CCl4肝损伤与免疫性肝损伤小鼠模型间差异性比较研究

本文对比研究了CCl_4肝损伤与免疫性肝损伤小鼠模型肝组织病理切片、生理、生化指标及差异基因表达谱的变化,根据两种肝损伤模型的差异表达基因,初步探讨了它们致肝损伤的机理。结果表明,两组模型小鼠的ALT、AST等多项生化指标与正常小鼠相比存在显著性差异;通过表达谱芯片实验,在CCl_4组和免疫组中分别筛选得到379条和293条与正常组差异表达基因;其中有105 条基因在两个模型组中均差异表达(表达下调基因58条,表达上调基因47条)。提示CCl_4肝损伤与免疫性肝损伤小鼠模型间有相似性,但差异亦较明显。     

免疫性损伤小鼠肝脏的基因表达谱变化

采用卡介苗和脂多糖联合诱导的方法建立小鼠免疫性肝损伤模型, 分别提取正常对照组与免疫性肝损伤组小鼠的肝脏总RNA, 经反转录用Cy3-dUTP和Cy5-dUTP分别标记制备对照组与模型组来源的cDNA探针, 并将cDNA探针与小鼠基因表达谱芯片杂交, 杂交结果经芯片扫描仪扫描并用相关软件进行分析. 结果表明, 与对照组相比, 免疫性肝损伤组有293条基因发生了差异表达, 其中188条基因表达量明显上调, 另外105条基因表达量明显下调. 通过对一些关键差异表达基因的生物学功能分析表明, 卡介苗与脂多糖联合诱导的小鼠免疫性肝损伤的发生、发展过程与肝细胞的免疫反应、细胞合成与代谢、细胞凋亡及转运等过程密切相关, 这对进一步阐明免疫性肝损伤高度相关的基因表达调控网络, 进而阐明免疫性肝损伤的病理机制具有十分重要的作用.     

CCl4致小鼠肝损伤中几种免疫介质含量变化的研究

本文通过研究CCl4致小鼠肝损伤组织匀浆和血浆一些免疫介质含量的变化以探讨这些免疫介质在CCl4诱发肝损伤过程中作用机制.分别选用30只健康成年小鼠,雌雄各半,随机分成对照组和CCl4负荷组,每组15只.通过腹腔注射CCl4诱发肝损伤后,分别在第2、4、6周检测肝组织匀浆cAMP、cGMP和MDA及血浆IL-2、TNF-α水平的变化.结果显示,在整个实验期内,CCl4组肝组织匀浆cAMP水平均低于或明显低于对照组;cGMP在实验第2周后,高于或显著高于对照组;cAMP/cGMP比值呈现下降趋势,并低于或明显低于对照组;MDA含量明显高于对照组.在整个实验期内,CCl4组血浆IL-2水平下降或显著下降;TNF-α水平则均高于或显著高于对照组.结果提示,CCl4负荷诱发免疫介质cAMP、cGMP、TNF-α和IL-2发生剧烈变化,在介导肝损伤过程中可能起重要作用.     

乳酸菌源有机硒对肝损伤小鼠脾脏脂质过氧化和NK细胞活性的保护效应研究

本文通过研究乳酸茵源有机硒干预CCl4致肝损伤小鼠脾脏NK细胞活性和脂质过氧化反应的变化,探讨该有机硒在抗损伤保护过程中的效应及其机制。分别选用60只健康成年小鼠,雌雄对半,随机分成对照组(C组),有机硒组(Se组),CCl4组、CCl4-有机硒保护组(CCl4-Se组),每组15只。通过腹腔注射CCl4诱发肝损伤后,分别在第2、4周检测脾脏NK细胞活性及其组织匀浆GSH—Px、CAT、SOD活性和MDA含量变化。结果显示,在整个实验期内,C组、Se组和CCl4-Se组脾组织匀浆GSH—Px、CAT和SOD活性均高于或明显高于CCl4组,Se和CCl4-Se组与C组比较除SOD活性在第4周有明显升高外均差异不显著;CCl4组小鼠脾脏MDA含量均显著高于C组、Se组和CCl4-Se组,而CCl4-Se组与C组接近,Se组较CCl4-Se组和C组低;Se组NK细胞活性最高,第4周明显高于C组,CCl4组最低且低于或明显低于CCl4-Se、Se和C组,CCl4-Se组与C组无明显差异。结果提示,乳酸茵源有机硒能够提高正常机体抗氧化能力,在干预肝损伤过程中,可以通过改善和提高脾组织抗氧化酶活性及NK细胞活性发挥积极有效的作用。     

CCl4致小鼠肝损伤中几种免疫介质含量变化的研究

本文通过研究CCl4致小鼠肝损伤组织匀浆和血浆一些免疫介质含量的变化以探讨这些免疫介质在CCl4诱发肝损伤过程中作用机制。分别选用30只健康成年小鼠,雌雄各半,随机分成对照组和CCl4负荷组,每组15只。通过腹腔注射CCl4诱发肝损伤后,分别在第2、4、6周检测肝组织匀浆cAMP、cGMP和MDA及血浆IL-2、TNF-α水平的变化。结果显示,在整个实验期内,CCl4组肝组织匀浆cAMP水平均低于或明显低于对照组;cGMP在实验第2周后,高于或显著高于对照组;cAMP／cGMP比值呈现下降趋势,并低于或明显低于对照组;MDA含量明显高于对照组。在整个实验期内,CCl4组血浆IL-2水平下降或显著下降;TNF-α水平则均高于或显著高于对照组。结果提示,CCl4负荷诱发免疫介质cAMP、cGMP、TNF-α和IL-2发生剧烈变化,在介导肝损伤过程中可能起重要作用。     

两种急性免疫性肝损伤小鼠模型的对比研究

目的比较两种急性免疫性肝损伤小鼠模型的肝功能及淋巴因子变化特点和规律,为研究抗肝炎药物提供理想的动物模型。方法选用BCG＋LPS和Con-a建立两种免疫性肝损伤模型。以小鼠血清转氨酶水平变化及肝脏病理学检查作为肝损伤判断标准,以ELISA法测定血清中IL-2、IL-4、IL-10、TNF-α、IFN-r的变化。结果与正常对照组相比,两组模型ALT、AST的活性均显著升高（P〈0.01）;BCG＋LPS组IL-2、IFN-r、TNF-α的含量明显高于正常对照组（P〈0.01）,但IL-4、IL-10的含量无明显变化;Con-a组IL-2、IL-4、IL-10、TNF-α、IFN-r的含量均高于正常对照组（P〈0.01）。两组模型均出现严重的肝组织病理改变。结论Con-a建立的免疫性肝损伤模型更适用于防治免疫性肝损伤药物的筛选和研究。     

薄芝糖肽对小鼠实验性肝损伤的保护作用

目的观察薄芝糖肽注射液对四氯化碳(CCl4)肝中毒小鼠的抗氧化作用.方法小鼠腹腔注射40% CCl4液体石蜡诱发急性肝损伤.然后治疗组给予薄芝糖肽注射液,以盐水代替薄芝糖肽注射液作为阴性对照,以联苯双酯代替薄芝糖肽注射液作为治疗阳性对照.以血清谷丙转氨酶(ALT)活性和肝组织中脂质过氧化产物(MDA)、抗氧化剂还原型谷胱甘肽(GSH)含量作为观测指标.结果注射CCl4各组小鼠都出现ALT活力急剧升高,肝组织中MDA含量明显增多,同时GSH含量明显减少,证实急性肝损伤模型成立,并且表明与过氧化作用有关.经薄芝糖肽治疗的小鼠,ALT活力在几天之内恢复到正常水平,与盐水对照组差异显著(p＜0.05);薄芝糖肽一方面抑制CCl4诱导的MDA含量升高,同时又可抑制GSH含量的减少(p＜0.05).结论用CCl4造成实验性小鼠肝损伤,小鼠血清谷丙转氨酶大幅度升高,肝组织中脂质过氧化产物丙二醛明显增高的同时,抗氧化剂还原型谷胱甘肽含量明显降低.经薄芝糖肽注射液治疗,可使ALT在几天之内降至正常,同时使肝组织中抗氧化剂还原型谷胱甘肽含量明显回升,使过氧化产物得到尽快清除.提示薄芝糖肽具有直接或间接的抗氧化作用.     

制备低剂量四氯化碳诱导小鼠慢性肝损伤模型的探讨

目的：通过注射低剂量四氯化碳（ carbon tetrachloride ,CC14）建立B/C小鼠肝损伤模型。方法正常B/C小鼠随机分为正常对照组、油对照组、CCl4模型组。正常对照组常规饲养;油对照组腹腔注射鲁花花生油（10μL/g,1次/3天,连续6周）;CC14模型组腹腔注射0.5％CC14（10μL/g,1次/3天,连续6周）。第6周,各组小鼠检测血清AST、ALT浓度,HE及Masson染色后观察小鼠肝脏结构、细胞形态及纤维化程度。结果第6周CCl4模型组小鼠血清ALT（P＝0.00）、AST（P＝0.00）浓度极显著性增高,HE及Masson染色显示CCl4模型组小鼠肝上皮细胞呈广泛性空泡样变及大量坏死,肝小叶内出现明显的条索样纤维增生,其纤维化程度评分显著性升高（P ＝0.00）,纤维显色积分光密度值极显著性增高（P ＝0.00）。结论注射低剂量CCl4可以诱导B/C小鼠肝损伤模型,实验模型具备肝损伤和肝纤维化病理特征。     

肝细胞生长因子基因修饰的人脐带间充质干细胞对大鼠慢性肝损伤的治疗研究

目的：研究肝细胞生长因子（HGF）基因修饰的人脐带间充质干细胞（MSC）对Wistar大鼠慢性肝损伤的治疗作用。方法：利用携带人HGF基因的重组腺病毒（Ad～HGF）对MSC进行基因修饰;通过皮下注射CCl4-橄榄油溶液建立大鼠肝损伤模型;56只Wistar雄性大鼠随机分为正常对照组、模型组、MSC组、HGF组和HGF／MSC组,分别尾静脉注射生理盐水、MSC、Ad-HGF或HGF／MSC,通过血清肝功能检测及肝组织的生化指标、病理切片等评价治疗效果。结果：利用腺病毒将HGF基因转入MSC并确定了最佳感染条件。CCl4-橄榄油诱导4周后,动物肝脏外观出现明显的脂肪变性和血清转氨酶明显升高,表明成功诱导了大鼠慢性肝损伤模型。经过4周治疗,治疗组动物的体重明显升高、肝指数明显降低,动物存活率高于模型组（模型组：50％;MSC组：70％;Ad-HGF组：70％;HGF／MSC组：90％）。肝功能指标测定结果显示,与模型组比较,HGF／MSC组动物的天门冬氨酸氨基转移酶（406.75±35.98 vs.513.75±12.71U／L,P〈0.01）、丙氨酸氨基转移酶（124.6±10.6 vs.169.67＋15.38 U／L,P〈0.05）和总胆红素（14.6±2.08 vs.19.25±1.38g／dL,P〈0.01）均明显降低,白蛋白含量（29.1±1.3vs.22.05±2.61g／L,P〈0.05）明显升高;Ad-HGF组只有天门冬氨酸氨基转移酶（436.0±18.40vs.513.75±12.71U／L,P〈0.05）明显降低;而单纯MSC治疗对肝功能改善不明显。丙二醛测定结果显示,治疗后动物肝组织中的过氧化反应均较模型组显著减弱。HGF／MSC组和MSC组动物肝组织中的羟脯氨酸含量与模型组比较明显降低（69.27±14.58,63.23±13.23 vs.96.59±15.05mg／mL,P〈0.01）。上述实验结果提示3种治疗方式对CCl4-橄榄油引起的大鼠肝损伤均有一定的治疗效果,可减轻CCl。导致的肝损伤程度,增加动物体重,降低肝脏指数,减轻肝组织的过氧化反应,提高动物的存活率,其中HGF／MSC治疗效果最为明显,而且细胞注射没有引起动物的不良反应。结论：3种治疗方式均可改善CCl。导致的肝损伤,其中以HGF／MSC对肝损伤的治疗效果最好。本实验为HGF／MSC的临床研究提供了新的实验数据,为治疗肝损伤提供了新的治疗措施。     

海珠益肝胶囊对免疫性肝损伤模型小鼠的保护作用

目的：观察海珠益肝胶囊对卡介苗（BCG）加脂多糖（LPS）诱导的小鼠免疫性肝损伤的防护作用。方法：采用卡介苗（BCG）加脂多糖（LPS）诱导小鼠免疫性肝损伤,通过检测小鼠的血清谷丙转氨酶（ALT）和谷草转氨酶（AST）活性及肝脏病理变化来研究海珠益肝胶囊的保肝功能。结果：海珠益肝胶囊防治组小鼠血清ALT及AST活性比模型组显著降低,两组比较,差异有统计学意义。海珠益肝胶囊可明显减轻肝组织病理损伤,以大剂量组作用最佳;海珠益肝胶囊的使用使免疫性肝损伤小鼠肝细胞凋亡减少,且有剂量依赖关系。结论：海珠益肝胶囊对BCG加LPS诱导小鼠产生免疫性肝炎的模型免疫性肝损伤具有显著的保护作用。     

应用基因表达谱芯片研究黄药子对小鼠肝脏的毒性机制(简报)

黄药子为薯蓣科植物黄独(Dioscorea bulbifera L．)的块茎,临床常用于治疗甲状腺肿、抗肿瘤、抗炎、抗病毒等。近年来临床上关于黄药子的毒副作用,尤其是对肝、肾的不良反应屡有报道。当黄药子或其代谢物在肝细胞内累积时会直接干扰肝细     

脂肪细胞分化相关基因在大鼠再生肝中表达变化

肝脏由多种细胞构成,肝再生与细胞分化密切相关,细胞分化受基因转录水平调控。为在基因转录水平了解脂肪细胞分化基因在大鼠肝再生中作用,本文用搜集网站资料和查阅相关论文等方法获得上述基因,用Rat Genome2302.0芯片检测它们在大鼠肝再生(liver regeneration,LR)中表达情况,将三次检验结果相同或相似、在肝再生中表达变化2倍以上、真手术组和假手术组相比差异显著的基因视为肝再生相关基因。初步证实上述基因中75个基因与肝再生相关。肝再生启动(PH后0.5-4h)、G0/G1过渡(PH后4-6h)、细胞增殖(PH后6-66h)、细胞分化和组织结构功能重建(PH后72-168h)等四个阶段起始表达的基因数为44、13、30和1;基因的总表达次数为88、58、302和90。表明相关基因主要在肝再生启动阶段起始表达,在不同阶段发挥作用。它们共表达上调313次、下调167次,分为43种表达方式。表明肝再生中脂肪细胞发生和分化相关基因活动多样和复杂。根据本文研究结果推测,上述基因不仅调节脂肪细胞分化,而且参与肝再生的生理生化活动。     

五倍子小鼠肝脏毒性的基因表达谱分析

昆明种小鼠（雄性,体重20±2g）随机分为正常对照组和五倍子给药组。给药组每日灌胃五倍子提取物（0．2mL／10g体重,相当于8g五倍子生药／1kg体重）一次,连续给药30天。对照组灌胃等量生理盐水。之后分别提取两组小鼠的肝组织总mRNA,经反转录分别用Cy3,Cy5荧光标记．制备用于芯片杂交的cDNA探针。两种探针等量混合后与小鼠全基因组寡核苷酸芯片杂交．杂交信号经芯片扫描仪获取并用GenePix Pro4．0软件分析。结果表明,五倍子给药组中有461条基因差异表达,其中上调基因267条,下调基因194条,功能已知基因373条,功能未知基因88条。通过对这些差异表达基因的生物学功能及生物通路分析,它们主要涉及代谢、DNA结合与转录、蛋白质合成与修饰、细胞骨架及黏附因子、细胞周期与分化、离子通道与受体、信号转导、免疫、细胞凋亡等。上述研究结果对分析五倍子肝损伤机制可能具有十分重要的作用。     

Global MicroRNA Expression Profiling of Mouse Livers following Ischemia-Reperfusion Injury at Different Stages

Hepatic ischemia-reperfusion injury is a dynamic process consisting of two stages: ischemia and reperfusion, and triggers a cascade of physiological and biochemical events. Given the important role of microRNAs in regulating gene expression, we analyzed gene expression changes in mouse livers at sham control, ischemia stage, and reperfusion stage. We generated global expression profiles of microRNA and mRNA genes in mouse livers subjected to ischemia-reperfusion injury at the three stages, respectively. Comparison analysis showed that reperfusion injury had a distinct expression profile whereas the ischemia sample and the sham control were clustered together. Consistently, there are 69 differentially expressed microRNAs between the reperfusion sample and the sham control whereas 28 differentially expressed microRNAs between the ischemia sample and the sham control. We further identified two modes of microRNA expression changes in ischemia-reperfusion injury. Functional analysis of both the differentially expressed microRNAs in the two modes and their target mRNAs revealed that ischemia injury impaired mitochondrial function, nutrient consumption, and metabolism process. In contrast, reperfusion injury led to severe tissue inflammation that is predominantly an innate-immune response in the ischemia-reperfusion process. Our staged analysis of gene expression profiles provides new insights into regulatory mechanisms of microRNAs in mouse hepatic IR injury.     

铁棍山药多糖对四氯化碳诱导的急性小鼠肝损伤的保护作用

为了研究铁棍山药(D.oppositacv.Tiegun)多糖对四氯化碳诱导的小鼠急性肝损伤的保护作用,取72只昆明小鼠随机分为对照组,四氯化碳(CCl4)模型组,阳性对照(联苯双酯)组,铁棍山药多糖低、中、高剂量组,每组12只,灌胃处理后使用CCl4制备急性肝损伤小鼠模型,观察各组形态学变化,同时测定生化指标。实验结果显示,经铁棍山药多糖处理的小鼠的肝损伤程度明显轻于模型组,铁棍山药多糖能降低小鼠血清中谷丙转氨酶(ALT)和谷草转氨酶(AST)含量,提高超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)的活性,降低丙二醛(MDA)、一氧化氮(NO)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的含量。本研究结果表明,铁棍山药多糖对CCl4所诱导的小鼠肝损伤起到一定的保护作用。     

Gene expression profile in immunologically injured liver cell of mice

To study the gene expression profiles between immunologically injured liver cell and normal liver cell of mice and to screen on a large scale the differentially expressed genes associated with the formation of liver injury,the experimental mice were randomly divided into the normal group for controlling and the immunologically liver-injured group induced by BCG and LPS.The liver mRNA of the two groups were extracted respectively and reversely-transcribed to cDNA with the incorpora-tion of different fluorescence(Cy3,Cy5) labeled dUTP as the hybridization probes.The mixed probes were hybridized to the cDNA microarray chips.The fluorescent signal results were acquired by scanner ScanArray 4000 and analyzed with software GenePix Pro 3.0.Among the 14112 target genes,293 genes were found to be significantly differentially expressed,in which 188 genes were up-regulated and 105 genes were down-regulated.Based on the analysis of biological functions of those differentially expressed genes,it was indicated that the occurrence and development of mouse liver damage induced by BCG and LPS were highly correlated with the processes of immune reac-tions,cell synthesis,metabolism,apoptosis and transportation in liver cell,which might be quite im-portant for elucidating the regulatory network of gene expression associated with the liver damage,also important for finally discovering the pathogenic mechanisms of immunological liver damage.     

Methods in molecular cardiology: suppression subtraction hybridisation

Identification of differentially expressed genes in pathological tissues may provide more insight into the molecular mechanism involved in the development or progression of disease. Suppression subtraction hybridisation (SSH) allows the identification of novel, differentially expressed genes without prior knowledge about gene expression patterns or functional and biochemical protein characteristics. This review provides a general overview of the SSH method and gives two examples of SSH in the cardiovascular field.     

蟛蜞菊内酯对四氯化碳致小鼠肝损伤的保护作用

目的:研究中药活性物质蟛蜞菊内酯的保肝作用及其机制。方法:采用小鼠腹腔注射CCl4制作肝损伤模型,测定小鼠血清中谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)、丙二醛(MDA),谷胱甘肽(GSH)和超氧化物歧化酶(SOD)指标,进行肝脏的组织病理学检查,观察蟛蜞菊内酯对CCl4所致肝损伤的保护作用。结果:蟛蜞菊内酯能明显降低肝损伤小鼠的血清ALT、AST和肝组织匀浆中MDA含量,SOD活力增强,明显减轻肝组织变性。结论蟛蜞菊内酯对CCl4引起的肝损伤有明显的保护作用,其机制可能与其抗氧化作用有关。