡的研究进展

乙酰胆碱酯酶(Acetylcholinesterase,AChE)是主要存在于神经系统的一种水解酶,其经典功能是水解神经递质乙酞胆碱从而终止神经冲动的传递。但是近年来,研究者发现许多证据表明它具有许多“非经典”的新功能,引起了人们的广泛关注。     

缺氧耐受形成中脑内乙酰胆碱含量和乙酰胆碱酯酶活性的变化

目的:从胆碱系统方面,探讨缺氧耐受形成过程中学习记忆改善的机制.方法:测定小鼠脑内乙酰胆碱和乙酰胆碱酯酶.结果:与1次缺氧组比,4次缺氧组小鼠脑内Ach含量明显降低,AchE活力明显升高(P<0.01).结论:缺氧耐受中学习记忆的改善可能与脑内胆碱系统无关.     

阵发性睡眠性血红蛋白尿症红细胞乙酰胆碱酯酶的研究

用化学方法测定了乙酰胆碱脂酶（ＡｃｈＥ）活性,阵发性睡眠性血红蛋白尿症（ＰＮＨ）红细胞远低于正常红细胞。为了进一步研究ＰＮＨ ＡｃｈＥ（一）的红细胞,采用Ｐｒｏｔｅｉｎ Ａ Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ ６ＭＢ结合ＡｃｈＥ单抗亲和层析法分离出ＰＮＨＡｃｈＥ（一）的红细胞。同间接免疫荧光流式细胞术检测,ＰＮＨ细胞ＡｃｈＥ低于正常,而ＰＮＨ ＡｃｈＥ（一）红细胞未能检出ＡｃｈＥ。＾３Ｈ－肌醇标记实验证明,正常     

昆虫乙酰胆碱酯酶基因变异抗药性机制研究

有机磷和氨基甲酸酯类杀虫剂的大量使用导致昆虫对其产生抗药性。乙酰胆碱酯酶是昆虫对这类杀虫剂产生抗性的重要的靶标酶,昆虫产生抗药性的重要原因之一,就是因为乙酰胆碱酯酶的基因表达量上升,或基因突变而导致其敏感性下降。文章简要论述昆虫乙酰胆碱酯酶基因发生变异而导致的抗药性,分析了变异对其结构和功能的影响。     

华支睾吸虫神经系统的乙酰胆碱酯酶定位

应用乙酰胆碱酯酶显示的华支睾吸虫神经构造十分清晰,呈左右对称排列。它由中枢神经节、神经连合、纵行神经干、神经联系以及双极和多极神经细胞所组成。中枢神经节位于咽下方的两侧,由粗大的神经连合相连。从中枢神经节向前伸出咽、前背、前腹、前侧4对神经干;向后伸出后背、后腹、后侧3对神经干。以后腹神经干为最粗大,并从其伸出分支分布于腹吸盘、消化道、卵黄腺和生殖器官。后3对纵行神经干又由许多横向神经联系将其互相连接构成神经网。体内广泛分布双极和多极神经细胞,前者较小,数目众多,而后者略大,数目较少。     

哺乳类凋亡细胞表达乙酰胆碱酯酶（AChE）的研究介绍

线虫和哺乳类参与调节细胞调亡的基因家族分别是ced－3／caspase、ced-4／apafl和ced－9／bcf－2。目前发现Caspase家族有10个成员,其基因产物是半脱氨酸蛋白酶类问。Caspase家族是决定细胞凋亡的关键,被称为细胞凋亡的刽子手（executioner）［2］。核酸内切酶也参与了细胞凋亡过程［3］。然而,酯酶是否参与了细胞调亡报道很少。我们在国际上首先发现哺乳类调亡细胞表达带恳亲水型AChE,并且不同的动物间具有很好的保守性［4］。1凋亡小体中AChE活性现象的初次发现1995年9月至1996年9月为了对Han和Caen提出的内皮细胞和巨核细胞是否…     

不同有机磷酸酯磷酰化乙酰胆碱酯酶活性中心的构象…

通过观察２倍肟化合物ＨＩ－６和ＨＧＧ－４２及它们的４位肟异构体对不同有机磷毒剂抑制的ＡＣｈＥ的重活化作用发现塔崩、梭曼、沙林等有机磷毒剂磷酰化的ＡＣｈＥ活性中心的构象可能存在着明显差异；又从变构剂Ｃ１０和丙吡啶对ＴＭＢ４重活化这几种毒剂磷酰化ＡＣｈＥ的影响中证实塔崩磷酰化ＡＣｈＥ活性中心构象与沙林、梭曼和ＶＸ３种毒剂磷酰化的ＡＣｈＥ明显不同。     

甲基毒死蜱对红细胞乙酰胆碱酯酶的抑制作用及其与膜脂相互关系

以人红细胞膜为材料,研究了甲基毒死蜱与膜上乙酰胆碱酯酶的相互作用及其与膜脂的关系。结果显示,甲基毒死埤对人红细胞ＡＣｈＥ有明显的抑制作用,与膜温育３０ｍｉｎ,其半数抑制浓度约为０．１０ｍｍｏｌ／Ｌ。动力学分析表明,其抑制作用为非竞争性。０．２％Ｔｒｉｔｏｎ Ｘ－１００并不改变ＡＣｈＥ对甲基毒死蜱的敏感性,亦即ＡＣｈＥ上甲基毒死蜱的作用部位与其所处的脂质微环境无关。     

大鼠食管胸段，腹段乙酰胆碱酯酶阳性神经的配布

大鼠食管胸段和腹段壁内乙酰胆碱酯酶（ＡＣｈＥ）阳性神经存在于神经束和分支的粗细神经纤维内,也见于外膜丛,肌间丛,粘膜下丛和粘膜肌内。食管肌层内ＡＣｈＥ阳性神经纤维多而密集,而食管腹段肌内尤为丰富,肌间神经纤维末梢分布于肌束表面,可能与控制肌纤维活动有关;分布于肌内,粘膜下层和上皮基部的ＡＣｈＥ阳性神经中,尚含有内脏感觉神经纤维。食管壁的肌间丛和粘膜下丛内散在有多极形和卵园形的ＡＣｈＥ阳性神经元,在食管腹段内数多,而以中小型神经元为主。     

寄主植物对斜纹夜蛾酯酶和乙酰胆碱酯酶活性的影响

利用生物测定与生物化学的方法,就取食不同寄主植物的2个斜纹夜蛾[Spodoptera litura(Fab.)]品系对丙溴磷和灭多威的敏感性及其体内的酯酶与乙酰胆碱酯酶的活性变化进行了研究。结果表明,取食不同寄主植物的斜纹夜蛾对丙溴磷和灭多威的敏感性不同。在敏感品系中,取食不同食料的斜纹夜蛾后代对灭多威的敏感性顺序为:烟草<棉花<大豆<人工饲料;对丙溴磷而言,敏感性顺序则为:棉花<烟草<大豆<人工饲料。而在田间抗性品系中,对丙溴磷的敏感性顺序为:棉花<烟草<人工饲料<大豆;对灭多威的敏感性顺序为:棉花<烟草<大豆<人工饲料。此外,在田间抗性和敏感品系中,取食不同食料的斜纹夜蛾体内的酯酶活性之间均存在显著差异,对其乙酰胆碱酯酶的活性也有程度不同的诱导效应,但并不会引起乙酰胆碱酯酶的质变。     

快速检测蚊虫乙酰胆碱酯酶活性的方法

本研究采用微板法,根据乙酰硫代胆碱-二硫双硝基苯甲酸法的原理,检测了敏感品系和抗残杀威抗性品系淡色库故CulexpipienspallensCoguillett）单个蚊虫的乙酰胆碱酯酶（AchE）的活性。给果表明：敏感品系和抗性品系蚊虫的AchE活性有较大差别,敏感品系蚊虫的AchE可被一定量的杀虫剂抑制,而抗性品系的AchE则不被抑制,因此该方法能够区分敏感蚊虫和抗性蚊虫,用于抗性测定,具有简单易行,检测快速等优点。     

眼镜蛇毒对大鼠脊髓乙酰胆碱酯酶表达的影响

目的 探讨眼镜蛇毒对大鼠腰髓乙酰胆碱酯酶（AchE）表达的影响。方法 将蛇毒注射到大鼠左小腿下部,采用亚铁氰化铜法示AchE,观察大鼠腰髓前角AchE阳性神经元在眼镜蛇毒中毒组、生理盐水组、正常对照组的变化。结果 蛇毒组大鼠AchE阳性神经元比对照组表达增强。结论 眼镜蛇毒对腰髓的AchE阳性神经元表达有上调作用。     

四种杀虫剂对两种书虱羧酸酯酶和乙酰胆碱酯酶的抑制作用

选用有机磷类杀虫剂(敌敌畏、毒死蜱、对氧磷)和氨基甲酸酯类杀虫剂(丁硫克百威),通过生物测定(药膜法)和生化测定(比色法)比较了嗜卷书虱和嗜虫书虱对所选药剂的敏感差异性。根据LC50可知嗜虫书虱对所选药剂比嗜卷书虱敏感。离体酶活性分析结果显示嗜卷书虱和嗜虫书虱的羧酸酯酶只对敌敌畏敏感,且嗜卷书虱比嗜虫书虱更敏感;4种药剂对乙酰胆碱酯酶均有强烈的抑制作用,同样是嗜卷书虱比嗜虫书虱敏感。乙酰胆碱酯酶的动力学研究结果和离体酶活性测定相一致。聚丙烯酰胺凝胶电泳分析显示,4种杀虫剂离体条件下对2种书虱的酯酶同工酶的抑制能力有明显差异,其中敌敌畏的抑制力最强;但对不同同功酶的抑制趋势(对大分子的抑制似乎较强)是一致的。酶的敏感性分析结果与生测结果比较表明,2种书虱的耐药力差异与其乙酰胆碱酯酶和酯酶对药剂的敏感性无关。如要弄清耐药力机制,需做进一步研究。