人白细胞介素—2 cDNA在大肠杆菌中的高效表达及其纯化

白细胞介素—2(IL-2),过去曾称为T细胞生长因子(TCGF),是在促有丝分裂素或特异性抗原刺激下,由辅助性T细胞产生的一种淋巴因子,能在体外长期维持T细胞生长。它可调节免疫反应,促进细胞毒性T细胞和NK细胞增殖,诱生γ干扰素。因而是治疗肿瘤和免疫缺陷病人的非常有希望的药物之一。     

关于高中生物学中T细胞知识的诠释

T细胞是起源于骨髓、成熟于胸腺的一类淋巴细胞。根据功能差异可将T细胞分为辅助性T细胞（Th细胞）、抑制性T细胞（Ts细胞）和细胞毒性T细胞（Tc细胞）三大类型。T细胞产生的免疫应答主要体现在细胞免疫和由淋巴因子辅助活化B细胞形成浆细胞的体液免疫2个方面。通过对T细胞相关知识的诠释,帮助师生突破教与学的重难点。     

一种简单的白细胞介素2活性微量测定法

<正> IL-2是由活化T淋巴细胞分泌的一种淋巴因子,能诱导IL-2受体阳性淋巴细胞增殖。一般用于维持培养的T细胞持续增生,并有可能用为治疗制剂。最近编码IL-2的基因已克隆并引入到大肠杆菌中,已有可能使用大量纯制IL-2。由于IL-2在Pg浓度时就已具备活性,因此开发了敏感的定量生物测定法。本法所用的是IL-2依赖性小鼠细胞毒性T细胞系。尽管其灵敏性高,但却对用户带     

《生物工程讲座》(Ⅵ讲)名词解释

1.免疫反应 机体对自身和异己物质所产生的种种识别和反应。包括体液免疫和细胞免疫。其体液免疫是由血液循环中的抗体所致的免疫反应,主要由B淋巴细胞参考;细胞免疫则系免疫系统中的细胞与抗原之间的反应,由T淋巴细胞参考,与抗体无关。T细胞分化为各种类型,与所产生的各种淋巴因子协同作用。 2.细胞融合 在某些因素的作用下,两个或两个以上的细胞合并为一个细胞的过程。 3.抗原 能引起机体产生免疫反应的物质,具两种性质:即免疫原性和免疫专一性。根据其来源又可分为内源性抗原和外源性抗原。     

白细胞介素2的抗肿瘤活性

<正>大量实验证明白细胞介素2(IL—2)在免疫活性细胞微环境精密调节中占有重要地位。在细胞毒T细胞(CTL)和自然杀伤细胞(NK)等淋巴细胞的成熟和分化中,IL—2是不可或缺的。在研究IL—2的过程中又发现了只有在IL—2作用下才能活化的淋巴因子活化的杀伤细胞(LAK)和淋巴因子诱导的细胞毒细胞(LICC)。这些淋巴细胞在宿主体内抗细胞突变的免疫监视作用中可谓独占鳌头。故此,关于IL—2的抗肿瘤活性及其在癌症免疫治疗中的实用价值的研究就提到了重要议程上来了。     

补益类中药有效成分作为新型人用疫苗佐剂的应用前景

传统补益类中药有效成分既能增加腹腔巨噬细胞、自然杀伤细胞、细胞毒T细胞、淋巴因子激活的杀伤细胞,促进IL-12、GM—CSF、IFN等细胞因子的分泌,加强细胞因子的作用,又能激活T细胞、B细胞,活化补体促进提高机体的免疫功能,产生免疫调节作用。作为重组乙型肝炎疫苗、流感病毒、钩状螺旋体病毒等疫苗佐剂的研究表明,补益类中药有效成分具有良好的免疫佐剂特性,将其研制开发为新型人用疫苗佐剂将具广阔前景。     

淋巴因子的研究——Ⅰ.正常人淋巴因子的分离及鉴定

本文作者对正常人外周血淋巴细胞的大量分离和激活条件以及淋巴因子的分离提纯进行了研究,并获得一定量的淋巴因子(不含正常血清蛋白成分或外源凝集素)。通过琼脂糖电泳、连续浓度梯度聚丙烯酰胺凝胶电泳、等电聚焦和交联葡聚糖凝胶过滤证明淋巴因子是一组在泳动速度、分子量、等电点等方面都极不均一的蛋白质。用淋巴因子制备的多价抗血清进行线状免疫电泳证明:正常人少量全血经PHA 或ConA 激活6～24小时,在去血球的上层液中,在pH8.6向正极和向负极泳动的某些淋巴因子生成量均较对照组明显增多,这种差别有可能在一定程度上反映T 淋巴细胞的功能。     

淋巴因子的研究——Ⅰ.正常人淋巴因子的分离及鉴定

本文作者对正常人外周血淋巴细胞的大量分离和激活条件以及淋巴因子的分离提纯进行了研究,并获得一定量的淋巴因子(不含正常血清蛋白成分或外源凝集素)。通过琼脂糖电泳、连续浓度梯度聚丙烯酰胺凝胶电泳、等电聚焦和交联葡聚糖凝胶过滤证明淋巴因子是一组在泳动速度、分子量、等电点等方面都极不均一的蛋白质。用淋巴因子制备的多价抗血清进行线状免疫电泳证明:正常人少量全血经PHA或CbnA激活6～24小时,在去血球的上层液中,在pH8.6向正极和向负极泳动的某些淋巴因子生成量均较对照组明显增多,这种差别有可能在一定程度上反映T淋巴细胞的功能。     

白细胞介素－2的研究

白细胞介素－２的研究本刊顾问刘新垣（中国科学院上海生物化学研究所）白细胞介素－２（ＩＬ－２）是辅助Ｔ细胞分泌的淋巴因子,在免疫系统中起着重要的作用,它能促进Ｔ细胞,ＮＫ细胞,Ｂ细胞的分化成熟及激活其生物活性,诱导淋巴因子激活的杀伤细胞（ＬＡＫ）活性,...     

B细胞刺激因子

<正> B细胞被抗原或抗Ig抗体等物质激活后增殖,并分化为大量分泌抗体的浆细胞。此乃体内抗体的唯一来源。足见B细胞在体液免疫应答中占有的重要位置。因此,B细胞的功能状态及其调节因素甚受医学界重视。B细胞的活化过程是一个受多种因素调节的连续而又复杂的过程,其中最重要的直接影响为T细胞和巨噬细胞产生的淋巴因子和单核因子的刺激作用。     

IL-6和IL-2联合应用对LAK细胞诱导及其杀瘤活性的影响

淋巴因子激活的杀伤细胞(LAK细胞)能广泛杀伤自身肿瘤、同种异体肿瘤。LAK细胞用于恶性肿瘤的过继免疫治疗是近年十分活跃的研究领域。IL—6是一种多功能细胞因子,在机体免疫系统、防御功能及造血调节中有重要作用。已有文献报道,IL—6可诱导IL—2受体表达,提高PHA刺激的细胞毒T细胞(CTL) 的杀瘤活性。本实验观察了IL—6和IL—2合用对人LAK细胞诱导及其杀瘤活性的影响。(1)在诱导LAK细胞克隆的含     

小鼠急性结肠炎中亚硒酸钠对滤泡辅助性T细胞的调控作用

微量元素硒对炎性肠道疾病的免疫调控效应一直是研究关注的焦点.本文采用葡聚糖硫酸钠诱导的实验性小鼠急性溃疡性结肠炎模型,观察了亚硒酸钠(Na₂SeO₃)灌胃对肠道局部及相关淋巴组织中的天然免疫细胞、适应性免疫B细胞、细胞毒性T细胞(cytotoxic T cells, CTL)和辅助性T细胞(helper T cells, T_H)的不同亚群T_H1,T_H2,调节性T细胞(regulatory T cells, Treg)及滤泡辅助性T细胞(follicular helper T cells, T_FH)等的功能分化调控效应,并在体外观察了Na₂SeO₃对T_FH细胞分化的调控规律.结果显示,亚硒酸钠灌胃补硒可以加重急性肠炎,并促进TFH细胞在肠道局部及肠周围淋巴组织浸润和B细胞免疫球蛋白A(immunoglobulin A, IgA)分泌.这为微量元素硒免疫调控肠道炎性疾病研究提供了依据,也为硒的临...     

白细胞介素2的制备

<正>鉴于白细胞介素2(IL—2)对基础研究和临床应用具有突出的价值,尤其是IL—2通过活化LAK细胞、CTL细胞和NK细胞等对肿瘤生长有明显的抑制作用,倍受国内外学者重视,因而有关IL—2研究的进展很快。起初,IL—2作为T细胞生长因子而得名。近来,人、长臂猿和小鼠的IL—2都已获得电泳纯的制品;识别人淋巴因子的单克隆抗体已投入生产;人和小鼠的IL—2基因     

组蛋白去乙酰化酶3通过抑制AICD维持T细胞自稳（英文）

为探讨组蛋白去乙酰化酶3(HDAC3)在T细胞自稳中的作用,采用Lox P-cd4cre酶系统在胸腺CD4~+CD8~+双阳性T细胞(DP)中敲除hdac3基因.hdac3基因敲除小鼠不影响T细胞在胸腺中的发育,但导致外周T细胞显著降低,而且,hdac3基因敲除的外周T细胞主要以活化/效应/记忆表型为主.机制分析表明,hdac3基因敲除的外周T细胞凋亡增加并伴随细胞增殖加速,同时,Fas和Fas配体阳性细胞比率以及Fas配体的表达显著增加.体外TCR活化不影响正常外周T细胞的凋亡,但导致hdac3基因敲除的外周T细胞凋亡显著增加.实验结果表明,HDAC3通过抑制活化诱导的细胞凋亡维持外周T细胞自稳.     

自身肽结合于HLA-A2分子上能够在体外诱导抗原肽特异性的同种T细胞

在同种反应性T细胞(同种T细胞)识别的配体中, 抗原肽的作用是免疫学长期争论的问题, 即同种T细胞识别是否具有抗原肽特异性. 为了证实通过长期混合淋巴细胞培养(LTMLC)方法能够诱生抗原肽/MHC复合物(pMHC)特异性的同种T细胞, 本研究利用仅表达HLA-A2, TAP缺陷的T2细胞, 将酪氨酸激酶来源的自身抗原肽(Tyr_369-377)和EB病毒来源的病毒抗原肽(LMP2A_426-434)分别加载到T2细胞上, 使T2细胞提呈单一的T细胞抗原识别表位, 并且选择4个HLA-A2阳性(HLA-A2+ve)与4个HLA-A2阴性(HLA-A2-ve)个体的PBL样本, 与加载上述抗原肽的T2细胞混合培养. 在此实验系统中, HLA-A2+ve PBL与加载病毒抗原肽的T2细胞(T2/LMP)混合培养代表T细胞对普通抗原的反应, 而HLA-A2-ve PBL与加载自身抗原肽的T2细胞(T2/Tyr)混合培养则为T细胞对同种抗原的反应. 利用特异性pMHC四聚体染色与特异性细胞毒试验检测LTMLC诱生CTL的特异性, 其中利用HIV抗原肽(Gag_77-85)作为对照. 结果显示: (ⅰ) T2/LMP与HLA-A2+ve个体的PBL混合培养产生CTL(CTL-T2/LMP), CTL-T2/LMP对T2/LMP的杀伤显著高于对照T2/HIV的杀伤(26.52%±3.72% vs 7.01%±0.87%, P<0.001); LMP四聚体对CTL-T2/LMP染色的阳性细胞数显著高于对照HIV四聚体 (0.98%±0.33% vs 0.05%±0.01%, P=0.0014); (ⅱ) 加载自身抗原肽的T2细胞(T2/Tyr)可诱导HLA-A2-ve个体的PBL产生CTL(CTL-T2/Tyr), CTL-T2/Tyr对T2/Tyr的杀伤显著高于对T2/HIV的杀伤(28.07%±2.58% vs 6.87±1.01%, P<0.001); Tyr四聚体对CTL-T2/Tyr染色的阳性细胞数显著高于HIV四聚体(0.88%±0.3% vs 0.06±0.03%, P=0.0018). 结果说明: 结合于自身MHC分子上的病毒抗原肽与结合于同种MHC分子上的自身抗原肽都能诱导产生抗原肽特异性的CTL; 在LTMLC诱生的同种CTL中, 有相当数量的CTL具有pMHC特异性, 这些同种CTL的识别机制与普通抗原反应性CTL一样, 识别的对象也是特异性的pMHC. 支持了同种抗原的pMHC种类繁多造成同种T细胞反应强度极高的假说. 利用LTMLC诱生抗原肽特异性同种T细胞方法对于T细胞过继治疗具有潜在的应用价值.     

Caveolin-1促进乳癌Hs578T耐药细胞株侵袭和转移

通过基因转染技术培育caveolin-1过表达乳癌HS578T耐药细胞株Hs578T/Dox cav-1和空载体细胞株Hs578T/Dox vector,探讨caveolin-1蛋白对耐药肿瘤细胞体内和体外侵袭转移能力的影响.由于caveolin-1表达的增加,Hs578T/Dox cav-1细胞形态变为长梭形,伪足更长而伸展,其粘附能力高于空载体Hs578T/Dox vector细胞株((0.897±0.163)vs(0.633±0.053),P<0.01).侵袭小室试验发现,Hs578T/Dox cav-1侵袭转移能力增强,培养6h迁徙进入微孔膜的细胞数比Hs578T/Dox vector细胞株明显增多((107.8±10.9)vs(80.8±8.07),P<0.01),侵袭破坏matrigel基质蛋白胶进入膜内的细胞数也明显增多((68.8±9.88)vs(25.6±5.41),P<0.01).悬浮培养的Hs578T/Dox cav-1细胞比Hs578T/Dox vector细胞更容易聚集,形成相对较致密的细胞团块,24h检测流式细胞凋亡指数下降((8.79±1.54)%vs(16.42±1.42)%,P<0.01).这表明其具有更强的抗失巢凋亡和继续生存的能力,为循环转移的肿瘤细胞定植前取了更多时间.Hs578T/Dox vector细胞在裸鼠皮下种植成瘤试验中不能成瘤,而Hs578T/Dox cav-1细胞接种15只裸鼠,全部形成肿瘤,平均直径(0.8±0.45)cm.发现一只成瘤裸鼠双肺可见瘤样肿块转移.HE病理组织染色见肿瘤细胞弥漫性分布,细胞核异型性明显.上述结果表明,caveolin-1对Hs578T耐药肿瘤细胞侵袭、转移和成瘤性具有明显的促进作用.     

玉竹生物活性成分C对小鼠免疫功能的影响

研究玉竹生物活性成分C对小鼠细胞免疫功能的影响,并探讨其作用机制.采用MTT比色法和CFSE检测小鼠淋巴细胞转化情况,流式细胞术检测对αβT和γδT细胞增殖及CD4+ αβT细胞/CD8+αβT细胞比值的影响,ELISA法检测脾细胞培养上清中Th1细胞因子IFN-γ和Th2细胞因子IL-4的分泌水平.结果显示,玉竹生物活性成分C在一定浓度范围内可促进小鼠脾αβT细胞增殖,其中以1 000μg/mL的浓度作用最强.1 000 μg/mL浓度的玉竹生物活性成分C具有降低CD4+ αβT细胞与CD8+ αβT细胞比值,提高CD8+αβT细胞教量的作用.1 000 μg/mL浓度的玉竹生物活性成分C能有效刺激小鼠脾淋巴细胞释放细胞因子IFN-γ,而对IL-4的产生没有明显的影响.本研究为开发玉竹生物活性成分C提供实验依据.     

CD自杀基因系统对T淋巴细胞作用的实验研究

去除供者骨髓中的T淋巴细胞可有效防止移植物抗宿主病(GVHD)的发生.用含大肠杆菌胞嘧啶脱氨酶（EC-CD）基因的高滴度逆转录病毒(1.5×10⁵ CFU/ml)感染小鼠T淋巴细胞,G418筛选,获得稳定表达CD基因的T/ pCD₂细胞.经PCR和RT-PCR方法检测证明CD基因已成功地导入T淋巴细胞中并有效表达.分别用不同浓度的5-FCyt作用于T/ pCD₂及T淋巴细胞,光镜下观察不同时间细胞数目变化及MTT法检测细胞活性.结果表明,5-FCyt浓度大于1 μmol/L时,即对T/ pCD₂细胞有显著的杀伤作用,而对正常T淋巴细胞基本无毒性,且T/ pCD₂细胞在加入药物后生存时间（3～5 d）明显短于未转染的T淋巴细胞（大于14 d）.     

基于CRISPR/Cas9-SAM系统CHD5基因过表达慢病毒载体的构建及对膀胱癌T24细胞增殖,迁移和侵袭能力的影响 *

目的 利用CRISPR/Cas9-SAM系统构建CHD5基因过表达慢病毒载体,并分析其对膀胱癌细胞T24增殖,迁移和侵袭能力的影响.方法: 针对CHD5基因设计3个sgRNA(sgRNA-1,sgRNA-2,sgRNA-3),将sgRNA连入LV-sgRNA-MS2-P65-HSF1-Neo载体,经293T细胞包装后获得高滴度慢病毒颗粒.病毒以MOI=10感染膀胱癌细胞T24.RT-qPCR和Western blot分别检测感染病毒后T24细胞CHD5 mRNA和蛋白表达水平,CCK8实验,流式分析,划痕实验和Transwell实验检测CHD5过表达对T24细胞增殖,凋亡,迁移和侵袭能力的影响.结果: 成功构建CHD5过表达慢病毒载体.慢病毒感染T24细胞后,RT-qPCR和Western blot证实,T24细胞CHD5的mRNA和蛋白表达水平显著高于空白组和阴性对照组(P<0.05),并且sgRNA-3-MS2-P65-HSF1序列的作用最为显著.CCK8及流式分析结果显示,过表达CHD5抑制T24细胞增殖,促进凋亡,与对照组相比,均有统计学意义(P<0.001).划痕和Transwell实验结果表明,过表达CHD5可抑制T24细胞迁移和侵袭能力(P<0.01).结论: 成功构建CHD5过表达慢病毒.过表达CHD5能促进膀胱癌细胞T24凋亡,抑制其增殖,迁移和侵袭能力.     

嗜热脂肪芽孢杆菌质粒DNA的高压电穿孔转化研究

采用高压电穿孔法将穿梭质粒导入了嗜热脂肪芽胞杆菌(Bacillusstearothermophilus)K1041和T521菌株.以对数生长后期的菌体制备K1041转化细胞,以LB平板上于50℃培养的过夜菌制备T521转化细胞,细胞密度为5～7×109细胞/mL.电击条件如下电容25μF,电场强度10.0KV/cm,脉冲控制器设定200Ω.K1041和T521最高转化效率分别达2.01×104和1.19×102转化子/μgDNA.此外,研究发现T521和K1041中存在着DNA的限制/修饰系统.