响应面法优化酶法提取枸杞多糖的研究

选用响应面法优化及正交实验法进行淀粉酶提取枸杞多糖实验设计及分析。通过单因素实验后,正交实验确定淀粉酶酶解提取枸杞多糖的最佳条件为:pH=5.0,温度50℃,时间80 min,加酶量为0.5%,枸杞多糖提取率12.1%;响应面分析确定淀粉酶酶解提取枸杞多糖的最佳条件为酶解温度49.56℃、酶解时间140 min、酶浓度0.3%,枸杞多糖提取率为13.25%。酶法提取枸杞多糖比传统热水浸提提高了枸杞多糖的提取率,反应条件温和,而且通过响应面法进行实验设计和优化比正交实验法能得到更高的枸杞多糖提取率。     

五种昆虫多糖的体外抗氧化活性

采用邻苯三酚自氧化法、DPPH法、Fenton反应体系、FRAP分析法及对过氧化氢损伤细胞保护作用方法对白蜡虫Ericerus pela Cavannes雌成虫多糖、蝗虫多糖、喙尾琵甲多糖、美洲大蠊多糖及家蚕蛹多糖进行体外抗氧化研究,评价昆虫多糖总还原能力,对超氧阴离子自由基(O2-·)、DPPH·、羟自由基(·OH)的清除作用及损伤细胞存活率影响。试验结果表明,5种多糖对几种自由基均有不同程度的清除作用,且均呈现一定的量效关系;但对不同的氧化体系呈现不同的清除活性,白蜡虫多糖的总还原能力最强;白蜡虫、喙尾琵甲、美洲大蠊及蝗虫多糖对DPPH的清除率相对较明显;在羟自由基的清除能力上蚕蛹、喙尾琵甲及美洲大蠊多糖相对较强;各昆虫多糖对超氧阴离子清除能力不明显。5种多糖对过氧化氢损伤细胞有一定保护作用,在不同浓度范围内能增加细胞存活率。研究表明昆虫多糖具有一定抗氧化活性,可成为天然抗氧化物的来源。     

美洲大蠊粪便粗提物的聚集活性

用不同溶剂不同方法提取美洲大蠊Periplaneta americana(L.)粪便,测定美洲大蠊各虫态的诱集活性。结果表明,采用直接浸泡提取方法,丙酮、乙醇、正己烷和二氯甲烷4种粗提物对美洲大蠊各虫态都具有明显的诱集作用,其中乙醇和丙酮粗提物的引诱效果最好,正己烷次之,二氯甲烷最弱。4种溶剂粗提物对美洲大蠊雄成虫和高龄若虫聚集活性最强,对低龄若虫聚集活性最弱。用乙醇溶剂对粪便粗提,3种提取方法均对美洲大蠊有很强的诱集效果,其中索氏抽提诱集效果最弱,直接浸泡和超声波提取效果好,且差异不显著,但直接浸泡提取效果更好。     

美洲大蠊提取物对力竭运动大鼠心血管氧化损伤的保护作用

目的:通过美洲大蠊提取物(PAE)对力竭运动大鼠心肌自由基代谢的影响,探讨其对心肌氧化损伤的保护作用。方法:雄性SPF级健康SD大鼠40只,随机分为安静组、运动组、美洲大蠊提取物安静组、美洲大蠊提取物运动组(n=10)。服药组每天灌服2 ml美洲大蠊提取物(美洲大蠊提取物按50 mg/kg配制,溶于2 ml蒸馏水中灌胃给药),对照组每次灌蒸馏水2 ml。每天灌胃1次,连续灌胃14 d后,美洲大蠊提取物运动组与运动组大鼠进行一次性力竭游泳运动建立力竭模型,记录大鼠力竭运动时间。力竭运动结束时即刻取样,检测血清中丙二醛(MDA)含量、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)和超氧化物歧化酶(SOD)活性,并检测观察心肌组织中一氧化氮合酶(NOS)基因的表达情况。结果:与安静组相比,一次力竭游泳后,运动组心肌SOD、GSH-Px的活性明显降低(P0.01),而MDA含量显著升高(P0.01);而美洲大蠊提取物能够显著提高力竭SD大鼠的心肌SOD、GSH-Px的活性(P0.01),降低MDA含量(P0.01),e Nos基因表达增高。结论:大鼠力竭运动后心肌会发生氧化损伤,美洲大蠊提取物干预后能够增加力竭运动后大鼠心肌的抗氧化能力,对力竭运动所致心肌损伤具有一定的保护作用,进而增强大鼠运动能力。     

响应面分析法优化海马多糖提取工艺

[目的]对中药海马多糖的提取工艺进行优化。[方法]通过单因素试验研究水料比、提取温度、功率和时间对海马多糖得率的影响,在此基础上,采用Box-Behnken设计响应面实验,以海马多糖得率为响应值作响应面和等高线图,优化确定最佳工艺条件。[结果]海马多糖优化后的提取工艺条件:水料比8:1,温度50℃,功率60 W,时间40 min。[结论]优化后的最佳条件能提高海马多糖得率,在此条件下海马多糖平均得率为11.37%,该提取工艺稳定可行,实验测得值与预测值基本吻合。     

盐酸催化水解槐角异黄酮的研究

利用盐酸甲醇溶液对槐角总异黄酮进行水解制备染料木黄酮。采用高效液相色谱法检测槐角异黄酮水解率。探讨水解时间、盐酸浓度和水解温度对异黄酮水解率的影响,并通过响应面法确定最佳水解条件。实验结果表明最佳水解条件为:水解时间3.8 h、盐酸浓度2.59 mol/L、水解温度78.5℃。在此工艺下,槐角异黄酮水解率达93.38%。     

桦褐孔菌子实体多糖的提取及体外降血糖活性

通过响应面设计得到桦褐孔菌子实体Inonotus obliquus多糖的优化提取条件,利用酶和细胞体外实验,探究桦褐孔菌子实体多糖的降血糖活性,确定活性多糖组分,并初步分析其降糖机理及单糖组成.优化条件下多糖得率为(2.79±0.03)％.粗多糖经乙醇分级沉淀分别获得IOP30、IOP60、IOP80组分.其中IOP3...     

响应面法优化黄参多糖的提取工艺及其体外抗氧化活性

探讨常规热水法提取黄参多糖的最佳工艺并研究了黄参多糖的生物活性。在单因素实验的基础上,采用响应面法对黄参多糖的提取工艺参数进行优化。响应面实验表明,提取时间、温度以及料液比对响应值黄参多糖提取率均有显著的影响,优化得到常规热水法提取黄参多糖的最佳工艺条件为:时间5.45 h,温度为75℃,料液比为1∶34(g/m L),提取3次,在此条件下多糖得率为12.52%。通过考察黄参多糖对DPPH自由基、·OH自由基和超氧阴离子自由基的清除能力以及对亚铁离子螯合作用和还原力,结果表明,黄参多糖具有良好的抗氧化活性,值得进一步关注和对其进行深入研究。     

美洲大蠊肠道内生细菌的分离及其初步抑菌活性研究

分离鉴定美洲大蠊肠道内生细菌,并初步研究了其抑菌活性。采用平板稀释法对美洲大蠊肠道内生细菌进行分离纯化,分离菌株通过形态学观察和16S rDNA基因序列BLAST比对进行种属鉴定。以金黄色葡萄球菌、耐甲氧西林金黄色葡萄球菌、肺炎克雷伯菌、大肠埃希氏菌4株细菌为对象,采用牛津杯法初步鉴定各分离菌株的抑菌活性。BLAST比对分析结果表明:从15只美洲大蠊肠道内分离鉴定出125株内生细菌,分属12科20属。初步抑菌活性显示:部分菌株对金黄色葡萄球菌、耐甲氧西林金黄色葡萄球菌、肺炎克雷伯菌、大肠埃希氏菌有明显抑菌活性。美洲大蠊肠道内生菌种类繁多,而且较多菌株具有抑菌活性。     

美洲大蠊成虫肠道抗细菌共生放线菌的筛选及鉴定

【目的】鉴于野外美洲大蠊Periplaneta americana对恶劣环境适应性强,本研究旨在从云南省大理州的野外美洲大蠊成虫肠道中分离、筛选出抗细菌活性放线菌,为抗生素开发提供菌种资源。【方法】采用涂布平板法和平板划线法对美洲大蠊成虫肠道放线菌进行分离;以金黄色葡萄球菌Staphylococcus aureus、耐甲氧西林金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌Pseudomonas aeruginosa、粪肠球菌Enterococcus faecalis、大肠杆菌Escherichia coli和鼠伤寒沙门氏菌Salmonella typhimurium共6种人体病原细菌为指示菌株,采用牛津杯法对分离自这些放线菌的次生代谢产物进行抗菌活性测定;通过形态学特征和16S rRNA基因序列分析,对具有广谱和明显抗菌活性的放线菌进行鉴定,并经16SrRNA基因序列的BlAST同源性比对及系统发育分析确定它们的分类地位。【结果】从美洲大蠊成虫肠道共分离获得41株放线菌。抗菌活性测定结果表明,34株(82.9%)放线菌对至少1种指示病原细菌具有抑制作用,其中有7株对3种以上病原细菌具有抑制作用,9株表现...     

美洲大蠊提取物促组织修复作用机制研究进展

基础研究和临床实验都已证实康复新液等美洲大蠊Periplaneta americana提取物对烧伤、外伤、溃疡和术后创面修复等具有良好的治疗效果。本文综述了美洲大蠊提取物促组织修复作用机制,主要包括降低炎症反应、提高免疫和抗氧化活性、调节细胞生长因子表达、调控创面愈合相关信号通路等,为阐明美洲大蠊促修复作用的分子机制及其开发利用提供了科学参考。     

番石榴中结合多酚碱水解与酸水解法提取工艺优化的比较

以红心番石榴果肉的冻干粉末为实验材料,先提取游离多酚,剩下的残渣分别采用酸水解和碱水解法提取结合多酚。两种方法在单因素实验基础上,选择浓度、温度、时间这3个影响因素进行响应面设计。采用Design Expert 8.0.6.1软件进行响应面试验设计及数据分析,结果表明温度对结合多酚的得率影响显著,而且酸水解比碱水解获得的结合多酚多。最终确定为:碱水解最佳提取条件:Na OH浓度为7.24 mol/L,温度98.22℃,时间24.88 h,此条件下结合多酚得率为1.238%;酸水解最佳提取条件:HCl浓度为4.05 mol/L,温度94.87℃,时间29.95 h,此条件下结合多酚得率为2.002%。     

脱氧鬼臼毒素对美洲大蠊的毒力及几种酶系的影响

采用药膜法测试了脱氧鬼臼毒素对美洲大蠊Periplaneta americana初孵若虫的触杀活性,并测定了其对成虫中枢神经系统乙酰胆碱酯酶（AChE）和腺苷三磷酸酶(ATPase)离体活性的影响。结果表明：脱氧鬼臼毒素对美洲大蠊初孵若虫具有较强的毒杀活性,在接触时间24、48、72和96 h 的LC₅₀分别为26.26、4.68、1.51和0.62 μg/cm²;其对AChE没有明显影响; 对Na⁺ -K⁺ -ATPase有明显抑制作用,并存在浓度 效应关系,IC₅₀为44.9 μmol/L; 对Ca²⁺-Mg²⁺-ATPase表现出低剂量激活,高剂量抑制的现象。结果提示美洲大蠊的AChE不是脱氧鬼臼毒素靶标,而ATPase可能是脱氧鬼臼毒素的重要靶标之一。     

响应面法优化胡芦巴种子多糖提取工艺

利用单因素实验及响应面法优化确定胡芦巴种子多糖的提取工艺。通过单因素实验筛选出料液比、提取时间、提取温度三个主要因素,以胡芦巴种子多糖提取得率为响应值进行Box-Behnken中心组合试验设计,建立胡芦巴种子多糖提取得率的二次回归方程,得到优化组合条件。响应面法分析结果表明,当料液比为1∶28(g:mL),提取时间1.2 h,提取温度85℃时验证优化工艺得胡芦巴种子多糖最大提取得率19.89%,接近于模型预测值20.24%。     

响应面优化超声辅助提取香菇多糖的工艺研究(英文)

为确定香菇多糖的最佳提取工艺,利用响应面分析法对香菇多糖的提取工艺进行优化。在单因素实验的基础上,以超声时间、超声功率、浸提温度和浸提时间为响应因素,多糖提取得率为响应值,根据正交旋转组合试验设计原理进行四因素三水平的响应面分析。实验结果表明,采用超声功率174.94 W,超声时间为18.94min,在80.71℃下提取3.01 h,得到的香菇多糖提取率最高,为9.61%。当香菇多糖的浓度为3 mg/mL,其·OH清除率为52.1%。     

美洲大蠊水解氨基酸含量测定及营养评价

采用酸水解法,测定美洲大蠊中氨基酸的种类和含量,并对其进行营养评价。结果表明:美洲大蠊含有17种氨基酸(色氨酸被水解破坏而未检出),总氨基酸质量分数为43.14%,其中药效氨基酸占总量的55.43%,呈味氨基酸占总量的20.28%,其氨基酸配比较为合理:E/(E+N)=0.35,E/N=0.55,与WHO/FAO提出的参考蛋白模式接近。美洲大蠊中氨基酸种类齐全,含量丰富,富含必需氨基酸和药效氨基酸,具有很高的食用、药用价值,有较好的开发潜力。     

蕨菜多糖超声波辅助提取及其药理活性初步研究

为优化蕨菜多糖的提取工艺,同时检测蕨菜多糖的药理学活性。实验采用超声波辅助提取法,在单因素试验的基础上,考察液料比、浸提次数、超声浸提时间、超声功率四因素对蕨菜多糖提取得率的影响。运用Design Expect 10.0软件分析,通过响应面分析法(RSM)优化提取条件,对蕨菜多糖促进小鼠脾细胞增殖能力和抑制结肠癌细胞(HTC-8)增殖能力进行分析。结果表明:蕨菜多糖的优化提取工艺为:液料比:36.2∶1;浸提次数:4次;超声浸提时间:43.1 min;超声波功率:240 W,在此条件下,蕨菜多糖提取效果最好,提取得率达8.60%。各因素对多糖提取得率的影响程度:浸提次数>液料比>超声浸提时间>超声功率。通过药理活性研究表明,本实验获得的蕨菜多糖具有脾细胞免疫增值和抑制结肠癌细胞增殖活性。     

美洲大蠊抗菌肽AMPPA13的表达及纯化

[目的]预测美洲大蠊新的抗菌肽基因,构建原核表达体系并纯化表达产物。[方法]通过生物信息学方法,预测分析出潜在的美洲大蠊抗菌肽。构建pET32a重组质粒,优化诱导表达条件,通过亲和层析,分子筛等手段获得纯化的抗菌肽,并进行Western Blot鉴定。[结果]预测出美洲大蠊新的抗菌肽基因AMPPA13,成功构建重组质粒pET32aAMPPA13。优化诱导表达条件得最佳IPTG浓度为0.1 mmol/L,最佳诱导时间为4 h,最佳诱导温度为37℃。纯化后AMPPA13浓度为268μg/m L。[结论]克隆出美洲大蠊抗菌肽基因,并成功构建原核表达体系,得到1 m L纯化的AMPPA13,经Western Blot鉴定,表达产物正确。     

脱氧鬼臼毒素对美洲大蠊乙酰胆碱受体信号通路分子mRNA表达水平的影响

【目的】探讨脱氧鬼臼毒素(deoxyopodophyllotoxin, DOP)对美洲大蠊Periplaneta americana神经系统乙酰胆碱受体信号通路的影响。【方法】从美洲大蠊头部克隆乙酰胆碱受体信号通路上的关键信号分子nAChR α6亚基、 CaM和 CaMKⅡ的部分mRNA, 并测定其序列。应用荧光定量PCR技术分别观察注射不同浓度（10, 45, 80, 115和150 μg/μL） DOP 24和48 h后上述3种基因表达水平的变化。【结果】测序结果显示, 克隆出的美洲大蠊nAChR基因部分序列（539 bp）与赤拟谷盗Tribolium castaneum nAChR α6亚基基因的核苷酸序列一致性为84%; 美洲大蠊CaM基因（435 bp）与雕叶蝉Graphocephala atropunctata CaM基因的核苷酸序列一致性为85%; 美洲大蠊CaMKⅡ基因（513 bp）与黑腹果蝇Drosophila melanogaster CaMKⅡ基因的核苷酸一致性为77%。实时定量荧光PCR实验表明： DOP处理48 h后对美洲大蠊nAChR α6亚基、 CaM和CaMKII基因表达水平大体表现出低剂量激活, 高剂量抑制的特点。45~80 μg/μL DOP浓度范围内3种基因表达水平达到高峰, 80~150 μg/μL 浓度范围内表现为抑制作用, 基因表达水平呈下降趋势。【结论】DOP需要在美洲大蠊体内蓄积一定时间才有明显的作用, 能与nAChR结合引起CaM-CaMKⅡ级联反应, 使3种基因的表达在低浓度组上调、 高浓度组被抑制, 进而对美洲大蠊产生潜在的毒杀作用。     

Box-Behnken法优化苦参多糖的超声提取工艺

目的:采用响应曲面法对影响苦参多糖提取率的主要影响因素超声时间、超声功率和水料比进行优化。方法:采用超声法提取苦参多糖,以Box-Behnke响应面法优化苦参多糖的超声提取工艺条件,并进行预测分析。结果:Design Expert软件分析表明:苦参多糖提取在超声功率617.19W、超声时间22.45min、水料比27.25:1(m L:g)的最佳工艺条件下,提取率达到8.92%,实测结果与响应面拟和所得方程的预测值符合良好。结论:Box-Behnken响应面法应用于优化苦参多糖超声提取工艺是可行的,建立的数学模型和实验观察数据相符。