百白破混合制剂接种后ADCC和NK细胞活性的变化

<正>自然杀伤细胞(NK细胞)是对某种靶细胞具有细胞损伤活性的正常未致敏淋巴细胞。NK细胞活性与抗体依赖性细胞介导的细胞毒性(ADCC)活性不同,是在无特异性抗体的情况下对靶细胞所呈现的活性,因而,它在肿瘤免疫和病毒感染时作为免疫活性细胞参与初期防御作用较之ADCC活性更重要。     

人白细胞抗原-G1对NK92效靶识别过程的影响

人白细胞抗原G(human leukocyte antigen-G,HLA-G)属非经典的主要组织相容性复合体(major histocompatibility complex, MHC)Ⅰ类分子,为自然杀伤细胞（natural killer,NK）抑制性受体的识别配体,可以向NK细胞传递抑制性信号,从而抑制NK细胞的细胞毒作用.为了研究HLA-G对NK与靶细胞识别作用的影响机制,采用激光扫描共聚焦显微镜和流式细胞术对全长HLA-G1的表达和功能进行了探讨,并对效靶识别过程中靶细胞［Ca²⁺］_i（胞内自由钙离子浓度）进行了实时检测.结果发现,全长的HLA-G1表达于K562、JAR和CHO细胞的胞浆和胞膜上,它能够部分地抑制NK92的细胞毒作用. NK92与CHO和GFP-CHO细胞作用后,靶细胞［Ca²⁺］_i出现了明显的升高,HLA-G1的表达则抑制了靶细胞［Ca²⁺］_i的升高.结果提示：靶细胞［Ca²⁺］_i的升高是有效的细胞杀伤作用的必要条件,HLA-G的免疫抑制功能可能与靶细胞胞内钙离子浓度升高的抑制作用有密切关系.     

流式细胞术和LDH释放法检测NK细胞杀伤效能的实用性比较

目的 流式细胞术和乳酸脱氢酶(LDH)释放法检测自然杀伤细胞(natural killer cell,NK细胞)体外杀伤功能的比较和优化.方法 以人外周血PBMCS经体外诱导扩增的NK细胞为效应细胞,K562细胞作为靶细胞,按5:1、10:1、20:1、40:1效靶细胞比共培养,分别采用LDH法和流式细胞术检测靶细胞死...     

IL-2假单孢菌外毒素嵌合蛋白有极高的细胞毒性

单克隆抗体、植物凝集素或多肽激素与细菌或植物毒素化学偶联后,可引导毒素对特异真核细胞的杀伤作用。Lorberboum—Galski 实验室曾用假单孢菌外毒素(PE)制备了杀伤特异靶细胞的制剂。PE 由三个功能区组成。功能区Ⅰ负责细胞识别作用;功能区Ⅱ负责位易,使毒素跨过质膜进入细胞;功能区Ⅲ负责蛋白质合成,延长因子2的 ADP-核糖基化,这是关系细胞存亡的关键步骤。缺失功能区Ⅰ的外毒素 PE_(40),其 ADP-核糖基化作用完好,但杀伤细胞的活性极低,因其不能识别靶细胞。将 PE_(40)与特定基因融合成嵌合基因,产生嵌合蛋白,利用特定基因产物的导向作用杀伤靶细胞。     

Ⅰ型单纯疱疹病毒感染的细胞培养系统的建立

目的:建立稳定的HSV-1感染的细胞培养系统,为HSV-1感染性皮肤病的基础及临床研究提供稳定的平台。方法:以猴肾细胞(Vero)为繁殖细胞,选择人鼻咽癌上皮细胞(Hep-2)为靶细胞,观察HSV-1在Hep-2株中的致细胞病变效应(CPE)。结果:HSV-1在Vero细胞中能稳定、大量地繁殖;HSV-1感染Hep-2细胞后可出现明显的细胞病变;结论:以Vero为繁殖细胞,Hep-2为靶细胞的稳定的细胞培养系统可作为HSV-1感染性皮肤病的基础及临床研究的平台。     

免疫脂质体与人胃癌细胞的相互作用

我们把抗人胃癌细胞M85的单克隆抗体3Hll插入脂质体的脂双层做成免疫脂质体,研究了这些免疫脂质体与M85细胞的相互作用.结果表明,M85细胞对免疫脂质体的吸收与温育时间、温度密切相关.在37℃温育10小时,细胞吸收的免疫脂质体的量是在4℃时的7倍左右.37℃温育5小时,靶向脂质体结合在M85靶细胞上的量是非靶向脂质体的2倍多;与非靶细胞—人皮肤成纤维细胞Fb32的结合量只有与M85靶细胞结合量的1/6.游离单抗3Hll能够抑制靶向脂质体与靶细胞的结合,而专一性与3Hll抗体不同的单抗3G9则不能.NH_4Cl和NaN_3等内吞作用抑制剂使靶细胞吸收免疫脂质体的量分别减少58%和79%.与此同时,NH_4CI还能抑制包入脂质体的ADM,而不能抑制游离ADM的细胞毒作用.因此我们的结论是,3Hll免疫脂质体能够与靶细胞专一地结合,并把所荷载的物质主要经内吞作用输送到细胞内,杀伤靶细胞.用荧光显微镜对与荧光免疫脂质体温育的M85细胞进行的形态观察也支持上述结论.     

Epstein-Barr病毒特异性T细胞对重组痘苗病毒表达LMP和EBNA2的靶细胞的识别

本文用EB病毒转化自体淋巴细胞所建立的类淋巴母细胞系(LCL),以及用EB病毒潜伏感染膜蛋白(LMP)基因和核蛋白-2(EBNA2)基因与痘苗病毒重组的重组病毒(Vac-LMP和Vac-EBNA2)感染的自身纤维母细胞,同时作为刺激细胞和靶细胞,以~(51)Cr释放法检测5例血清中EB病毒VCA—IgA抗体阳性者及1例阴性健康者外周血单个核细胞(PBMC)的特异性T细胞杀伤效应。结果表明,用自身LCL激活的EB病毒特异性T细胞杀伤效应高峰出现在第14～28天;参与杀伤性细胞免疫反应的T细胞亚群主要是T3、T8阳性的细胞毒性T细胞,其对靶细胞的识别及杀伤受HLA-I的限制。用重组牛痘病毒感染的纤维母细胞作靶细胞或刺激细胞,有1例供者可接受LMP,另1例可接受EBNA2的刺激,并对相应的靶细胞产生特异性T细胞杀伤反应,表明EB病毒-LMP和EBNA2可能既是EB病毒特异性T细胞的刺激抗原,又是其识别的靶抗原。     

糖基化磷脂酰肌醇锚定蛋白转化法—一门全新的细胞 …

糖基化磷脂酰肌醇（ＧＰＩ）锚定蛋白是一种新型细胞表面蛋白,它只通过ＧＰＩ结构锚定于细胞膜表面而不跨越其磷脂膜双层结构;当它与细胞共同孵育时,可自动整合至细胞膜表面。ＧＰＩ锚定蛋白转化法利用ＧＰＩ锚定信号将目的蛋白直接整合至靶细胞表面,超越了目的蛋白靶细胞自身合成的机制,具有对靶细胞选择性不高,转化过程迅速等优点,在抗原提呈细胞工程,肿瘤疫苗及移植物抗排斥反应等研究领域得到了广泛应用。     

脂质体包裹阿霉素的体外抗肿瘤作用

 我们用超声法制备了内部包裹阿霉素,表面有抗人胃癌细胞M85的单克隆抗体3Hll或非相关抗体IgG的阿霉素靶向脂质体和阿霉素非靶向脂质体,研究了这些脂质体和游离阿霉素抑制靶细胞M85和非靶细胞HeLa细胞生长的能力。结果表明,一方面,与游离阿霉素或阿霉素非靶向脂质体相比,阿霉素靶向脂质体抑制M85细胞生长的能力提高了2—4倍,而在抑制非靶细胞HeLa细胞的生长方面,阿霉素靶向脂质体的效力还不如游离阿霉素或阿霉素非靶向脂质体。过量的游离单克隆抗体3Hll可以有效地抑制阿霉素靶向脂质体对M85细胞的细胞毒作用,而另一种单克隆抗体3G9则不能。空靶向和空非靶向脂质体对M85细胞生长均无影响。因此,靶向脂质体可以把包裹的抗癌药物专一地送给胃癌细胞,井杀伤它们。     

病毒特异性CD8+T细胞抗病毒免疫的研究进展

病毒利用宿主细胞核酸和蛋白质装置进行增殖,并与宿主细胞表面的受体结合,感染众多靶细胞c一旦建立感染,抗原呈递细胞通过内源性抗原呈递途径加工、呈递病毒抗原,激活机体免疫应答。病毒特异性免疫主要机制是细胞毒性T淋巴细胞作用,清除病原体和感染的靶细胞．同时CD8^ T细胞分化为记忆T细胞,介导再次免疫应答。     

雷帕霉素对CAR-T细胞功能的影响

为探索雷帕霉素对CAR-T细胞体外杀伤靶细胞、杀伤后的扩增及细胞因子分泌能力的影响,该研究在体外使用靶向CD19的CAR-T细胞与CD19⁺CD22⁺Raji靶细胞的T细胞特异性杀伤模型,在不同效靶比、不同时相点、不同雷帕霉素浓度下,通过流式细胞绝对计数检测细胞杀伤率发现雷帕霉素不影响CAR-T细胞对靶细胞的杀伤能力。通过羟基荧光素二醋酸盐琥珀酰亚胺脂(CFSE)检测CAR-T细胞扩增能力,发现雷帕霉素通过抑制CAR-T细胞增殖而非促进凋亡的方式降低其活化后的扩增数量。通过流式细胞术微球阵列法(CBA)检测细胞因子分泌情况,发现雷帕霉素可显著性降低CAR-T细胞被靶细胞活化后的细胞因子分泌水平。综上所述,雷帕霉素可在不影响CAR-T细胞杀伤功能的前提下,降低其炎性因子分泌水平。     

小鼠resistin基因慢病毒表达载体构建及在KMB17细胞中的表达

[目的]构建携带小鼠resistin基因的慢病毒表达载体,并高效转导靶细胞。[方法]从小鼠脂肪组织提取总RNA,经PCR扩增、酶切、连接、转化后构建重组质粒;通过293T细胞包装为重组慢病毒颗粒,然后感染KMB17细胞,检测小鼠resistin基因在靶细胞中的表达。[结果]PCR扩增到预期的342 bp大小的resistin基因目的片段;构建的重组质粒经酶切得到了342 bp大小的目的片段,测序鉴定为小鼠resistin基因序列;重组慢病毒包装可观察到很强的绿色荧光,说明具有较高的质粒转染效率;重组慢病毒感染KMB17后可检测到小鼠resistin基因转录水平和蛋白水平的表达,证明resistin基因得到有效转导并可在靶细胞中高水平表达。[结论]成功构建了携带小鼠resistin基因的慢病毒表达载体并可在KMB17靶细胞中获得高效表达。     

免疫脂质体对白血病细胞杀伤的扫描电镜观察

采用脂质体技术包裹中华眼镜蛇膜毒素(CT)并与抗人T细胞单克隆抗体结合制备成pH敏感型免疫脂质体.它在pH8.0～7.0间十分稳定,但在接近细胞浆微酸性环境(pH<6.0)时很容易破裂而释出包裹之内容物.用这一免疫脂质体处理人白血病T淋巴细胞系CEM细胞并用扫描电镜观察脂质体对靶细胞的作用,显示这一免疫脂质体可特异性杀灭靶细胞而对抗原阴性细胞影响不大．     

质膜肌醇脂质代谢与细胞外信号的转换

有机体、尤其是高等哺乳动物都是一个结构层次分明的复杂系统。其各个组成部分在结构与功能上存在着十分密切的联系,而细胞外信号对靶细胞生理活动的调控是实现这种协调关系的主要方式。所以,靶细胞如何将细胞外信号转换成细胞内应答反应,其机制一直是一个很重要的研究领域。目前已深入、广泛了解到cAMP水平的改变就是某种转换机制产生的第二信使。此外,还普遍注意到靶细胞接受外     

垂体内细胞间信息可调节ACTH分泌

腺垂体分泌促肾上腺皮质激素(ACTH)的功能受多种促进和抑制其分泌因子的调节。近来发现,腺垂体内还存在多种分泌ACTH的细胞亚型。一种新合成的试剂——CRF靶细胞特异性细胞毒结合物CX,可特异性引起腺垂体CRF靶细胞死亡。利用它来研究腺垂体内细胞信息与ACTH分泌的关系。     

人类免疫缺陷病毒辅助受体的研究进展

人类免疫缺陷病毒（ＨＩＶ）进入靶细胞需要ＣＤ４受体及辅助受体的参与,不同的ＨＩＶ株进入靶细胞需不同的辅助受体,亲Ｔ细胞ＨＩＶ株进入靶细胞需融合因子辅助,而亲巨噬细胞ＨＩＶ株进入靶细胞则需另一种辅助受体ＣＣ－ＣＫＲ－５辅助受体的发现,为研究ＨＩＶ的致病机制及艾滋病的治疗提供新的方向。     

多肽激素与靶细胞相互作用的形态学研究

用形态学方法,主要是电子显微镜放射自显影和铁蛋白标记的方法研究多肽激素与靶细胞的相互作用,发现当靶细胞暴露于激素时,激素首先与细胞表面结合。标记激素在细胞表面的分布不均匀,常选择性地结合于微绒毛和质膜的特化区域。配体与受体结合后,可在细胞膜平面内重新分布,并集中于覆衣凹陷,经胞饮作用进入细胞,在溶酶体内被分解。     

多肽激素与靶细胞相互作用的形态学研究

用形态学方法,主要是电子显微镜放射自显影和铁蛋白标记的方法研究多肽激索与靶细胞的相互作用,发现当靶细胞暴露于激素时,激素首先与细胞表面结合。标记激素在细胞表面的分布不均匀,常选择性地结合于微绒毛和质膜的特化区域。配体与受体结合后,可在细胞膜平面内重新分布,并集中于覆衣凹陷,经胞饮作用进入细胞,在溶酶体内被分解。     

多表位肽抗原诱导特异性CTL抗慢性髓性白血病细胞的体外实验研究

目的：在应用基因工程技术人工表达获得多表位BCR-ABL融合蛋白的基础上,对该融合抗原在体外诱导对自血病细胞的特异性杀伤效应进行检测,探索慢性髓性自血病（CML）免疫治疗的新途径。方法：从外周血单个核细胞培养树突细胞（DC）,以BCR-ABL融合抗原脉冲刺激DC,诱导特异性细胞毒T淋巴细胞（CTL）产生;MTT法检测CTL对白血病靶细胞的特异性杀伤活性。结果：以BCR-ABL融合抗原刺激产生的CTL能特异性抑制b3a2＋的靶细胞生长,包括K562细胞（P〈0．01）和HIJA-A2＋／b3a2＋的CML原代细胞（P〈0．05）,而对HIA-A2-或b2a2＋靶细胞无明显抑制作用。结论：设计表达的多表位BCR-ABL融合抗原能在体外诱导特异性抗CML免疫反应,抑制b3a2＋自血病细胞生长,有望为进一步的体内实验奠定基础。     

骨髓基质细胞的特征及其在细胞和基因治疗中的应用

骨髓基质细胞是一类独特的间质干细胞,可分化为多种非造血系的组织。骨髓基质细胞具有贴壁生长的特性,因而易于在体外分离和扩增;另外骨髓基质细胞可在体内外表达多种治疗性的外湖目的基因。因此,骨髓基质细胞被认为是一种理想的治疗性细胞的基因治疗中的靶细胞。本文对骨髓基质细胞的研究进展及其在细胞和基因治疗中的应用作一综述。