新型基因工程人肿瘤坏死因子研制成功

新型基因工程人肿瘤坏死因子研制成功据中国科学报１９９４年１２月１４日报道,中国科学院上海生物工程中心陈常庆教授主持的课题组研制成功了新型基因工程人肿瘤坏死因子。实验室研究和临床试验资料表明,这种人肿瘤坏死因子对多数肿瘤具有细胞毒和抑制生长的作用,它能...     

日本基因工程药物产业化最新动态

本文综述了日本基因工程药物发展概况，内容包括白细胞介素类，血细胞刺激因子，生长因子，干扰素，肿瘤坏死因子等。重点介绍了各产品的市场前景和开发最新动向，并简要讨论了日本基因工程药物开发的特点和值得借鉴之处。     

抗癌制剂研制获重大突破

严重危害人类身体健康的恶性肿瘤有了新克星。第二军医大学神经生物学教究室何晓龙博士在我国著名生理学家朱鹤年教授、复旦大学遗传学研究所赵寿元教授的指导下,研制成功高活性人肿瘤坏死因子(TNF)衍生物,为癌症患者带来了福音。专家认为这一研究成果达到了国际先进水平。人肿瘤坏死因子是本世纪七十年代中期发现的一种具有     

肿瘤坏死因子结构研究进展

肿瘤坏死因子是α-肿瘤坏死因子和淋巴毒素的统称,它们具有相同的细胞受体.国内外学者在阐明人肿瘤坏死因子三级结构的基础上,结合使用化学修饰,抗 体结构域定位、定点诱变等方法对人肿瘤坏死因子结构与其功能的关系进行了研究,确定了人肿瘤坏死因子分子中对其活性至关重要的部位,同时也基本阐明了人α-肿瘤坏死因子的受体结合位点的氨基酸组成以及它们在人肿瘤坏死因子三、四级结构上的位置.     

Cetus公司对第三种遗传工程蛋白质进行试验

Cetus 公司宣布开始进行人肿瘤坏死因子(TNF)的临床试验,肿瘤坏死因子是从人免疫系统提取的一种蛋白质,在治疗某些癌症方面可能证明是有用的。肿病坏死因子是 Cetu公司开始对人进行试验的第三种治疗蛋白质。其它两种蛋白质是前白细胞素(R)(人重组体白细胞间素-2)和 BETASERON(R)(人重组体β干扰素)。Cetus 公司生产的肿瘤坏死因子是应用先进的基因工程技术生产的肿瘤坏死因子的类似     

恒pH葡萄糖流加方法培养重组大肠杆菌生产人肿瘤坏死因子-α及其动力学研究

研究了一种新型的流加方法──恒pH流加葡萄糖法,用于培养重组大肠杆菌生产人肿瘤坏死因子-α。流加后培养液中菌体OD(600)达到9．0,是在LB培养基培养的15倍,而α-肿瘤坏死因子的比活保持（1．05±0．11）×105u/mg,并建立了菌体生长的动力学方程。     

利用pH电极流加葡萄糖培养重组大肠杆菌生产人α—肿瘤坏死因子？…

应用一种新型的ｐＨ电极流加葡萄糖方法,用于培养重组大肠杆菌生产人α－肿瘤坏死因子。流加后培养液中菌体ＯＤ６００达到９．０,而α－肿瘤坏死因子的比活保持１．０５±０．１１×１０＾５ｕ／ｍｇ。与指数流加方法比较,二者能达到的最大菌体密度相近,而利用ｐＨ电极流加葡萄糖更具有设备简单,操作方便的特点。     

恒pH葡萄糖流加方法培养重组大肠杆菌生产人肿瘤坏死因子—α及？…

研究了一种新型的流加方法－恒ｐＨ流加葡萄糖法,用于培养重组大肠杆菌生产人肿瘤坏死因子－α。流动后培养液中菌体ＯＤ６００达到９．０,是在ＬＢ培养基培养的１５倍,而α－肿瘤坏死因子的比活保持（１．０５±０．１１）×１０＾５ｕ／ｍｇ,并建立了菌体生长的动力学方程。     

肿瘤坏死因子第59位酪氨酸对其细胞毒活性的意义

肿瘤坏死因子(Tumor Necrosis Factor,TNF)的基因克隆表达成功后,已进行了广泛的实验室研究,并进入Ⅰ期及Ⅱ期临床试验。但关于肿瘤坏死因子结构与功能关系人们尚所知甚少,阻碍了对肿瘤坏死因子各种生物活性的机制研究,也影响了肿瘤坏死因子的临床应用。本研究为肿瘤坏死因子结构与功能关系研究的一部分。肿瘤坏死因子不仅有广泛的生物学活性,也可引起严重的毒副作用。本文用寡核苷酸诱导的体外基因定点突变法,选择位于肿瘤坏死因子分子中央保守区第59位酪氨酸,将其改变为门冬氨酸。所选用的琥珀突变选择性突变系统,造成肿瘤坏死因子基因突变,获得较高的突变效率(约80％)。DNA序列分析证实第59位酪氨酸密码子TAC突变为门冬氨酸密码子GAT。将突变体肿瘤坏死因子基因于同一原核表达载体进行表达,结果表明,突变后不影响表达量及表达产物分子量,但其细胞毒比活性下降724倍,表明Tyr59对于维持肿瘤坏死因子细胞毒活性非常重要。     

利用Ph电极流加葡萄糖培养重组大肠杆菌生产人α-肿瘤坏死因子的研究

应用一种新型的pH电极流加葡萄糖方法,用于培养重组大肠杆菌生产人α-肿瘤坏死因子。流加后培养液中菌体OD₆₀₀达到9.0,而α-肿瘤坏死因子的比活保持1.05±0.11×10⁵u/mg。与指数流加方法比较,二者能达到的最大菌体密度相近,而利用pH电极流加葡萄糖更具有设备简单,操作方便的特点。     

肿瘤坏死因子受体超家族和相关蛋白

肿瘤坏死因子受体超家族和相关蛋白李贵新郭鸣张玲（山东省医学科学院基础医学研究所,济南２５００６２）关键词肿瘤坏死因子受体超家族信号转导途径基于对肿瘤坏死因子（ＴＮＦ）信号转导途径的研究,肿瘤坏死因子受体（ＴＮＦＲ）超家族的结构和功能得到了深入探究,而...     

一种新型人TNF表达质粒的构建及在大肠杆菌中的高表达

在详细分析TNF结构及前人有关TNF结构与功能关系研究的基础上,应用PCR技术构建了一种新型人肿瘤坏死因子(TNF)分子的编码基因,并将该编码基因插入表达质粒,转化大肠杆菌,通过温度诱导获得了高表达.活性测定的结果表明,新型人TNF对L929细胞的细胞毒活性较原型人TNF升高了10³数量级.     

基因工程菌生产重组人组织因子的发酵研究

根据表达重组人组织因子基因工程菌的自身特点,在30L发酵罐上,通过控制发酵pH、葡萄糖浓度、诱导物磷酸浓度、搅拌速度及采用分批补料等方法,对重组人组织因子基因工程菌高密度发酵和高效表达的条件进行了研究。实验结果表明:诱导物终浓度低于0.1mmol/L,菌体密度OD60014,发酵周期10.5h,基因工程菌批发酵平均产量为37.41g/L,重组人组织因子表达量为6.56 mg/L。关键词:基因工程菌;高密度发酵;组织因子     

葡萄糖和肿瘤坏死因子-α对内皮细胞中早期生长反应基因-1表达的影响

目的探讨葡萄糖和肿瘤坏死因子-α对内皮细胞中早期生长反应基因-1表达的影响。方法利用人脐静脉内皮细胞体外培养,予以25mmol/L葡萄糖和/或10ng/ml肿瘤坏死因子-α与内皮细胞共同孵育,运用蛋白免疫印迹方法检测细胞中早期生长反应基因-1蛋白的表达,运用酶联免疫吸附法检测纤溶酶原激活抑制物-1的表达。结果葡萄糖和肿瘤坏死因子-α均可增加早期生长反应基因-1的表达,两种因素共同作用产生协同作用。而且,葡萄糖和肿瘤坏死因子-α也可促进纤溶酶原激活抑制物-1的表达。细胞外调节蛋白激酶1/2的抑制剂(PD98059)可下调肿瘤坏死因子-α所诱导的早期生长反应基因-1、纤溶酶原激活抑制物-1的表达,而对葡萄糖所诱导的早期生长反应基因-1的表达无明显影响。结论肿瘤坏死因子-α可能通过细胞外调节蛋白激酶1/2路径促进早期生长反应基因-1和纤溶酶原激活抑制物-1表达。肿瘤坏死因子-α和葡萄糖可能通过不同的信号通路调节早期生长反应基因-1、纤溶酶原激活抑制物-1表达,在肥胖、糖尿病等代谢紊乱所致的血管并发症的发生中起到重要的作用。     

1991年生物科学进展信息集萃(国外部分)

1月△瑞士苏黎世IBM实验室,研制成功钨针头电子源全息电子显微境。可观察到毫微秒级生命化学过程,为生物学家提供了新的研究手段。△德国拜耳公司花费5亿马克,研制成新药Nimo-top,这种药有良好的抗衰老作用,对治疗早老性痴呆也有显著效果,已正式投放市场。△1月29日,美国国立癌症研究所研究人员对患恶性黑色素瘤的一名妇女和一名男子实施了基因治疗。专家们从患者组织中取出一些“浸润性肿瘤淋巴细胞”,并向这些细胞注入可产生“肿瘤坏死因子”的基因,再将这种经过遗传改造的细胞注入患者体内,使这些细胞自动地转移到癌组织,并在那里产生大量的“肿瘤坏死因子”以杀灭癌细胞。     

人肿瘤坏死因子与人γ干扰素重组双功能融合蛋白的研制

肿瘤坏死因子与γ干扰素具有非常相似的生物学活性,并在一些主要的生物活性方面表现有较强的协同作用。本文采用寡核苷酸指导下的定位缺失-插入体外基因突变技术,删除了干扰素与肿瘤坏死因子串联基因之间的非编码区,去徐了γ干扰素的翻译终止信号,插入了一个人工设计的连接肽,使γ干扰素与肿瘤坏死因子基因在不改变读码框架的条件下融合起来,并在大肠杆菌表达系统中表述了兼有γ干扰素和肿瘤坏死因子功能的融合蛋白。     

利用带有原核增强子样序列的新型载体在大肠杆菌中高效表达人α肿瘤坏死因子

将去除信号肽的人肿瘤坏死因子-α(Tumor necrosis factor-α,TNF-α)cDNA插入到带有原核增强子样序列Px的新型表达载体pBV320中,使TNF cDNA 5′端直接置于大肠杆菌trp启动子下游,采用37℃恒温培养,使TNF在大肠杆菌中获得了高效表达,表达活性达1.35(±0.17)×10~6U/L菌液。表达的TNF-α对L929细胞的毒性作用可被抗人肿瘤坏死因子-α的单克隆抗体所中和。表达菌裂解液作SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳,显示有一条分子量与TNF分子量吻合、约为17000道尔顿的蛋白带。利用DEAE-Sepharose阴离子交换层析及Sephacryl S-200凝胶过滤对上述重组人TNF-α进行纯化,获得电泳纯产品,比活性为1.48×10~6U/mg。     

基因工程

871892人类肿瘤坏死因子[专,英〕/Mark,D .F.…了PCT Patent Appl.WO8602381.Pub.24.04.86.Appl.US 661026,filed 15.10.54〔译自CBA,1956,(8),2868〕 运用rDNA技术产生了人肿瘤坏死因子,介绍了有关的方法、载体和所用的细胞以及这些具有N一末端缺失和超级生物学活性的突变型蛋     

第56位酪氨酸与肿瘤坏死因子细胞毒活性的关系*

选择肿瘤坏死因子分子中间部分保守区第56位酪氨酸,用寡核苷酸诱导的体外基因定点突变法,将其改变为谷氨酰胺。将突变的肿瘤坏死因子基因插入表达载体pBV220,所得表达产物的分子大小及表达量均无明显变化,但其细胞毒活性及比活性均下降数百倍,表弱该区是肿瘤坏死因子细胞因子细胞毒活性的必需区。     

人肿瘤坏死因子及其突变体的基因工程下游工艺研究

研究了重组人肿瘤坏死因子(rhTNFα)及其突变体[Lys²]-人肿瘤坏死因子[Lys²]-rhTNFα)的基因工程下游工艺。rhTNFα和[Lys²]-rbTNFα的温控表达工程菌株在B-BTaunE 10型15L自控罐中经发酵每升可得50g湿菌体。rhTNFα和[Lys²]-rhTNFα的表达水平仍能保持在50％以上,且表达产物为可溶性蛋白。所得菌体经超声破菌、硫酸铵沉淀,然后依次用DEAE—Sepharose FF、CM-Sepharose FF和Sephacryl S-200柱层析进行分离纯化,由每升发酵液菌体最终可得1g左右的纯品,纯度达到98％左右,rhTNFα的比活为～1.5×10⁸IU／mg,[Lys²]－rhTNα的比活为～6×10⁸IU／mg。