一种能同时富集沙门氏菌、金黄色葡萄球菌和单增李斯特菌的培乔基

[目的]设计制备一种能够同时富集沙门氏菌、金黄色葡萄球菌及单增李斯特菌的复合增菌肉汤.[方法]挑选合适的添加剂进行单因素实验,确定增菌肉汤的成分及配比,采用平板计数法及三重荧光PCR技术验证肉汤的增菌效果.[结果]结果得到一种能同时富集沙门氏菌、金黄色葡萄球菌及单增李斯特菌的选择性增菌肉汤(SSL),经验证SSL可使得3种目标菌以相对一致的速度进行富集,经过37℃ 150 r/min振荡培养24 h后,菌体浓度到达10~7～10~8 CFU/mL,非目标菌生长受到抑制.应用荧光PCR扩增样品,可同时得到3种目标菌的扩增曲线.在710份实际样品检测中,无假阳性及假阴性报告.[结论]研究结果表明,SSL肉汤可用于沙门氏菌、金黄色葡萄球菌及单增李斯特菌的共增菌,可用于多重PCR检测的前增菌.     

沙门氏菌、金黄色葡萄球菌、志贺氏菌、单增李斯特菌选择性共增菌培养基的研制

目的：研制一种对沙门氏菌（Salmonella）、金黄色葡萄球菌（Staphylococcus aureus）、志贺氏菌（Shigella）和单增李斯特菌（Listeria monocytogens）的选择性共增菌培养基（SSSL培养基）。方法：挑选添加成分进行单因素试验,确定SSSL培养基的成分及配比,采用平板计数法验证SSSL培养基的增菌效果。结果：确立了SSSL培养基配方,目标菌在SSSL增菌培养基中培养8 h后,菌体浓度都达到了105~106CFU/mL,而且抑制非目标菌的生长。结论：SSSL培养基能用于沙门氏菌、金黄色葡萄球菌、志贺氏菌和单增李斯特菌选择性共增菌,可望与多种检测方法联用,以提高检测率和准确性。     

一种能同时富集沙门菌、大肠杆菌和金黄色葡萄球菌的增菌培养基

研究设计出一种能同时富集培养沙门菌、大肠杆菌和金黄色葡萄球菌的缓冲盐水肉汤(buffed saline broth,BSB),主要组分和含量为:蛋白胨10g、牛肉膏3g、磷酸氢二钠9g、磷酸二氢钾1.5g、添加剂50g、蒸馏水定容至1000mL,pH7.2。将1cfu/mL的上述3种菌同时分别接种到97mLBSB、蛋白缓冲水、乳糖肉汤、营养肉汤、大肠杆菌肉汤、氯化镁孔雀绿增菌液、7.5%氯化钠肉汤增菌培养基中,37℃增菌18h。结果表明BSB能使这3种菌以相对一致的速度增殖,分别达到106、106、107cfu/mL,并且多重PCR能同时分别扩增沙门菌invA基因284bp、大肠杆菌phoA基因622bp和金黄色葡萄球菌nuc基因484bp的特异性条带。相反,其他几种培养基则不能同时协调增殖上述3种菌。这些结果表明,BSB有较好的应用前景。     

即食沙拉各组分中单增李斯特菌和沙门氏菌的生长势研究

由即食沙拉引发的食源性疾病对民众的身体健康和生命安全构成了严重威胁.为应对此问题,文章重点研究了不同储存温度条件下,即食沙拉6种主要食品基材上单增李斯特菌和沙门氏菌的生长状况.结果表明,单增李斯特菌在5 ℃时能够在某些食品基材,尤其是熟鸡胸肉中实现存活和繁殖;而沙门氏菌在低温条件下的任何食品基材上均无法繁殖.同时,在10℃、15℃和20℃的温度条件下,在生菜、黄瓜、紫甘蓝和鸡胸肉中,两菌均表现出了显著的增殖趋势.此外,单增李斯特菌在15℃和20℃的胡萝卜中可良好生长,在10℃下增长受限;而沙门氏菌未表现出类似变化.沙拉酱在任何温度下均不支持两种致病菌生长.希望该研究结果可为后续即食沙拉的精准风险评估提供了重要的数据支持.     

超高压对单增李斯特菌细胞膜的损伤和致死机理

【目的】研究超高压对病原微生物单增李斯特菌细胞膜损伤的影响。【方法】本文以单增李斯特菌为研究对象,探讨了不同压力处理(100-500 MPa)对单增李斯特菌的灭活作用,利用透射电镜观察高压处理对细菌细胞超微结构的影响,通过紫外分光光度法、原子吸收分光光度法和荧光分光光度法测定高压处理对细菌细胞膜通透性的影响,采用超微量Na+/K+-ATP酶试剂盒测定高压处理对细菌细胞膜Na+/K+-ATP酶活力的影响。【结果】25℃经300、350、400 MPa压力处理15 min后,单增李斯特菌总数由9.00分别降至5.20、3.27、1.35个对数单位,经450MPa及以上的压力处理后,单增李斯特菌的致死率达到100%。超高压处理对单增李斯特菌的细胞超微结构造成明显的损伤,细胞结构不完整,细胞壁局部被破坏,细胞膜通透性增大,细胞内物质聚合,出现透电子区。由于细胞膜的损伤使得细胞内无机盐离子、紫外吸收物质流出,细胞膜上的Na+/K+-ATPase失活。【结论】超高压处理造成单增李斯特菌细胞形态结构明显损伤,改变细胞膜的通透性,降低细胞膜上Na+/K+-ATP酶活力,最终使得细胞内无机盐离子和胞内大分子物质外流而死亡。     

金黄色葡萄球菌和单增李斯特菌快检试剂盒(溶液)的评价验证

通过重复第三方实验室的评价方法,分析自主研发的金黄色葡萄球菌和单增李斯特菌溶液快检试剂盒出现假阴性和假阳性的原因.实验验证得出,金黄色葡萄球菌试剂盒测试中出现的假阴性问题可能是试剂在运输、储存以及实验过程中操作不当造成活性降低所引起,可以通过对试剂进行小管分装、干粉化等方式防止试剂活性降低.单增李斯特菌试剂盒果冻阴性对...     

选择性富集沙门氏菌、副溶血弧菌和霍乱弧菌的共增菌培养基SVV

本研究通过单因素试验和响应面分析试验建立了能够选择性富集沙门氏菌、副溶血弧菌和霍乱弧菌的共增菌培养基SVV,采用平板计数法及三重荧光PCR技术验证了SVV的增菌效果。结果表明:SVV能同时富集以不同浓度比例混合的3种目标菌,37oC振荡培养18h后,菌体浓度达到105~108CFU/mL;SVV强烈抑制大部分的非目标菌;用荧光PCR方法检测经过37oC振荡培养18h的10份人工接种样品和608份实际样品,结果表明目标菌在SVV中增殖18h后菌量达到检测限以上,SVV联合荧光PCR检测方法的检出率为4.06%,比传统检测方法(3.78%)高,无假阴性和假阳性。SVV可望应用于水产品中沙门氏菌、副溶血弧菌和霍乱弧菌检测前的增菌处理,可简化检测过程,有效克服漏检,提高检出率。     

进口水产品中单增李斯特菌的分子流行病学特点

摘要：[目的] 探明进口水产品中单增李斯特菌的污染状况、致病性和分子特征。[方法] 针对2007年7月至2008年11月间从29个国家进口的1275批水产品,进行单增李斯特菌鉴定、谱系与血清型分析、小鼠毒力试验与多位点序列分析。[结果] 检出单增李斯特菌33批次（2.6%）,其中以4b型为主（65.2%）,而1/2a型、1/2b型与1/2c型仅分别占13.0%、17.4%与4.4%。这些分离株对小鼠均具有与强毒参考株相当的毒力。基于actA-hisJ-ribC-sigB的多位点序列分析可将32个菌株分为23个序列型,分辨力达0.97。其中3个序列型包含3个以上分离株,其中序列型9属于流行性克隆I。[结论] 进口水产品中单增李斯特菌污染率与国内水产品相近,但血清型分布以4b型为主,且有流行性克隆I检出,因此要加强对进口水产品中单增李斯特菌的监测。     

单增李斯特菌溶血素O的功能研究进展

单核细胞增生李斯特菌(Listeria monocytogenes, Lm,简称单增李斯特菌)是一种普遍存在的革兰阳性食源性病原体,可引起人类和一些动物的李斯特菌病。侵袭性李斯特菌病通常很严重,临床上表现为自然流产、败血症和脑膜脑炎,也可表现为发热性胃肠炎综合症。成孔蛋白单增李斯特菌溶血素O(Listeriolysin O,LLO,由hly基因编码)是一种重要的毒力因子,属于胆固醇依赖性细胞溶解素(cholesterol-dependent cytolysins,CDC)毒素,其通过膜穿孔机制介导Lm从吞噬体逃逸并引起李斯特菌病。最近的研究表明LLO除了主要的膜穿孔作用,还存在其他功能,在Lm感染过程中扮演了重要的角色。从LLO的功能和作用机制等方面综述了近些年对该毒素的研究进展,以便更好地理解单增李斯特菌的感染机制,为防治李斯特病的相关研究提供参考。     

选择性增菌液对单核增生性李斯特氏菌检出效果的比较

为了了解食品中单核增生李斯特氏茵(Listeria monocytogenes)的污染状况,比较不同选择性增茵方法对单核增生李斯特氏茵的检出效果,并进一步比较不同增茵方法在不同类食品中检出单核增生李斯特氏茵的差异性,进而确定特定食品最合适的增茵方法,随机采集本市生鲜肉、水产品、果蔬及冷冻食品4类135份食品.采用国标LB二次增茵法、EB法、最新改良FDA法及Fraser肉汤增菌法进行增菌,采用PALCAM选择性平板进行分离,先用行标多重PCR法进行初步验证后再进行国标生化鉴定.4种方法共检出单核增生李斯特氏茵23株,其中LB二次增菌法检出5株、Fraser肉汤增菌法检出6株、EB法检出5株、最新改良FDA法检出7株.结论是4种方法总的检出率没有较大的差异性,但对于不同类食品的检出率有所不同.     

Effects of acidified sodium chlorite, cetylpyridinium chloride and hot water on populations of Listeria monocytogenes and Staphylococcus aureus on beef

AIMS: The present study was designed to determine the individual and combined effects of acidified sodium chlorite (ASC, 0.1%, 24 +/- 1 degrees C), cetylpyridinium chloride (CPC, 0.5%, 24 +/- 1 degrees C) and hot water (HW, 93 +/- 1 degrees C) treatments on the survival of Listeria monocytogenes and Staphylococcus aureus. METHODS AND RESULTS: Beef samples inoculated with L. monocytogenes and S. aureus were treated with nine different applications singly or in combination. Treatment groups comprised (i) untreated control; (ii) sterile tap water; (iii) 0.1% ASC; (iv) 0.5% CPC; (v) HW; (vi) HW followed by 0.1% ASC; (vii) HW followed by 0.5% CPC; (viii) 0.1% ASC followed by HW; (ix) 0.5% CPC followed by HW. Compared with the untreated control group, the reductions in L. monocytogenes populations were 1.14-2.31 log CFU g(-1), while the reductions in S. aureus populations were 0.83-2.74 log CFU g(-1) on day 0. CONCLUSION: The reduction effect that occurred after combined treatment with ASC followed by HW, HW followed by ASC, CPC followed by HW and HW followed by CPC was found to be significantly greater (P < 0.05) than after treatment with ASC and CPC alone on days 0, 2 and 4 of storage. SIGNIFICANCE AND IMPACT OF THE STUDY: ASC, CPC and HW treatments can be used to reduce L. monocytogenes and S. aureus, which would provide an additional measure of safety on the production line.     

Effect of gamma radiation on heat shock protein expression of four foodborne pathogens

Aims: The effects of gamma radiation on three heat shock proteins (Hsps) (GroEL, DnaK and GroES) synthesis in two Gram-negative (Escherichia coli and Salmonella serotype Typhimurium) and two Gram-positive (Staphylococcus aureus and Listeria monocytogenes) bacteria were investigated. Methods and Results: The bacterial strains were treated with three radiation doses to induce cell damage, to obtain a viable but nonculturable state, and to cause cell death. Western blot analysis and quantification of Hsps in bacteria were performed immediately after irradiation treatment. In the four foodborne pathogens, GroEL was strongly induced by gamma rays in a dose-dependent manner, confirming the involvement of this protein in the cellular response to the stress generated by ionizing radiation. In addition, it was found that E. coli exposed to gamma radiation showed a significantly induction of DnaK and GroES proteins when compared with nonirradiated bacteria, whereas a GroES slight induction and a DnaK inhibition were observed in Salm. Typhimurium. Conclusions: The gamma rays influence the synthesis of Hsps in foodborne pathogen in a way that critically depends on the radiation dose. Significance and Impact of the Study: The study of stress response to several radiation doses was undertaken to elucidate how bacteria can survive in harsh conditions and cope with gamma radiation used to control foodborne pathogens and to characterize their adaptative response to this treatment.     

Mutagenic analysis of putative domain II and surface residues in mosquitocidal Bacillus thuringiensis Cry19Aa toxin

The growing resistance against antibiotics demands the search for alternative treatment strategies. Photodynamic therapy is a promising candidate. The natural intermediate of chlorophyll biosynthesis, protochlorophyllide, was produced, purified and tested as a novel photosensitizer for the inactivation of five model organisms including Staphylococcus aureus, Listeria monocytogenes and Yersinia pseudotuberculosis , all responsible for serious clinical infections. When microorganisms were exposed to white light from a tungsten filament lamp (0.1 mW cm⁻²), Gram-positive S. aureus, L. monocytogenes and Bacillus subtilis were photochemically inactivated at concentrations of 0.5 mg L⁻¹ protochlorophyllide. Transmission electron microscopy revealed a disordered septum formation during cell division and the partial loss of the cytoplasmic cell contents. Gram-negative Y. pseudotuberculosis and Escherichia coli were found to be insensitive to protochlorophyllide treatment due to the permeability barrier of the outer membrane. However, the two bacteria were rendered susceptible to eradication by protochlorophyllide (10 mg L⁻¹) upon addition of polymyxin B nonapeptide at 50 and 20 mg L⁻¹, respectively. The release of DNA and a detrimental rearrangement of the cytoplasm were observed.     

电解海水的抑菌活性及对食品加工表面材料的消毒效果

为了考察直接电解海水消除细菌污染的可能性,本文将海水及海水稀释成不同浓度后通过氧化电解水装置进行电解不同时间后,所得酸性电解海水、碱性电解海水和中性电解海水对病原菌[埃希氏大肠杆菌(Escherichina coli)、沙门氏菌(Salmonella)、单核细胞增生李斯特菌(Listeria moncytogene)、摩化摩根(Morganella morganii)、副溶血性弧菌(Vibrio parahaemolyticus)]以及食品加工表面接触材料(地板砖、不锈钢板、瓷砖、手套、抹布)的消毒效果进行分析研究.结果表明,酸性电解海水具有良好的杀菌效果,能将107 CFU/mL的病原菌悬液在1 min内几乎全部杀死.碱性电解海水和中性水无明显的杀菌效果.通过模拟食品加工过程,对食品加工表面接触材料人为染菌,研究电解海水对表面材料的消毒效果,结果表明酸性电解海水仍能将表面材料含有的107CFU/cm2病原菌在5 min之内几乎全部杀灭.由此说明电解海水对食品加工表面接触材料具有明显的消毒效果,能取代以淡水为原料的电解水杀菌效果是高效廉价和不浪费淡水资源的一种理想消毒剂.     

电解水的抑菌活性及对食品加工表面材料的消毒效果

为了考查应用电解水消除细菌污染的可行性,对氧化电解水的杀菌效果及对食品加工表面材料的消毒效果进行了研究。结果表明,含0.1%NaCl的自来水经7min的电解后所获得的氧化电解水,能在2min内将菌液浓度分别为4.20×106CFU/mL,2.18×106CFU/mL,1.44×106CFU/mL,2.10×106CFU/mL,1.94×106CFU/mL的埃希氏大肠杆菌(Escherichia coliO157:H7)、沙门氏菌(Salmonella enteritidis)、单核细胞增生李斯特菌(Listeria monocytogenes)、摩化摩根菌(Morganella morganii)、副溶血性弧菌(Vibrio parahaemolyticus)几乎全部杀死。另外,对食品加工表面接触材料中的地板砖、不锈钢板、瓷砖进行染菌消毒试验结果表明,含0.1%NaCl的电解水同样能将上述浓度的菌液感染到食品表面接触材料后在5min之内几乎全部将其杀死,是一种理想的食品表面材料消毒剂。