一种改良的植物基因组DNA通用提取方法

高质量的基因组DNA是分子生物学研究的基础,而从富含糖类和次生代谢物且异质性强的植物材料中分离DNA相对困难。本方法在CTAB法和商业DNA提取试剂盒的基础上,在裂解细胞之前,对植物材料进行预处理．去除干扰DNA提取的代谢物,并在后续步骤中进行了一些优化。该方法适于多种不同的植物种类,所提取的基因组DNA质量较好,能满足下一步基因操作的要求,是一种通用的植物基因组DNA提取方法。     

提取高质量人参RNA的方法研究

针对人参组织多酚、多糖类物质含量较高的特点,比较了改良的异硫氰酸胍法、改良的CTAB法和改良的Trizol法等3种不同的RNA提取方法.3种改良的方法均能从人参组织中提取到总RNA.其中改良的Trizol法能有效地抑制酚类物质和多糖对总RNA提取的影响,能从成熟的叶片中获得高质量、完整性好的总RNA,每克新鲜组织RNA产量在90～120!g之间,电泳分析,28SrRNA亮度约为18SrRNA的2倍,A260/A280介于1.8～2.0之间.用改良的Trizol法分离的RNA,已成功进行了RT-PCR及人参叶cDNA文库构建等研究.     

分离芸芥植物基因组DNA的一种方法

介绍一种能较好地分离植物基因组DNA的方法-SDS法,通过不同芸芥植物材料的多次实验,证明该方法分离芸芥的基因组DNA产率（7.5μg/gFW）,纯度（OD260=1.7-1.9)和分子量（50kb左右）都较高,完全能满足RAPD分析的需要,与目前普遍使用的CTAB法相比,SDS法简单,快速,成本低。     

一种适用于RT-PCR的杉树类植物中总RNA提取的方法

杉树类植物含大量的多糖、多酚类物质,这使得此植物的总RNA提取较困难。研究通过比较几种有代表性的提取植物总RNA的方法,建立了一种酸酚法和PEG8000沉淀法相结合的改良的CTAB法。此方法操作简单,使用的试剂均为常规试剂,成本低,能够有效去除植物组织中多糖和多酚类等次生物质,从而得到高质量的RNA。使用这种改良的方法制备的总RNA产物对P450基因成功地进行了反转录聚合酶链式反应(reverse transeriptase-polymerase chain reaction,RT—PCR),证明此方法是一种适用于RT—PCR的杉树类植物组织中总RNA提取的方法。     

三种快速提取植物DNA改良方法的比较

DNA是生物遗传信息的载体,快速提取高分子量、纯净的DNA是进行核苷酸序列测定、基因文库构建和遗传转化等研究的重要步骤。研究以水稻、小麦、大麦、大豆、豌豆和紫云英等为材料,比较了三种改良法提取植物DNA的效果。结果表明,三种改良后的方法不仅保留了原法的许多优点,而且方法简单,不经CsCl_2密度梯度离心能较干净地去除蛋白质及RNA,获得较纯净的、大分子的双链DNA,在不同程度上满足了各种植物提取DNA的需要。     

重楼属植物DNA提取的方法研究

为了获得重楼属植物高质量的DNA,以研磨、冻融和细胞溶胀破膜的原理设计了一种DNA提取的方法并与CTAB法和高盐法比较。结果显示该方法提取的重楼属植物DNA纯度（A260/A280=1.792-1.852;A260/A230=2.052-2.267）,产率（6.12-12.84mg/g）较其他两种方法高,降解少,节省药品。所提出的DNA能用于RAPD分析和ITS测序。     

松科植物基因组总DNA提取方法的比较

目的:研究对比了用不同方法提取红松、樟子松和红皮云杉等3种松科植物叶片基因组DNA的效果,以寻找适合提取松科植物叶片基因组DNA的方法。方法:分别比较了用传统的CTAB法、SDS法以及3种改良的CTAB法提取的上述3种松科植物叶片基因组DNA的电泳、纯度和酶切效果。结果:采用不同方法提取的3种松科植物叶片基因组DNA的质量差异较大。结论:常规CTAB法和SDS法无法提取出高质量松科植物基因组DNA,而改良后的CTAB法的提取效果较好。     

一种改良的植物DNA提取方法

植物组织中含有大量多糖、多酚、酯类等次生代谢产物, 要从中提取高质量的DNA比较困难。针对这一情况, 该文提出一种改良CTAB植物DNA提取方法(mCTAB), 并以10种常见植物为实验材料, 与4种常用的植物DNA提取试剂盒作对比。结果表明, mCTAB法提取的DNA产率高且质量好, PCR扩增成功率也较高, 而提取成本显著低于DNA提取试剂盒, 可有效用于植物DNA条形码等研究的植物DNA提取。     

一种简单实用的提取植物DNA的方法

ASimpleandPracticalMethodforIsolationofPlantDNAQIUGuo－Hua,XUZeng－Fu．CAOJi－Xiang,LIBao－Jian（BiotechnologyResearchCenter,ZhongshanUniversity,Guangzhou510275）植物DNA的提取是植物分子生物学和基因工程研究的一种基本的技术,至今已有了数种方法[1,2]。本文报道一种新的方法,与以前的方法相比,它最大的不同点是：将SDS同时用作细胞膜的去污剂和蛋白质的变性剂,变性的蛋白质通过离心而木是酚抽除去,使得整个操作过程变得简单快捷,比较温和,1h左右就可以获得纯化的植物DNA。用这种方法得到的DNA能…     

香鱼基因组DNA提取方法的优化

为获得高质量的基因组DNA,分别采用传统酚-氯仿法、高盐法、试剂盒法和改进酚氯仿法提取香鱼肌肉基因组DNA。琼脂糖凝胶电泳检测结果表明,改进酚氯仿法提取的基因组DNA电泳条带整齐明亮且无降解。紫外分光度计测定DNA浓度和纯度,结果表明,改进酚氯仿法提取的鱼类基因组DNA浓度约为300μg/mL,A260/A280为1.80-1.86。用改进的酚氯仿法提取的DNA进行AFLP分析,扩增结果稳定,电泳条带清晰。综上所述,改进酚氯仿法能够获得高质量DNA,且可以用于进一步的分子生物学研究。     

大量Pichia pastoris酵母基因组DNA的提取

巴斯德毕赤酵母(Pichia pastoris)表达系统是目前应用最广泛的外源基因表达系统之一,提取酵母基因组是研究酵母必需的方法之一.针对常用的几种毕赤酵母基因组DNA的制备方法进行比较,并对玻璃珠法进行改进.改良的玻璃珠法不但具有省时省力、操作简便且结果稳定的优,适合于大量DNA的提取.该方法的革新将对酵母重组子的PCR鉴定检测及表达产品DNA相关检测提供更高效稳定的保证,将成为酵母等类似微生物基因组DNA制备的首选方法.     

基于AFLP分析用吴茱萸叶高质量DNA的提取

目的：研究吴茱萸叶基因组DNA的提取方法,以用于扩增片段长度多态性（AFLP）分析。方法：设计了一种改良CTAB法：以石英砂代替液氮研磨;抽提前用不溶性PVP结合酚形成络合物,然后用缓冲液除去;抽提中加入Vc。将改良CTAB法所提吴茱萸叶DNA与传统的SDS法、CTAB法所提DNA进行比较。利用植物的核糖体DNA（rDNA）保守序列设计引物行PCR扩增鉴定吴茱萸DNA及其质量。并确定提取方法中最佳样本含量和β-巯基乙醇浓度。结果：改良CTAB法提取石虎、疏毛吴茱萸总DNA呈白色,A260/A280为1.721~1.886,DNA分子完整,约20kb左右,PCR扩增条带清晰、明亮,无杂带和脱尾。并确定0.10g为最佳样本量,2.0%为最佳β-ME浓度。结论：石英砂研磨简便、迅速、均匀,该实验所建立的改良CTAB法可有效避免次生代谢物的氧化褐变,是一种小量、快速提取吴茱萸叶DNA优化方法。     

陈旧家禽血液基因组DNA的快速提取

目的:建立一种从陈旧家禽血液中快速提取基因组DNA的方法。方法:以传统蛋白酶K法为基础进行优化。以陈旧鸡血为实验材料,新鲜抗凝鸡血为对照,经过生理盐水预处理、高浓度SDS裂解液和蛋白酶K消化、酚氯仿抽提后,对产物进行凝胶电泳检测、紫外分光光度检测和PCR扩增。结果:提取时间缩短为5～6h,所得基因组DNA纯度高、产量大,可用于后续分子生物学实验。结论:快速从陈旧家禽血液中提取DNA的方法被成功建立。     

Plant Genome Size Measurement with DNA Image Cytometry

To test the reliability of DNA image cytometry for the measurement of nuclear DNA content in plant material, we conducted independent experiments in two laboratories using different image analysis instruments for densitometric measurement of nuclear DNA amount in Feulgen-stained squash preparations of root tips. The 2C nuclear DNA content of the nine species studied spanned a 100-fold range (approx. 0.3–33 pg). The estimates of nuclear DNA content measured with image cytometry methods were comparable to values obtained previously using both photometric cytometry and flow cytometry. Image cytometry methods showed little variation among repeated experiments within each laboratory or among different operators using the same instrument. Furthermore, the interphase-peak method (measurement of several hundred interphase nuclei per slide) was comparable to the classical prophase/telophase approach (measurement of ten early prophase and ten late telophase nuclei per slide). Hence, DNA image cytometry gives accurate and reproducible results and may be used as an alternative to photometric cytometry in plant nuclear DNA content measurements. In the present study, we propose that two standards for quality control of nuclear DNA content measurement are used in plant DNA image cytometry: (1) the coefficient of variation of the peak should be lower than 6%, and (2) the 4C/2C ratio should be between 1.9 and 2.1.     

高效的植物DNA提取方法

利用液氮研磨植物幼芽,以苯酚─氯仿─异戊醇─核糖核酸酶法提取了大豆、菜豆、玉米、高梁等几种农作物的总ＤＮＡ。所提取的ＤＮＡ经岛津ＵＶ－２６５紫外分光光度计检测及０．６％的琼脂糖凝胶电泳,结果证明：该方法所提取的植物总ＤＮＡ纯度高,片段长度整齐,约５０ｋｂ左右,符合外源ＤＮＡ导入作物的要求,并且ＤＮＡ收率很高。     

仿刺参基因组DNA提取方法改进

开发了利用仿刺参管足活体取样提取基因组DNA的方法。按照传统方法提取仿刺参基因组DNA需要杀死实验对象并剖取体腔内纵肌(通常100mg)作为实验材料,并且实验过程中常常因为仿刺参的生物学性状而影响最终实验效果。以仿刺参在生活状态下拔取少量管足(10～20mg即可)作为取样源,在保持仿刺参的生活力不受影响的同时提高了取样效率。对仿刺参基因组DNA的提取方法进行了改进优化,并在常规海洋动物基因组DNA提取方法的基础上增加了部分操作步骤。与常规的基因组DNA提取方法相比,改进后的方法获取的基因组DNA完全符合后续实验要求。而且可随时根据即时效果(中间检测)和后续实验要求调整实验步骤,更增加了实验的可操作性。     

高质量毕赤酵母基因组DNA提取方法比较

旨在比较5种毕赤酵母基因组DNA的提取法,以便获得简便高效的提取高质量酵母基因组DNA的优化方法。分别使用蜗牛酶破壁法,超声波破碎法,液氮研磨法,Lyticase破壁法,试剂盒法提取毕赤酵母基因组DNA,然后进行DNA电泳检测以及紫外分光光度计测定DNA浓度和纯度。结果显示,5种方法均能提取出酵母基因组DNA,而酶法所提取的酵母基因组DNA质量最好。由此证实,蜗牛酶法成本低、效果好,是理想的提取高质量酵母基因组DNA的方法,完全满足后续试验要求。