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提取高质量人参RNA的方法研究 总被引:13,自引:0,他引:13
针对人参组织多酚、多糖类物质含量较高的特点,比较了改良的异硫氰酸胍法、改良的CTAB法和改良的Trizol法等3种不同的RNA提取方法.3种改良的方法均能从人参组织中提取到总RNA.其中改良的Trizol法能有效地抑制酚类物质和多糖对总RNA提取的影响,能从成熟的叶片中获得高质量、完整性好的总RNA,每克新鲜组织RNA产量在90~120!g之间,电泳分析,28SrRNA亮度约为18SrRNA的2倍,A260/A280介于1.8~2.0之间.用改良的Trizol法分离的RNA,已成功进行了RT-PCR及人参叶cDNA文库构建等研究. 相似文献
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分离芸芥植物基因组DNA的一种方法 总被引:8,自引:0,他引:8
介绍一种能较好地分离植物基因组DNA的方法-SDS法,通过不同芸芥植物材料的多次实验,证明该方法分离芸芥的基因组DNA产率(7.5μg/gFW),纯度(OD260=1.7-1.9)和分子量(50kb左右)都较高,完全能满足RAPD分析的需要,与目前普遍使用的CTAB法相比,SDS法简单,快速,成本低。 相似文献
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一种适用于RT-PCR的杉树类植物中总RNA提取的方法 总被引:10,自引:2,他引:8
杉树类植物含大量的多糖、多酚类物质,这使得此植物的总RNA提取较困难。研究通过比较几种有代表性的提取植物总RNA的方法,建立了一种酸酚法和PEG8000沉淀法相结合的改良的CTAB法。此方法操作简单,使用的试剂均为常规试剂,成本低,能够有效去除植物组织中多糖和多酚类等次生物质,从而得到高质量的RNA。使用这种改良的方法制备的总RNA产物对P450基因成功地进行了反转录聚合酶链式反应(reverse transeriptase-polymerase chain reaction,RT—PCR),证明此方法是一种适用于RT—PCR的杉树类植物组织中总RNA提取的方法。 相似文献
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三种快速提取植物DNA改良方法的比较 总被引:19,自引:0,他引:19
DNA是生物遗传信息的载体,快速提取高分子量、纯净的DNA是进行核苷酸序列测定、基因文库构建和遗传转化等研究的重要步骤。研究以水稻、小麦、大麦、大豆、豌豆和紫云英等为材料,比较了三种改良法提取植物DNA的效果。结果表明,三种改良后的方法不仅保留了原法的许多优点,而且方法简单,不经CsCl_2密度梯度离心能较干净地去除蛋白质及RNA,获得较纯净的、大分子的双链DNA,在不同程度上满足了各种植物提取DNA的需要。 相似文献
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一种简单实用的提取植物DNA的方法 总被引:13,自引:2,他引:13
ASimpleandPracticalMethodforIsolationofPlantDNAQIUGuo-Hua,XUZeng-Fu.CAOJi-Xiang,LIBao-Jian(BiotechnologyResearchCenter,ZhongshanUniversity,Guangzhou510275)植物DNA的提取是植物分子生物学和基因工程研究的一种基本的技术,至今已有了数种方法[1,2]。本文报道一种新的方法,与以前的方法相比,它最大的不同点是:将SDS同时用作细胞膜的去污剂和蛋白质的变性剂,变性的蛋白质通过离心而木是酚抽除去,使得整个操作过程变得简单快捷,比较温和,1h左右就可以获得纯化的植物DNA。用这种方法得到的DNA能… 相似文献
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为获得高质量的基因组DNA,分别采用传统酚-氯仿法、高盐法、试剂盒法和改进酚氯仿法提取香鱼肌肉基因组DNA。琼脂糖凝胶电泳检测结果表明,改进酚氯仿法提取的基因组DNA电泳条带整齐明亮且无降解。紫外分光度计测定DNA浓度和纯度,结果表明,改进酚氯仿法提取的鱼类基因组DNA浓度约为300μg/mL,A260/A280为1.80-1.86。用改进的酚氯仿法提取的DNA进行AFLP分析,扩增结果稳定,电泳条带清晰。综上所述,改进酚氯仿法能够获得高质量DNA,且可以用于进一步的分子生物学研究。 相似文献
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基于AFLP分析用吴茱萸叶高质量DNA的提取 总被引:5,自引:0,他引:5
目的:研究吴茱萸叶基因组DNA的提取方法,以用于扩增片段长度多态性(AFLP)分析。方法:设计了一种改良CTAB法:以石英砂代替液氮研磨;抽提前用不溶性PVP结合酚形成络合物,然后用缓冲液除去;抽提中加入Vc。将改良CTAB法所提吴茱萸叶DNA与传统的SDS法、CTAB法所提DNA进行比较。利用植物的核糖体DNA(rDNA)保守序列设计引物行PCR扩增鉴定吴茱萸DNA及其质量。并确定提取方法中最佳样本含量和β-巯基乙醇浓度。结果:改良CTAB法提取石虎、疏毛吴茱萸总DNA呈白色,A260/A280为1.721~1.886,DNA分子完整,约20kb左右,PCR扩增条带清晰、明亮,无杂带和脱尾。并确定0.10g为最佳样本量,2.0%为最佳β-ME浓度。结论:石英砂研磨简便、迅速、均匀,该实验所建立的改良CTAB法可有效避免次生代谢物的氧化褐变,是一种小量、快速提取吴茱萸叶DNA优化方法。 相似文献
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《Annals of botany》2001,87(6):719-728
To test the reliability of DNA image cytometry for the measurement of nuclear DNA content in plant material, we conducted independent experiments in two laboratories using different image analysis instruments for densitometric measurement of nuclear DNA amount in Feulgen-stained squash preparations of root tips. The 2C nuclear DNA content of the nine species studied spanned a 100-fold range (approx. 0.3–33 pg). The estimates of nuclear DNA content measured with image cytometry methods were comparable to values obtained previously using both photometric cytometry and flow cytometry. Image cytometry methods showed little variation among repeated experiments within each laboratory or among different operators using the same instrument. Furthermore, the interphase-peak method (measurement of several hundred interphase nuclei per slide) was comparable to the classical prophase/telophase approach (measurement of ten early prophase and ten late telophase nuclei per slide). Hence, DNA image cytometry gives accurate and reproducible results and may be used as an alternative to photometric cytometry in plant nuclear DNA content measurements. In the present study, we propose that two standards for quality control of nuclear DNA content measurement are used in plant DNA image cytometry: (1) the coefficient of variation of the peak should be lower than 6%, and (2) the 4C/2C ratio should be between 1.9 and 2.1. 相似文献
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高效的植物DNA提取方法 总被引:22,自引:0,他引:22
利用液氮研磨植物幼芽,以苯酚─氯仿─异戊醇─核糖核酸酶法提取了大豆、菜豆、玉米、高梁等几种农作物的总DNA。所提取的DNA经岛津UV-265紫外分光光度计检测及0.6%的琼脂糖凝胶电泳,结果证明:该方法所提取的植物总DNA纯度高,片段长度整齐,约50kb左右,符合外源DNA导入作物的要求,并且DNA收率很高。 相似文献
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仿刺参基因组DNA提取方法改进 总被引:1,自引:1,他引:0
开发了利用仿刺参管足活体取样提取基因组DNA的方法。按照传统方法提取仿刺参基因组DNA需要杀死实验对象并剖取体腔内纵肌(通常100mg)作为实验材料,并且实验过程中常常因为仿刺参的生物学性状而影响最终实验效果。以仿刺参在生活状态下拔取少量管足(10~20mg即可)作为取样源,在保持仿刺参的生活力不受影响的同时提高了取样效率。对仿刺参基因组DNA的提取方法进行了改进优化,并在常规海洋动物基因组DNA提取方法的基础上增加了部分操作步骤。与常规的基因组DNA提取方法相比,改进后的方法获取的基因组DNA完全符合后续实验要求。而且可随时根据即时效果(中间检测)和后续实验要求调整实验步骤,更增加了实验的可操作性。 相似文献
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高质量毕赤酵母基因组DNA提取方法比较 总被引:4,自引:1,他引:3
旨在比较5种毕赤酵母基因组DNA的提取法,以便获得简便高效的提取高质量酵母基因组DNA的优化方法。分别使用蜗牛酶破壁法,超声波破碎法,液氮研磨法,Lyticase破壁法,试剂盒法提取毕赤酵母基因组DNA,然后进行DNA电泳检测以及紫外分光光度计测定DNA浓度和纯度。结果显示,5种方法均能提取出酵母基因组DNA,而酶法所提取的酵母基因组DNA质量最好。由此证实,蜗牛酶法成本低、效果好,是理想的提取高质量酵母基因组DNA的方法,完全满足后续试验要求。 相似文献