一株耐酸野生葛藤（Pueraria lobata）根瘤菌的筛选与耐酸机理初步研究

从重庆市北碚区缙云山酸性黄壤 （pH4.6）上生长的葛藤根瘤中分离到一株耐酸葛藤根瘤菌PR389,能在pH43的YMA培养基上正常生长,而一般根瘤菌最适生长pH值为6.5～7.5,说明PR389为一株耐酸葛藤根瘤菌。通过质子通量试验发现,与不耐酸的菌株相比,PR389的细胞膜能阻止过量的H+进入细胞,表明PR389具有某种能力使之在低酸性环境下不受伤害。在耐酸性试验中,PR389在加氯霉素的强酸性（pH3.8）YMA培养液中表现出来的耐酸性被氯霉素抑制,推测胞内特异蛋白质的诱导合成是PR389具有耐酸性的原因。     

1株高效花生根瘤菌的筛选与鉴定

从辽宁多地花生种植土壤及其鲜根瘤初步筛选到30株花生根瘤菌,进一步通过回接盆栽花生,测定花生根瘤数、根瘤干重,以及鲜根瘤固氮酶活性、植株全氮量等,筛选出1株结瘤固氮能力较强花生根瘤菌wz-6,通过16S rDNA序列分析,鉴定为圆明慢生根瘤菌(Bradyrhizobium yuanmingense)。为开发优质花生根瘤菌菌剂奠定基础。     

1株具解磷特性大豆根瘤菌的分离筛选与回接鉴定

从沈阳农业大学的科研基地分离得到20株根瘤菌,进一步利用乙炔还原法和溶磷圈法得到1株兼具有结瘤固氮和解磷作用的根瘤菌#6菌株。#6的固氮酶活性为4.94μmolC2H4.g-1.min-1,与参照菌株USDA110的固氮酶活性相当;用溶磷圈法定性试验#6解磷性,其可以溶解有机磷,对照菌株USDA110无解磷现象;进一步测定#6的解磷量,其解磷量分别在第7天为35.50μg/mL,第14天为21.05μg/mL;对根瘤菌#6生理生化和生长特性进行试验,以利于实际应用。     

葛藤主要天敌等级评价的初步研究

本文利用根据有关资料组建了葛藤天敌的等级评价方法,并利用该方法评价了杂草葛藤的四种天敌豆突眼长蝽、筛豆龟蝽、斑鞘豆叶甲和紫茎甲,结果表明,紫茎甲综合得分最高,为28分,是最有希望作为葛藤生防作用物的.     

大豆根瘤菌HH103菌株培养基的筛选与优化

以快生型大豆根瘤菌HH103菌株为供试菌株,采用单因素碳氮源利用试验和正交设计试验,确定最佳培养基及其配方。结果表明：该菌株在YMA中生长良好,最佳碳源为蔗糖,最佳氮源为酵母膏,最佳培养基成分配方（g/L）：蔗糖11,酵母膏0.9,K2HPO4 0.5,MnSO4 0.005,CaCl2 0.1,KH2PO4 0.5,MgSO4 0.2,KNO30.77,（NH4）2HPO4 0.33,FeCl3 0.005,pH 7.2。     

南苜蓿高效共生根瘤菌土壤的筛选

利用云南德宏盈江县3种类型的土壤,对分离自云南楚雄、德宏等地的SWF67523、SWF67409、SWF67456等12株根瘤菌菌株进行了南苜蓿接种效果的研究。结果表明,在所有供试菌株中,菌株SWF67523、SWF67409、SWF67394表现最为优良,结瘤率较高的菌株是SWF67523、SWF67501、SWF67394和SWF67350,结瘤率均达到95％以上;而菌株SWF67523、SWF67409和SWF67394对植株株高影响最大;菌株SWF67409、SWF67523和SWF67394对提高植株干重贡献最大,其中菌株SWF67409比空白对照增产106.5%;供试菌株对含氮量的影响也很显著,接种菌株SWF67409、SWF67523和SWF67394的苜蓿植物含氮量相比其他菌株较高,影响显著。综合以上结果,发现来源于盈江南苜蓿的根瘤菌菌株SWF67523较其他菌株表现突出,同时发现根瘤菌菌株的接种效果受土壤因子的影响,在含有效钾中等的土壤平原镇Ⅱ上,接种根瘤菌的南苜蓿地上部分干重普遍高于其他两种有效钾含量为较缺的土壤,说明根瘤菌菌株与宿主和土壤环境存在密切关系,在适合的宿主和生活环境中将会发挥最大的共生固氮作用。     

费氏中华根瘤菌腺嘌呤缺陷突变株的构建与筛选

构建出费氏中华根瘤菌嘌呤合成酶基因purL的基因置换载体pHN701,purL内部NotⅠXhoⅠ片段被luxAB基因取代,造成正常基因的破坏。用该载体对野生型费氏中华根瘤菌HH103进行purL的基因置换,筛选到腺嘌呤缺陷型突变株P825。波动实验和连续转接试验结果表明该突变菌株表型十分稳定。purL表达载体pBBRPG在P825中可恢复其在基本培养基上的生长情况,证明突变株确实为purL单基因破坏。盆栽结瘤实验结果表明,该突变株只能侵染大豆根系形成不固氮的根瘤。     

紫云英根瘤菌结瘤因子的初步研究

最近的研究结果表明,豆科植物与根瘤菌的共生识别是一种双向的信号物质交换过程.首先是豆科植物的根或种子分泌类黄酮物质,诱导根瘤菌的结瘤基因(nod genes)产生结瘤因子(nod factors),分泌到胞外,为植物所接受,从而引发植物某些基因表达,细胞分化,细胞壁形成,最终导致根毛变形等一系列变化.已经测定了几种苜蓿根瘤菌(Rhizobium meliloti)和豌豆根瘤菌(R.leguminosarum bv.viciae)结瘤因子的分子结构式,它们均属于寡糖胺类物质,在没有根瘤菌存在的条件下,结瘤因子能独立地促使根毛发生变形,这是检测结瘤因子是否存在的重要手段,即根毛变形试验(Root hairdeformation assay,简称Had试验).高浓度的结瘤因子甚至能诱导植物产生空瘤,其组织结构与典型的根瘤相同.     

从人胃肠道源乳杆菌株中初步筛选耐酸耐胆盐优良株

目的筛选对酸和胆盐耐受性均较强的优良乳杆菌株。方法模拟人体胃酸环境（pH=3）和十二指肠高胆盐环境（胆盐含量=3‰）测定104株人胃肠道源乳杆菌在酸性及高胆盐环境下作用4h后的存活菌数,并与对照相比较。对结果进行统计学分析。结果16株菌在酸性环境及高胆盐环境下4h后的活菌下降对数值均小于2。筛选出3株具有较强耐酸耐胆盐能力的乳杆菌株。结论大多数人胃肠道源乳杆菌对酸和胆盐的耐受能力均不强,对酸的耐受性普遍强于对胆盐的耐受性。     

一株降氰细菌的筛选及其转化特性初步研究

从污染土壤中分离一株高效降氰菌株DN25,经表型分析和16SrDNA分析,初步判断为产碱杆菌(Alcaligenes sp．)。该菌株耐氰能力强,能在氰浓度达1,000mg／L的环境中生长。其生长和转化的最佳温度和pH分别为30％和8．0,10h对氰浓度为500mg／L的溶液转化率可达到99％。同时菌株也可有效转化亚铁氰化钾,对于氰浓度相当于500mg／L的亚铁氰化钾液,12h的转化率可达到96％。     

野葛花醇提物中异黄酮含量及其抗氧化活性测定

以葛花苷为标准品,对野葛花醇提物的氯仿、乙酸乙酯、正丁醇萃取物及水溶物4部分中的异黄酮含量进行测定,并采用DPPH·法对各萃取物进行自由基清除实验.结果显示,(1)氯仿、乙酸乙酯、正丁醇萃取物及水溶物4部分的异黄酮含量分别为35.27%、53.42%、52.13%和2.34%.(2)抗氧化实验显示, 4 部分清除DPPH·的IC50值分别为252、49、197和344 μg/mL.(3)相关性分析表明,野葛花醇提物各萃取部分的抗氧化活性主要来自于其中含有的异黄酮类化合物.研究表明野葛花醇提物的乙酸乙酯和正丁醇萃取部分异黄酮含量较高;氯仿、乙酸乙酯、正丁醇萃取物及水溶物4部分对DPPH自由基均有一定的清除作用,其中以乙酸乙酯萃取物的效果最佳;表明异黄酮是一种天然的抗氧化剂,具有较强的抗氧化作用.     

钙离子对紫花苜蓿及苜蓿根瘤菌耐酸能力的影响

土壤酸性是阻碍苜蓿根瘤菌与其宿主紫花苜蓿之间高效共生固氮的重要环境因子.本文研究了Ca2 对紫花苜蓿及苜蓿根瘤菌耐酸能力的影响.结果表明:加入一定浓度的Ca2 (5和10mmol·L-1)能提高苜蓿根瘤菌的生长速率,使苜蓿根瘤菌提前进入对数生长期.中性pH条件下,Ca2 的加入对苜蓿根毛变形率无显著影响;低pH条件下,加入2、5和10mmol·L-1的Ca2 均可提高根毛变形率,Ca2 浓度越高,其影响越显著,说明低pH下Ca2 可能会促进苜蓿根瘤菌与其宿主之间的识别.低pH条件下加入Ca2 可以使苜蓿结瘤提前,结瘤率提高;结瘤动力学检测结果表明,加入一定浓度的Ca2 可以使同期结瘤数增加,越是结瘤后期,环境pH越低,这种表现越明显.     

水杨酸、茉莉酸甲酯和乙烯利对野葛细胞悬浮培养生产葛根素的影响

野葛〔Ｐｕｅｒａｒｉａｌｏｂａｔａ(Ｗｉｌｌｄ.)Ｏｈｗｉ〕是我国及其他东亚国家传统的药用资源,其主要药用成分为葛根素,广泛用于治疗多种心血管疾病[1]。由于近年来生态环境的人为破坏,野生野葛资源已不能满足人们对葛根素药物的需求,通过细胞工程可以实现野葛资源的可持续性开发。本项目组已经建立了野葛组织培养和植株再生[2]及细胞悬浮培养体系[3],研究结果表明,悬浮细胞培养物能够生产葛根素,但产量仍有待于提高[3]。已知水杨酸(ｓａｌｉｃｙｌｉｃａｃｉｄ,ＳＡ)、乙烯和茉莉酸类化合物(ｊａｓｍｏｎａｔｅｓ,ＪＡｓ)能够在高…     

Mechanism of acid tolerance in a rhizobium strain isolated from Pueraria lobata (Willd.) Ohwi

The Rhizobium sp. strain PR389 was isolated from the root nodules of Pueraria lobata (Willd.) Ohwi, which grows in acidic (pH 4.6) yellow soil of the Jinyun Mountains of Beibei, Chongqing, China. While rhizobia generally have a pH range of 6.5-7.5 for optimum growth, strain PR389 grew in a liquid yeast extract - mannitol agar medium at pH 4.6, as well as in a pH 4.1 soil suspension, suggesting acid tolerance in this specific strain of rhizobium . However, at pH 4.6, the lag phase before vigorous growth was 40 h compared with 4 h under neutral conditions (pH 7.0). For PR389, the generation time after the lag phase remained the same at different pH levels despite the different durations of the lag phase. Except in the pH 4.4 treatment, the pH of the culturing media increased from 4.6, 4.8, 5.0, and 5.5 to neutral and slightly alkaline after 70 h of culture. Chloramphenicol was added to determine if protein production was involved in the increasing pH process. Chloramphenicol significantly inhibited PR389 growth under acid stress but had little effect under neutral conditions. Proton flux measured during a short acid shock (pH 3.8) revealed that this strain has an intrinsic ability to prevent H(+) from entering cells when compared with acid-sensitive rhizobia. We propose that the mechanism for acid tolerance in PR389 involves both intracellular and extracellular processes. When the extracellular pH is lower than pH 4.4, the cell membrane blocks hydrogen from entering the cell. When the pH exceeds 4.4, the rhizobium strain has the ability to raise the extracellular pH, thereby, potentially decreasing the toxicity of aluminum in acid soil.     

野葛离体培养进展及潜在应用价值

综述了野葛离体培养的研究进展及其利用离体培养进行植物次生代谢物——异黄酮的提取.     

野葛花异黄酮化学成分研究

从野葛花中分离得到7个异黄酮类化合物,经理化和光谱鉴定分析为：尼泊尔鸢尾异黄酮（1）、尼泊尔鸢尾异黄酮7-0-β-D-葡萄糖苷（2）、葛花苷（3）、染料木素（4）、刺芒柄花素（5）、大豆甙元（6）和8-C-芹菜糖（1→6）-葡萄糖大豆甙（7）.     

Preparation,Structural Analysis and Antioxidant Activity of Polysaccharides and Their Derivatives from Pueraria lobata

Pueraria lobata polysaccharides (PLPs) were obtained by hot water extraction using Pueraria lobata as raw material. Structural analysis revealed that PLPs may have a repetitive backbone units of →4) -α-D-Glcp (1→4-α-D-Glcp (1→. Phosphorylated Pueraria lobata polysaccharides (P-PLPs), carboxymethylated Pueraria lobata polysaccharides (CM-PLPs) and acetylated Pueraria lobata polysaccharides (Ac-PLPs) were obtained by chemical modifications of PLPs, respectively. The physicochemical properties and antioxidant activities of these four Pueraria lobata polysaccharides were studied in comparison. In particular, the clearance rate of P-PLPs exceeded 80 %, and was expected to achieve the same effect as V_c. The results showed that the effects of different chemical modifications on the antioxidant activity of PLPs varied greatly.     

不同采集时间野葛不同部位总黄酮和葛根素含量比较

临床常用药材葛根来源于野葛（Pueraria lobata（Willd．）Ohwi]的干燥根,含有多种异黄酮化合物,市场需求量较大,资源比较紧张。过度无序的采挖不仅使其野生资源面临枯竭的危险,也造成了产地区域生态环境的破坏。有研究表明,野葛地上部位含有的成分与葛根基本相同。为寻求利用野葛地上藤茎部位替代葛根药用的可行性,作者用紫外分光光度法和高效液相色谱法分析了不同时间采集的野葛不同部位的总黄酮和葛根素含量,为进一步扩大和开发野葛的药用新资源提供参考依据。     

吐温-80对野葛毛状根生长及异黄酮含量的影响

将不同浓度的吐温-80添加到野葛毛状根悬浮培养液中,研究在一定的作用时间内其对毛状根生长及次生代谢物合成与分泌的影响。结果表明,采用2％浓度处理较为适宜,不仅可以提高毛状根内葛根素的含量,而且有利于培养液中葛根素、大豆甙元及总异黄酮的积累,与对照相比,其含量可分别提高24．2％、50％和46．7％。在该浓度下连续处理毛状根72h后,发现毛状根仍生长旺盛,其生长量已是对照的1．5倍。但不同时间的连续处理对毛状根及培养液中几种异黄酮物质的积累与释放作用不同,其中以处理48h最有利于培养液中总异黄酮的累积,其含量是毛状根中的38倍。     

野葛内生真菌的分离、鉴定及体外细胞毒活性

目的:药用植物内生真菌是一类重要的微生物资源,其代谢产物有着广泛的生物学活性。该研究拟从野葛(Pueraria lobata(Willd.)Ohwi)中分离有细胞毒活性的内生真菌。方法:组织块改良法分离内生真菌;细胞毒活性测定采用Alamar blue法;结合形态学和分子生物学方法进行菌种鉴定。结果:获得的34株内生真菌中菌株KLBMP f0027对HepG2、HO-8910、NCI-H460、SGC-7901等细胞株均有显著活性,ID50分别为437.4、460.0、542.5、771.2。而且活性产物相对稳定,对温度、pH变化及蛋白酶不敏感。代谢过程研究显示菌株KLBMP f0027的活性产物合成与细胞生长属于部分耦联关系类型。形态学和ITS-rDNA序列分析鉴定菌株为Aspergillus ostianus strain KLBMP f0027。结论:野葛内生真菌A.ostianus strain KLBMP f0027可作为细胞毒活性候选菌株进行深入研究。