病理组织PAS染色影响因素分析

目的分析病理组织过碘酸雪夫氏(periodic acid Schiff, PAS)染色的影响因素,以期提高其染色效果。方法选取已知含有PAS阳性物质的胃粘膜组织,分别制作成蜡块,通过对比试验,比较高碘酸水溶液不同染色时长、雪夫氏(Schiff)试剂不同配制方法、Schiff试剂不同保存时间对PAS染色质量的影响。结果胃粘膜组织在使用高碘酸水溶液染色11～15min优于其他时长,Schiff试剂热配法优于冷配法,试剂保存2个月内的染色效果优于试剂保存大于2个月者。结论胃粘膜组织使用高碘酸水溶液染色11～15min、热配法配制的Schiff试剂、保存在2个月内的Schiff试剂进行染色效果最佳。     

荧光胺的合成和应用

近几年来,在蛋白质化学研究中,分析微量化的重要方面之一是使用荧光方法。在氨基酸、多肽、蛋白质测定中,荧光胺(Fluorescamine)可与游离的氨基反应,产生荧光的物质,借此测定的灵敏度可提高达10~(-12) 克分子。荧光胺在柱层析、薄层层析中都可用来测定氨基酸和多肽;也有用作抗体荧光标记的荧光试剂。此试剂已有Hoffman-La Roche公司生产出售,由于此试剂价格昂贵,因而很多实验室都不能普遍使用。本实验室使用国内的现有试剂,参照了有关的方法尝试合成该试剂,现已初步合成。合成的试剂与进口的Hoffman-La Roche公司的产品作了比较,基本符合。并且就此试剂在溶液     

开放试剂在罗氏生化分析仪使用评价

目的评价开放试剂在罗氏全自动生化分析仪(cobas8000-c702)上使用情况方法使用开放性试剂[三酞甘油(TG),丙氨酸氨基转移酶(ALT),碱性磷酸酶(ALP),天门冬氨酸氨基转移酶(AST),总胆固醇(TC),γ-谷氨酞基转移酶(GGT)]由利徳曼厂家提供,以上开放试剂的分析类型,方法原理,试剂组分以及试剂的组成均使用效果合理,且使用开放试剂混合的血清来作为量值传递的载体,用其开放性试剂校准后在对cafs校准品进行赋值,并且对cafs校准品及开放性试剂组成测定的系统进行赋值。结果开放性试剂在检测高值还是低值的血清结果是,批内以及批间的变异系数(CV)均小于5%,这样就开放试剂同时在检测60份临床样本时,所测的结果基本就保持一致(P0.05),相关系数(r)均0.968。开放试剂之间的自比对实验结果,在医学上决定水平处的偏倚都是低于允许误差的范围。试剂的抗干扰能力就没有明显的差异,r值均大于0.968(P0.05)[1]。结论开放试剂在罗氏全自动生化分析上相关性较好、精密度高、偏差小,抗干扰能力强等优点;其检验的结果也具有一定溯源性以及可比性。     

常用生化试剂对钾离子测定的交叉污染分析

目的：研究常用生化试剂对钾测定的试剂交叉污染情况,并探讨解决方法。方法：根据雅培公司测定试剂交叉污染的程序,分别测定各种常用生化试剂对钾测定的交叉污染情况,对有交叉污染的试剂设定SmartWash功能来消除交叉污染。结果：ADA、ALT、GSP、TB测定试剂对钾测定存在交叉污染,设定SmartWash功能后基本可消除交叉污染。结论：多种常用的生化试剂对测定血钾存在试剂交叉污染问题,新的试剂的应用应该根据试剂交叉污染的程序来测定试剂交叉污染情况,找到有效的方法来消除交叉污染,减少测定结果的误差。     

四种丙型肝炎病毒抗体试剂检测方法的性能评估

对血液筛查的四种丙型肝炎病毒(Hepatitis C virus,HCV)抗体试剂检测方法的性能进行评估。方法采用协作标定方式,应用四种检测方法(间接ELISA法、双抗原夹心ELISA法、间接CLIA法、双抗原夹心CLIA法)16种HCV抗体试剂,对经确证筛选出的70份(HCV抗体阳性35份、阴性35份)血浆样本进行检测,通过分析阳性、阴性符合率,评估四种方法 HCV抗体试剂的性能。结果间接ELISA法试剂检测阳性符合率为88.6%(31/35)~94.3%(33/35),双抗原夹心ELISA法、间接CLIA法、双抗原夹心CLIA法试剂检测阳性符合率为91.4%(32/35)~94.3%(33/35),四种检测方法 HCV抗体试剂阳性符合率之间的差异无统计学意义(P0.05);间接ELISA法和间接CLIA法试剂弱阳性样本检出率为11.4%(4/35)~31.4%(11/35),双抗原夹心ELISA法和双抗原夹心CLIA法试剂弱阳性样本检出率为5.7%(2/35)~11.4%(4/35),四种检测方法 HCV抗体试剂对弱阳性样本的检出率之间的差异有统计学意义(P0.05);间接ELISA法试剂检测阴性符合率分别为94.3%(33/35)~100%(35/35),间接CLIA法试剂阴性符合率分别为94.3%(33/35)~97.1%(34/35),双抗原夹心ELISA法和双抗原夹心CLIA法试剂阴性符合率均为97.1%(34/35),四种检测方法 HCV抗体试剂阴性符合率之间的差异无统计学意义(P0.05)。结论四种检测方法 HCV抗体试剂的性能基本一致,不同方法各有优缺点,建议应用多种检测方法对弱阳性样本进行确认检测。     

昆虫细胞表达鲎C因子内毒素活性检测的研究

[目的]开发一种低成本的内毒素检测试剂和方法。[方法]Bac-to-Bac杆状病毒表达系统表达重组鲎凝血C因子,利用动态荧光法进行内毒素检测活性分析。将细胞培养基经过超滤处理,分析其对内毒素检测灵敏度的影响;分析低温储存的检测试剂在不同储存时间,内毒素的检测活性。[结果]经过超滤处理的培养基,内毒素检测灵敏度明显提高,可达到0.05 EU/mL,检测时间90 min内完成;检测试剂在-20℃保存6个月内,检测灵敏度仍可以达到0.1EU/mL。[结论]在昆虫细胞中合成的重组鲎凝血C因子,无需经过蛋白纯化,直接将培养上清用于内毒素检测,灵敏度为0.1~0.05 EU/mL,高于普通鲎试剂的检测水平。     

建立敏感的抗—HBs免疫分析法

<正>固相放免分析如AUSAB试剂(Abbott实验室)已普遍地用于检测抗-HBs,同时也广泛用于临床作为证实已患过乙型肝炎的检测方法。然而,新研究领域的发展例如:抗-HBs杂交瘤细胞分泌克隆的筛选以及对乙肝疫苗免疫小动物后所得抗血清的分析需要建立一种可靠的免疫分析方法。以便在用大量材料作分析时减少AUSAB的高昂费川。另外,在测定杂交瘤克隆细胞融合后的早期分泌物时需要比AUSAB试剂更敏感的试剂。     

全自动生化分析仪试剂交叉污染对血清镁测定的影响

目的:研究血清镁测定中的试剂交叉污染情况,并探讨解决方法.方法:严格按照仪器厂家测定试剂交叉污染的程序,分别测定试剂仓内圈中的14种生化试剂对镁测定的交叉污染情况,对有交叉污染的试剂设定Smart Wash功能来消除交叉污染.结果:CO2、Glu、CK、ALP、TBA测定试剂对镁测定存在交叉污染,设定Smart Wash功能后基本可消除交叉污染.结论:血清镁测定中存在较严重的试剂交叉污染问题,新的试剂在应用前应该测定试剂交叉污染情况,找到有效的方法来消除交叉污染,减少测定结果的误差.     

CK-MB特异性单抗的制备方法及其应用

本研究拟建立肌酸激酶同工酶MB(CK-MB)特异性单克隆抗体(m Ab)的研制方法,对抗CK-MB单抗进行评价分类及性质鉴定,并初步建立CK-MB定量检测试剂。以CK-MB抗原免疫BALB/c小鼠,利用常规单抗制备技术,使用间接和捕获ELISA差异筛选法筛选单抗。利用肌酸激酶同工酶(CK-MM/BB/MB)抗原对所制备单抗的抗原识别表位进行鉴定,另通过免疫印迹法及合成CK-MM、CK-BB差异性的线性表位肽鉴定对所制备的单抗进行评价分类。使用双抗体夹心ELISA方法筛选检测CK-MB抗原的配对m Ab,并初步建立CK-MB定量检测试剂。使用74例临床标本初步评价该试剂与罗氏试剂的检测一致性。最终,我们成功筛选到22株稳定分泌抗CK-MB抗体的杂交瘤细胞株,这些单抗可以分为线性、偏构象的CK-MB和CK-MM或者CK-BB交叉的单抗以及与CK-MB特异反应的偏构象型单抗,并使用偏构象型单抗研制出CK-MB定量检测试剂,该试剂与罗氏试剂相关系数r达到0.930 9。综上所述,本研究建立了研制CK-MB偏构象型特异性单抗的筛选方法,通过对所筛选的单抗进行分析鉴定并建立了CK-MB定量检测试剂,与罗氏试剂检测结果符合率高。     

检测SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳中家蝇蛋白的新方法——海波银染法

介绍一种检测SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳中家蝇幼虫蛋白的新方法-海波银染法。该方法对传统银染方法中的试剂与步骤加以改进,省略了乙醇固定与洗涤步骤,只需20 min即可完成全部染色过程,且仅在国产分析纯试剂及普通操作条件下,灵敏度可达毫微克级水平。     

鼠疫菌F1抗体/抗原酶联免疫诊断试剂盒的应用评价

目的对兰州生物制品研究所有限责任公司研制的鼠疫菌F1抗体酶联免疫诊断试剂盒和鼠疫菌F1抗原酶联免疫诊断试剂盒进行临床应用评价。方法采用双抗原/抗体夹心酶联免疫吸附试验(ELISA)、间接血球凝集试验(IHA)、胶体金免疫层析试验(GICA)3种方法的诊断试剂对比检测云南省地方病防治所中心实验室保藏的和现场采集的血清样品和脏器样品,对血清样品做鼠疫菌F1抗体检测,对脏器样品做鼠疫菌F1抗原检测。结果在358份血清样品中,ELISA试剂检出F1抗体阳性52份(14.52%),IHA试剂检出阳性37份(10.34%),GICA试剂检出阳性45份(12.57%)。ELISA与IHA试剂的符合率为95.23%,与GICA试剂的符合率为96.92%。经统计学χ2检验,ELISA试剂检出F1抗体阳性率高于IHA试剂(χ2=11.53,P=0.000 7),与GICA试剂检出的差异无统计学意义(χ2=3.27,P=0.070 4)。进一步分析滴度差值频数,ELISA试剂检测人血清的敏感性高于IHA试剂的样品占87.5%。在117份脏器样品中,3种试剂均检出F1抗原阳性15份(12.82%),符合率100%。滴度差值频数比较,ELISA试剂检测敏感性高于反向间接血球凝集试验(RIHA)试剂的样品为78.57%。结论兰州生物制品研究所有限责任公司研制的鼠疫菌F1抗体酶联免疫诊断试剂盒和鼠疫菌F1抗原酶联免疫诊断试剂盒性质特异,其敏感性优于IHA试剂盒和GICA试剂条,值得在鼠疫的监测和快速诊断中推广应用。     

贝克曼6300型氨基酸仪蛋白质水解氨基酸分析用试剂的研究

<正> 近十年来,我国进口了多种类型的氨基酸分析仪。与其它厂家的比较,贝克曼6300型氨基酸分析仪在分析灵敏度、分析速度、准确度等方面具有一定优点。但用户也感到有困难之处,那就是试剂需要从美国进口,不但价格较贵,外汇困难,而且千里迢迢,运来的试剂有变质品。为了满足本单位和国内其他用户的需要,我们开展了试剂国产化的研制。经过两年的努力,已取得较好的结果。经最近鉴定,蛋白质水解氨基酸分析所需试剂的主要性能指标已达到进口试剂水平。     

膜Ca~(2 )-Mg~(2 )-ATPase连续自动分析方法

目前,膜ATPase的活性测定主要是利用ATP再生系统,以及测定ATP水解所释放Pi的方法。比色测Pi的方法为Fiske所开创。Lacy改用抗坏血酸作还原剂,还原磷钼酸,提高了灵敏度。通常在中止酶反应,进行Pi比色测定之前,使用离心或过滤去除变性的酶蛋白。Klinc将酶水解产生的Pi透析到还原性试剂中,以进行Na~ -K~ -ATPase的自动分析。Arnold用表面活性剂溶解膜蛋白,省去过滤、离心或透析等步骤,进行膜ATPase的自动分析,具有简便、快速、灵敏度高、结果可靠等特点,本文基于Arnold的工作,全部使用国产仪器,用于红细胞膜Ca~(2 )Mg~(2 )-ATPase的分析。材料与方法 1、试剂 ATP(江门化工厂),Ouabain为Serva公司产品,其余均为国产分析纯试剂。     

化学发光检测试剂鲁米诺的安全使用策略

鲁米诺是一种对于不可见血迹进行增强显示的试剂,是法医科学中最敏感的显色试剂之一,同时也可作为发光试剂应用于各种生物检测体系中。出于对安全与健康的担心,该试剂在英国和其他一些欧洲国家的使用一直受到限制。本文综述了有关鲁米诺试剂对于健康的影响的研究进展,分析显示只要采取适当的防护措施,在犯罪现场或在实验室使用鲁米诺试剂的安全风险可控。     

定量测定生物材料中少量蛋白质的一种简便方法

Lowry 等人通常使用定量测定蛋白质的方法需要操作40分钟左右,并且需要三种试剂。经 Miller 改进的这种技术,测定时间缩短约20分钟。通过以下方法可以缩短测定时间:用升高温度(50℃)以缩短显色时间和改用两种试剂,即用较小体积、较浓的碱性铜试剂和较多量、较稀的酚试剂。     

HIV-1假病毒包装的重要影响因素分析

[目的]分析影响HIV-1假病毒包装的主要因素,建立该假病毒包装的优化条件.[方法]用单因素分析对比的方法,比较了对病毒包装效果有重要影响的转染试剂、转染试剂与质粒的数量、培养基血清类型、细胞周期阶段对于病毒包装效果的影响.[结果]对45批150盘病毒包装结果分析显示,使用PEI转染试剂成本低,转染效果好,其N/P在8-40均可以产生高活性的包装病毒;用进口血清包装时,相对于国产血清结果重复性高;细胞周期处于S及G2/M期时转染质粒相对于S以及G0/G1期有较高的病毒活性.[结论]用PEI为转染试剂可以包装出高活性的病毒,包装获取高活性病毒可以通过质粒与PEI梯度比例以及血清类型构成多个组合策略来实现.     

牛胰岛素的酰胺化反应及其六酰胺产物的分离及鉴定

牛胰岛素用1％三氟化硼甲醇溶液反应后所得六甲酯与饱和氨甲醇溶液反应,在室温下约经144小时可完全酰胺化。反应过程用红外光谱及酰胺含量分析测定。所得酰胺化粗产品经Sephadex G-75凝胶层析可以将胰岛素六酰胺化合物从其聚合物中分离提纯。由红外光谱、紫外光谱及圆二色散光谱测定表明:牛胰岛素的六酰胺化合物的构象与胰岛素有很大不同,其生物活性也丧失殆尽。     

狂犬疫苗糖蛋白ELISA定量分析方法的建立及验证

为狂犬疫苗生产质量控制建立简便、高效、精准的糖蛋白体外效力分析方法,研制适用于狂犬疫苗生产质量控制的狂犬病毒糖蛋白酶联免疫吸附(ELISA)定量分析试剂。采用双抗体夹心法建立狂犬病毒糖蛋白ELISA定量分析体系,优化反应各项参数后考核试剂性能。线性范围为1~180 mIU/mL,灵敏度为0.4497 mIU/mL,分析内变异系数为5.8%~8.2%,分析间变异系数为7.2%~14.4%。用自制试剂与National Institutes of Health(NIH)动物法平行检测10份疫苗相关样品,两种方法测定结果的相对系数r²为0.8943,相关性良好。自制ELISA试剂各项性能指标良好,且与NIH动物法检测结果相关性良好,有望推广用于狂犬疫苗生产质量控制。     

鲎试验测定内毒素的一步显色法

<正>本文介绍了使用单一混合试剂的终点法和LAL显色动力学法。该试剂可用缓冲液、鲎试剂和底物(显色鲎试剂)混合冻干或用市售的LAL凝胶试剂、底物和缓冲液(显色法、凝胶法通用)混合后立即使用。这种单一试剂既可用于显色动力学方法,也可用于一步终点法(规定孵育时间)。由于去除了许多步骤和技术误差,因此可极大地减少显色法的差异。本文对动力学法和终点法进行了详细地比较,单一试剂法也与传统的多试剂法进行了对比。     

细胞凋亡检测方法新进展

细胞凋亡是生命科学研究的热点之一,检测细胞凋亡的方法层出不穷。目前,用于体外细胞凋亡检测的方法已相对成熟,比如:流式细胞术、TUNEL检测法、DNA片断检测等。而用于体内细胞凋亡检测的试剂则正在研究之中,各种检测试剂不断出现。其中,Annexin V、Synap-totagmin I-C2A、ApoSense家族分子与其他检测试剂相比具有一定的优势。该文在介绍几种常用的体外细胞凋亡检测方法的同时,重点介绍上述三种试剂。