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本文应用斑点酶免疫试验(DEIA),检测流行性出血热病人血清42份,其结果与间接免疫荧光(IFA)进行了比较,符合率100%,其DEIA几何干均滴度为1:880,IFA为1:580,同类风湿因子阳性血清[RF(+)]无交叉反应,证明本方法具有较高的敏感性和特异性,本文还对不同方法处理组织内源酶的效果和不同阻断剂的阻断效果进行了比较。试验结果表明本法不但敏感、特异,而且简单、快速、安全、经济、易于推广。 相似文献
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改良抗体捕获ELISA方法检测流行性出血热特异性IgE,IgA,IgG抗体的初步研究 总被引:4,自引:0,他引:4
张东海 《Virologica Sinica》1993,8(3):207-212
初步报道建立了一种检测流行性出血热(EHF)特异性IgE、IgA、IgG抗体的改良抗体捕获ELISA方法(EacELISA,AacELISA,GacELISA)。该法以抗人IgE、IgA或IgG单克隆抗体作包被抗体;酶标记物系两株组特异性较强的EHF·McAb(A_(35),A_(25-1)株);在实验中采用EHF病毒抗原与酶标记物混合后一次加入,而不是分别依次加入的方式,使操作步骤简化,实验时间缩短,又适当提高了试验敏感性。该法具有简便,特异性高,灵敏度较高(检测EHF·IgE,EHF·IgA>1:100;EHF·IgG>1:2560),重复性较好(CV:EHF·IgE 2.51%,EHF·IgA 11.80%,EHF·IgG 10.85%)等优点。检测39份EHF病人血清,急性期病人(3~7病日)血清三种抗体的检出率分别为84.21%(16/19,EHF·IgG),89.47%(17/19,EHF·IgA)和100%(19/19,EHF·IgG);而发病3~6月后患者血清三种抗体检出率分别为10.00%(2/20),45.00%(9/20)和100.00%。在急性期与恢复期病人之间,EHF·IgE和EHF·IgA两种抗体的检出率差异较显著(P<0.01)。70价其他人群血清三种抗体检出率均为阴性。 相似文献
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用间接免疫荧光法检测110例不同病程、病期及病型的流行性出血热病人尿中及血清中特异性抗体。尿中IgM型抗体阳性率为62.7%。尿中IgG型抗体阳性率91.8%与血清IgG型者90.9%相似,而总阳性率(IgG或IgM有一项以上阳性者的总检出率)99.1%则高于血清IgG者。20例其它疾病及10例正常人尿抗体均为阴性。结果表明尿抗体检查法是特异且可靠的,它比血清学方法简便、灵敏、为临床诊断可早期快速得出结果,不用采血有利于病人。IgM型抗体阳性率受病程、病期、病型及尿蛋白量的影响较明显。 相似文献
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将APAAP桥联酶标技术用于HIV抗体检测,其特异性和重复性与免疫荧光技术相同,敏感性高于后者。APAAP法易辨认掌握,不需特殊仪器,适用于基层和临床使用。 相似文献
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目的 纯化金黄地鼠血清IgG,制备兔抗金黄地鼠酶标抗体(IgG-HRP),开展金黄地鼠仙台病毒的初步检测.方法 采用亲和层析纯化法纯化金黄地鼠IgG,用SDS- PAGE电泳测定IgG纯度并制备兔抗金黄地鼠IgG抗体(second antibody,Ab2);用免疫双扩散法检测抗血清效价后,再用亲和层析纯化抗血清IgG( Ab2);采用改良过碘酸钠标记法制备兔抗金黄地鼠酶标抗体( rabbit anti-hamster IgG-HRP);用直接ELISA和Western-blot法对兔抗金黄地鼠IgG酶标抗体进行工作浓度测定;应用金黄地鼠酶标抗体对金黄地鼠仙台病毒进行酶免检测(IEA).结果 金黄地鼠血清IgG纯度达95%;兔抗金黄地鼠IgG抗体(Ab2)免疫双扩散效价为1(:)64;兔抗金黄地鼠IgG -HRP经直接ELISA和Western-Blot测定工作浓度分别为1∶5000和1∶2000;酶免(IEA)效价为1:2000.结论 高效快速纯化了金黄地鼠IgG,制备了金黄地鼠IgG-HRP,为金黄地鼠病原微生物的血清学检测提供了条件. 相似文献
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应用病毒感染细胞酶联免疫吸附试验(VIC-ELISA)检测肾综合征出血热病毒(HFRSV)感染性滴度比双抗体间接ELISA和间接免疫荧光法(IFA)分别敏感10倍和100倍。VIC-ELISA检测兔抗HFRSV抗体的滴度比双抗体间接夹心ELISA和IFA分别敏感1.6倍和8倍。VIC-ELISA能敏感、快速、有效地检测HFRSV抗原和抗体。 相似文献
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用双抗体夹心ELISA法检测肾综合征出血热(HFRS)汉滩病毒LRI株糖膜蛋白(GP),并用SDS-PAGE电泳对ELISA检测结果进行验证,实验结果显示,双抗体夹心ELISA法特异性强,重复性好,简便易行,是HTN病毒糖膜蛋白较为理想的检测方法,对HFRS疫苗的生产和质量控制有重要意义。 相似文献
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本文通过特异性试验、重复性试验、稳定性试验,建立了斑点酶免疫试验(DEIA)检测狂犬病毒抗体的方法,其结果与间接免疫荧光(IFA)法进行了比较,符合率100%,实验结果表明本法不但简便、稳定而且敏感特异,不需要特殊仪器设备及昂贵的荧光显微镜,是一种值得推广的检测狂犬病毒抗体的方法。 相似文献
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流行性出血热病毒沙鼠肾细胞培养灭活疫苗免疫家兔的抗体反应及保护试验 总被引:3,自引:0,他引:3
利用自流行性出血热(EHF)病人血液中分离的EHF病毒浙10株,感染长爪沙鼠肾单层细胞,经培养后,按流行性乙型脑炎的生物制品法规要求研制成灭活疫苗。取1ml经肌肉免疫家兔,6天后即可在血液中检出荧光抗体,至第14~21天为最高峰,荧光抗体效价可达320~2560。经活EHF病毒攻击,有明显的保护作用,保护率达90%以上。疫苗经1:10或1:30稀释后免疫家兔,荧光抗体阳转率仍达100%,但抗体滴度明显降低。肌肉接种优于皮下接种。本研究证明,甲醛灭活EHF病毒可破坏血凝素活性,从而影响疫苗血凝抑制抗体的产生,可能也会影响中和病毒的能力。 相似文献
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大熊猫的妊娠测定对其繁殖工作具有重要意义。Hodges等(1984)曾报道大熊猫妊娠期甾体激素的变化,Masui等(1985)连续5年测定大熊猫尿中的雌激素和孕二醇。由于非妊娠熊猫也出现近似妊娠的激素分解产物的峰值变化,因此,诊断不可靠。刘维新等(1990)报道T淋巴细胞E玫瑰花环结合率试验,在排卵后4天左右就能较准确地测出大熊猫受孕情 相似文献
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应用金黄地鼠作动物模型测定国内外四种流行性出血热灭活疫苗的保护率,并测定相应的中和抗体进行比较,发现四种疫苗对动物的保护率均较明显优于其中和抗体水平。说明保护力试验能较全面反映EHF疫苗的效力和质量水平。 相似文献
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付艳丽马亚茹辛芳孔涛张艳丽陈勇 《生物技术》2022,(6):699-703
[目的]建立促胰岛素分泌肽融合蛋白(Exendin-4-Fc fusion protein,简称E4F4)生物学活性的检测方法,并对新建方法进行优化及验证。[方法]采用U2OS/GLP-1R转基因细胞系,通过酶标法检测胞内cAMP含量的改变来测定E4F4生物学活性。[结果]U2OS/GLP-1R转基因细胞系在30代以内均可用于E4F4生物学活性的检测,细胞接种密度为1.2×10^(4)/孔,药物作用时间30 min为该方法的最佳检测条件;在0.00305~50μg/mL范围内,剂量效应曲线呈典型的S型半对数曲线;3批E4F4成品分别进行加标回收试验,回收率均在80%~120%之间;对同一批E4F4成品独立测定8次,CV%值为12.81%;3批E4F4成品在3个工作日内进行生物学活性检测,每批分别测定3次,9次试验的CV%为16.73%。[结论]经过细胞接种密度、细胞代次和药物作用时间的优化,建立的U2OS/GLP-1R细胞酶标法专属性强,精密度好,准确性高,可作为E4F4生物学活性的常规检测方法。 相似文献
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在用病毒唑(Ribavirin)治疗肾综合征出血热(Hemorrhagic fever with renal syndrome,HFRS)(以安慰剂作对照)的双盲法临床试验中,用微量酶联免疫吸附技术对确诊的64例患者血清和尿液中特异性IgG及IgM抗体水平进行动态观察与分析,结果发现,病毒唑治疗组两种血清抗体水平均较安慰剂对照组低(IgG,P<0.001;IgM,P<0.05),而两组患者尿液中两种抗体水平与阳性率均无明显差异,表明病毒唑对HFRS患者抗体的生成具有抑制作作用,本文就该作用的原因与后果进行了分析评价。 相似文献
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丙型肝炎(Hepatitisc)是一种经血液传播、性传播和母婴传播的传染病,是由丙型肝炎病毒(Hepatitisc VirusHCV)引起的非甲非乙型肝炎,它是1989年9月在日本东京召开的国际非甲非乙型肝炎学术会上正式命名的。丙型肝炎的检测由1986年间建立了抗体的RLA和ELA方法。于1992年利用ELA方法检测HCV抗体,材料来源方便,方法简单,便于临床实验开展。1材料与方法1·1材料(1)血清标本:血清标本取自于本院门诊及住院患者(诊断符合1990年上海肝炎会议诊断分型)以及来院健康体检者。(2)试剂:抗-HCV酶免试剂盒(由厦门新创科技有限公司提供)。1·2方法… 相似文献