低氧对兔主动脉和肺动脉损伤差异的探讨

将兔置于模拟海拔５ｋｍ（ＰＯ２＝１０．８ｋＰａ）低氧舱内２４ｈ,观察和比较低氧对主动脉和肺动脉形态学损伤的差异,结果显示５ｋｍ低氧２４ｈ,兔主动脉和肺动脉出现内膜下水肿,空泡增加,胞内线粒体和内质网不同程度损伤。但低氧对肺动脉的损伤明显重于主动脉,甚至已殃及平滑肌细胞。扫描电镜观察也显示模拟海拔５ｋｍ低氧２４ｈ,肺动脉内皮细胞出现损伤脱落,甚至出现断裂带,而在主动脉仅见内皮细胞轻微损伤。另又将离体     

CXCR4 抑制剂AMD3100 对大鼠低氧性肺动脉高压作用的实验研究

目的:研究CXC趋化因子受体-4(CXC Chemokine receptor-4,CXCR4)的抑制剂(AMD3100)对大鼠低氧性肺动脉高压的影响。方法:将实验动物随机分为常氧对照组、低氧组、低氧+AMD3100组,采用低压低氧法建立大鼠低氧性肺动脉高压模型,4周后观察低氧对CXCR4表达的影响及各组大鼠血流动力学、右心室肥厚指标和组织病理学改变。培养原代大鼠肺动脉平滑肌细胞(Pulmonary arterial smooth cells,PASMCs),分别低氧处理及给予AMD3100,观察细胞迁移、增殖情况。结果:1低氧组大鼠CXCR4表达增加,右心室压力(Mean right ventricle pressure,m RVP)、右心室肥厚指标(Right ventricle/Body weight,RV/BW;Right ventricle/Left ventricle plus septum,RV/(LV+S))增加,肺细小动脉管壁增厚,造模成功;低氧+AMD3100组大鼠m RVP和RV/BW、RV/(LV+S)比值、肺细小动脉管壁增厚程度较低氧组明显降低(P0.05)。2低氧组PASMCs与常氧组相比,细胞迁移及增殖均明显增加;AMD3100组PASMCs迁移和增殖与低氧组相比受抑制(P0.05)。结论:AMD3100能有效的降低大鼠低氧性肺动脉高压的m RVP,抑制肺细小动脉管壁的增生,减轻右心室的肥厚,其有可能是通过抑制了PASMCs的迁移和增殖,从而抑制肺血管的重建,防治低氧性肺动脉高压。     

高原低氧环境下影响肺动脉压力的相关因素分析

肺动脉压力变化是反映机体在高原低氧环境中适应习服或病理损伤的重要生理指标，不同海拔、不同时间的低氧刺激对肺动脉压力的影响也不尽相同，其中许多因素影响肺动脉压力的变化，如血管平滑肌的收缩、血流动力学改变、血管活性调节异常以及心肺功能的异常改变等，深入探讨低氧环境下肺动脉压力的调节因素对明确低氧适应和习服的相关机制及急慢性高原病预防、诊断、治疗、预后具有重要的意义。近年来关于高海拔低氧环境下影响肺动脉压力的相关因素研究有了较大的进展，本文从循环系统血流动力学、血管活性状态及心肺功能变化等方面对低氧环境下肺动脉压力的调节因素和干预措施进行综述。     

清醒羊血浆PAF在低氧性肺动脉高压产生及逆转中的变化

本实验复制清醒羊低氧性肺动脉高压模型,观察肺动脉高压发生发展及逆转过程中血浆内源性血小板活化因子（ｐｌａｔｅｌｅｔａｃｔｉｖａｔｉｎｇｆａｃｔｏｒ,ＰＡＦ）的动态变化。结果表明：（１）低氧４ｄ引起低氧血症,导致肺血管收缩,形成肺动脉高压;停止低氧后可逆转;（２）开始低氧,血中内源性ＰＡＦ升高,但低氧时间延长血浆中ＰＡＦ却不随肺动脉压升高相应增加;（３）停止低氧,血浆ＰＡＦ不随肺动脉高压的逆转而相应降低。上述结果表明血浆ＰＡＦ的变化与肺动脉高压无关。提示血中内源性ＰＡＦ不介导清醒羊低氧性肺血管收缩导致的肺动脉高压。     

罗格列酮对低氧性肺动脉高压大鼠PPARr和PTEN 表达的影响

目的：研究罗格列酮（rosiglitazone, RSG）对低氧性肺动脉高压大鼠过氧化物酶体增殖物激活受体-r（Peroxisome proliferator activated receptor gamma, PPAR-r）和10 号染色体缺失张力蛋白同源磷酸酶基因（Phosphatase and tensin homolog deleted on chromosome 10, PTEN）表达的影响。方法：SD 大鼠随机分为正常对照组、低氧组、低氧+ 罗格利酮组,建立低氧性肺动脉高压大鼠模 型,4 周后测定各组大鼠右心室压力、右心肥厚指标,同时检测各实验组PPAR-r、PTEN 的表达和组织病理学变化。培养原代大鼠 肺动脉平滑肌细胞,分别给与低氧、低氧+罗格列酮、低氧+GW9662 处理后观察细胞增殖及PPARr、PTEN 的表达变化。结果：① 与正常组相比,低氧组大鼠右心室压力、右心肥厚指标明显增加,肺小动脉管壁增厚,PPAR-r、PTEN 的表达明显减少。与低氧组相 比,低氧+罗格列酮组大鼠右心室压力下降,右心室及肺小动脉管壁的肥厚减轻,PTEN 的表达增加。②低氧下,PASMCs 中 PPARr、PTEN表达明显减低,细胞增殖较常氧明显增加,给与罗格列酮后,PTEN 表达增加,给与GW9662,PTEN表达减少。③罗 格列酮可以抑制PASMCs低氧下的增殖,而给与GW9662 后,这一抑制作用减轻。结论：早期应用罗格列酮可激活低氧性肺动脉 高压大鼠PPARr的活性,进而上调PTEN表达,改善低氧性肺动脉高压。     

NF- kB 对低氧大鼠肺动脉平滑肌细胞ET- 1 表达的影响

目的：探讨核因子kB（NF—kB）对低氧大鼠肺动脉平滑肌细胞（PAMSC）内皮素-1（endothelin—1,ET—1）表达的影响。方法：分离培养大鼠肺动脉平滑肌细胞,分别在常氧和低氧条件下培养48小时。ELISA检测培养上清中ET—1含量,RT—PCR检测ET-1 mRNA表达。在培养液中加入NF—kB抑制剂PDTC,检测PASMCs ET—1表达的变化。Western blotting检测PASMCs IkB表达变化。结果：低氧培养能够诱导PASMCs表达ET—1。NF—kB抑制剂能够减少由于低氧引起的ET—1释放,IkB在低氧情况下表达明显减少。结论：ET-1低氧情况下在PAMCS表达明显增加。可能参与低氧所引起的肺动脉的病理过程。低氧所引起的ET—1表达增加可能通过NF—kB信号通路。     

三七总皂甙对低氧大鼠肺动脉压和肺组织ERK1/2表达的影响

目的:观察三七总皂甙(PNS)对慢性低氧大鼠肺动脉压、肺组织细胞外信号调节蛋白激酶(ERK)表达的影响,探讨PNS预防低氧性肺动脉高压(HPH)的作用和机制。方法:将30只健康雄性SD大鼠随机分为3组:对照组、低氧组和低氧+PNS组。以常压低氧法复制肺动脉高压模型,以微导管法测定平均肺动脉压(mPAP),测量右心室(RV)及左心室加室间隔(LV+S)的重量,以RV/(LV+S)代表右心肥厚指数。用Western blot法和逆转录PCR方法分别检测肺组织中磷酸化细胞外信号调节激酶(p-ERK1/2)蛋白和细胞外信号调节激酶1(ERK1)mRNA的表达。结果:与对照组相比,低氧组大鼠mPAP、RV/(LV+S)明显升高,肺组织匀浆pERK及ERK1 mRNA含量显著升高(P<0.01)。低氧+PNS组mPAP、RV/(LV+S)、肺组织匀浆pERK及ERK1 mRNA含量明显低于低氧组(P<0.05)。结论:PNS具有显著预防HPH的作用,其机理可能与其降低ERK1 mRNA的表达有关。     

慢性低氧所致肺动脉高压对大鼠肺血管平滑肌细胞及成纤维细胞中蛋白激酶CβI的膜转位和蛋白表达量的影响

目的通过观察慢性低氧所致肺动脉高压对大鼠肺血管平滑肌细胞及成纤维细胞中蛋白激酶CBI（PKCβI）的膜转位和蛋白表达量的影响,初步探讨PKCpI在慢性低氧诱导大鼠肺动脉高压的发生、发展过程中所起的作用。方法建立慢性常压低氧肺动脉高压大鼠模型,将雄性SD大鼠随机分为正常对照组、低氧1d、3d、7d、14d和21d组,应用蛋白免疫印迹和免疫组化技术检测肺动脉高压形成过程中大鼠肺血管平滑肌细胞及成纤维细胞中PKCβI的膜转位和蛋白表达水平。结果（1）RVSP和RV／（LV＋S）比值较正常对照组明显增加（P〈0．05）,低氧后3d、7d、14d和21d后大鼠肺血管明显增厚;（2）大鼠肺血管平滑肌细胞和成纤维细胞均有PKCβI的表达,且低氧14d后PKCβI的蛋白表达量较正常对照组相比降低（P〈0．05）。结论PKCβI蛋白表达量的下调可能参与了慢性低氧诱导的大鼠肺动脉高压肺血管重塑的发生、发展过程。     

低氧诱导因子与低氧性肺动脉高压发病机制的研究进展

低氧性肺动脉高压(HPH)是慢性肺源性心脏病和慢性高原病等发病的重要病理生理变化之一,其特点主要是以低氧性肺血管收缩反应增强和肺小动脉中层平滑肌细胞的异常增生(重建)为主。虽然HPH的发病机制仍不清楚,但近来研究表明内皮素(ET)、血管内皮生长因子(VEGF)、促红细胞生成素(Epo)和一氧化氮(NO)是HPH的重要致病因子。它们可在低氧诱导因子—1(HIF—1α)介导或在增加的血流切应力和氧应激反应刺激下产生,并发挥相应的作用。本文将对HIF在低氧性肺动脉高压发病中的重要作用及其进展作一简要概述。     

低氧对大鼠肺动脉平滑肌细胞pHi及细胞增殖、凋亡的影响

目的: 探讨低氧肺血管结构重建时是否伴有PASMCs凋亡.方法: 体外低氧培养大鼠PASMCs,BCECF法测定细胞内pH值、光镜及电镜观察细胞形态、流式细胞仪测细胞周期、原位细胞凋亡(TUNEL法)观察细胞凋亡.结果: PASMCs在低氧早期即出现细胞内碱化,低氧6 h即出现G0/G1期细胞比例减少,G2/M期细胞比例增加,至24 h丝裂活动最强,但细胞凋亡率无显著变化.结论: 低氧PASMCs在细胞内碱化、细胞增殖的过程中不伴有细胞凋亡的改变.     

肝素通过增加细胞周期抑制因子p27 减轻大鼠低氧性肺动脉高压

目的:研究肝素防治大鼠低氧性肺动脉高压的作用机制。方法:复制慢性低氧性肺动脉高压大鼠模型,将大鼠分为常氧对照组(Hypoxia),常氧加肝素组(Normoxia+H),缺氧模型组(Hypoxia)及缺氧加肝素组(Hypoxia+H)共四组。待模型复制完毕后,测定大鼠RVPSP和RV/LV+S,然后进行组织病理分析,测定MA%和MT%以确定肺动脉高压的程度。利用Western-blot实验与RT-PCR实验检测肺动脉中p27蛋白水平及RNA水平的变化。结果:慢性低氧显著增加了大鼠RVPSP、RV/LV+S、MA%和MT%,引起了大鼠肺动脉压力的增高、右心室肥厚和肺中小动脉的中膜增厚及外膜增生,肝素的使用减轻了慢性缺氧条件下大鼠的RVPSP和RV/LV+S,降低了MA%和MT%,有效降低了肺动脉高压、右心室肥厚,并减轻了肺中小动脉的中膜增厚和外膜增生。Western-blot实验发现使用肝素的缺氧组大鼠肺动脉中p27蛋白表达增加,而RT-PCR实验发现p27的转录水平变化不显著。结论:结果显示肝素可能通过增加p27的表达,从而抑制肺动脉平滑肌细胞的增殖,减轻了肺动脉血管的狭窄及降低了肺动脉高压。     

低氧对大鼠右心室肥厚及心肌中缝隙连接蛋白43表达的影响

目的:研究低氧对大鼠右心室肥厚及心肌中缝隙连接蛋白43 (Cx43)表达的影响.方法:40只健康雄性SD大鼠随机分为正常组(control)、低氧3周组、低氧4周组和低氧5周组.除正常组外,其余3组大鼠分别在低氧环境中饲养3周、4周和5周.测定和比较各组大鼠的平均肺动脉压力(mPAP)、右心室收缩压(RVSP)、右心室肥厚度[Rv/(LV+S)％],并通过免疫组化染色法观察各组大鼠左心室心肌细胞中cx43的表达.结果:与正常组相比,低氧3周、4周、5周组大鼠的mPAP、RVSP、右心室肥厚度均显著升高(P均＜0.05),与低氧3周组比较,低氧4周、5周组大鼠的mPAP、RVSP、右心室肥厚度均显著升高(P均＜0.05),而低氧5周组大鼠的mPAP、RVSP、右心室肥厚度均显著高于低氧4周(P均＜0.05).免疫组织化学结果显示:低氧组大鼠Cx43排列紊乱,端-端连接减少,侧面连接增多;随着低氧时间的延长,大鼠心肌细胞中Cx43的表达逐渐减少,差异具有统计学意义(P均＜0.05).结论:低氧可导致右心室肥厚,并随着诱导时间的延长而逐渐加重,这可能与心肌中Cx43的分布紊乱及表达减少有关.     

p38MAPK在低氧高二氧化碳肺动脉平滑肌中的表达及三七皂苷单体Rb_1的干预

该实验旨在探讨三七皂苷单体Rb1对低氧高二氧化碳性肺动脉收缩的作用及其与p38MAPK信号通路的关系。原代培养雄性SD大鼠肺动脉平滑肌细胞(PASMCs),取第2~5代细胞,随机分为五组:常氧组(N组)、低氧高二氧化碳(1%O2,6%CO2)组(H组)、低氧高二氧化碳+8 mg/m LRb1组(RbL组)、低氧高二氧化碳+40 mg/m L Rb1组(RbM组)、低氧高二氧化碳+100 mg/m L Rb1组(RbH组)。孵育24 h后收集细胞,分别采用免疫印迹法测定p38MAPK磷酸化蛋白的表达水平,半定量逆转录–聚合酶链反应技术检测p38MAPK基因的表达水平。p-p38MAPK蛋白在N组表达弱阳性;较之H组,Rb1干预组(RbL、RbM、RbH组)表达均不同程度减弱,以RbM组最为显著,差异有统计学意义(P0.01);p38MAPK m RNA在N组表达较弱;与H组相比,RbL、RbM和RbH组中p38MAPK m RNA表达均不同程度下降,以RbM组最为显著(P0.01)。上述结果表明,p38MAPK信号通路可能介导大鼠低氧高二氧化碳性肺动脉收缩;三七皂苷单体Rb1可能通过抑制p38MAPK信号通路的表达而减轻低氧高二氧化碳性肺动脉收缩。     

HIF-1调控低氧性肺动脉高压北大核心CSCD

低氧性肺动脉高压(hypoxia-induced pulmonary hypertension,HPH)是多种慢性病高原病发病的中心环节,严重影响疾病的病程和预后。其主要特点是低氧刺激下诱发过度的肺血管收缩反应和异常的肺血管结构重塑,导致慢性肺源性心脏病的发生。低氧诱导因子-1(hypoxia inducible factor-1,HIF-1)被认为是低氧环境下感受氧变化的重要转录调控因子,可调控多种低氧相关靶基因表达,影响肺血管重塑过程。本文就低氧下HIF-1在低氧性肺动脉高压形成中的研究进展做一综述。     

慢性低氧对豚鼠右室心肌细胞钙、钾电流的影响

采用全细胞膜片箝技术,分别记录并比较正常对照组与慢性低氧组豚鼠单个右室心肌细胞的膜电容、L型钙电流和延迟整流钾电流峰值和电流-电压关系曲线,以探讨慢性低氧对豚鼠右室心肌细胞L型钙电流和延迟整流钾电流的影响。结果表明,上述两组细胞膜电容分别为（155±13．2）pF、（179±14,8）pF,低氧组显著大于正常对照组（P＜0．01）;L型钙电流峰值分别为（1．07±0．21）nA和（0．99±0．17）nA,两组之间无显著差异;在-20mV至＋20mV,慢性低氧组L型钙电流密度较正常对照组显著下降（P＜0．05）。在＋月mV至＋60mV之间,慢性低氧组豚鼠右室心肌细胞延迟整流钾电流幅度均小于正常对照组;在-20mV至＋60mV之间,慢性低氧组豚鼠右室心肌细胞延迟整流钾电流密度明显低于正常对照组。可见慢性低氧能使豚鼠右室心肌细胞膜电容增加,L型钙电流幅度不变,但L型钙电流密度下降;同时慢性低氧降低豚鼠右室心肌细胞延迟整流钾电流幅度和密度。     

低氧对培养的不同内径的肺动脉平滑肌细胞增殖的影响

目的和方法：分离培养三种不同内径的肺动脉平滑肌细胞（PASMCs）,用^3H－TdR掺入速率和细胞计数作为细胞增殖的指标,观察低氧对其增殖作用的影响。结果：低氧对三种不同内径的PASMCs（内径分别为＞1000μm、500－800μm、300-400μm）增殖促进作用显著不同,其^3H－TdR掺入速率和细胞计数分别增加23.5％和11.1％、60.0％和33.8％、141.4％和52.0％,选择对低氧最敏感的PASMCs（内径为300－400μm）,进一步探讨低氧促PASMCs增殖作用的细胞机制：钙拮抗剂verapail、蛋白激酶C抑制剂staurosporine(Stau)和细胞Na-H交换抑制剂amiloride可显著降低低氧情况下PASMCs^3H－TdR掺入速率和细胞计数。结论：低氧对三种不同内径的PASMCs增殖促进作用显著不同; Ca^2 、蛋白激酶C和Na^2 －H^ 交换的激活,可能是低氧促PASMCs增殖的重要胞内信息转导机制。     

低氧时肾上腺髓质素对人胚肺成纤维细胞胶原合成和转化生长因子β1表达的影响

观察低长因子β1(TGF-β1)表达的影响.体外培养人胚肺成纤维细胞,分常氧和低氧24、48、72 h组,用[3H]-脯氨酸掺入法反映细胞总胶原合成和分泌,ELISA法检测细胞上清液中TGF-β1活化蛋白质含量.低氧24、48、72 h,细胞总胶原合成和分泌分别是常氧组的125.88%和124.74%、183.44%和165.73%、152.55%和172.93%(P＜0.01).低氧24、72 h,ADM(10-7mol/L)组细胞胶原合成分泌减少了19.24%和20.76%(P＜0.01)、9.57%(P＜0.05)和10.98%(P＜0.01);低氧48 h,ADM(10-9、10-8、10-7mol/L)组胶原合成分泌分别降低了5.57%(P＜0.05)和9.19%(P＞0.05)、11.09%(P＜0.01)和14.49%(P＜0.05)、35.41%(P＜0.01)和18.57%(P＜0.05).低氧48 h,细胞培养液中TGF-β1上升了24.17%(P＜0.05),加入ADM(10-7mol/L),TGF-β1比对照组下降了17.53%(P＜0.05);低氧72 h,ADM(10-7mol/L)组TGF-β1下降了19.49%(P＜0.05).低氧时ADM通过阻碍成纤维细胞胶原合成而影响低氧性肺血管改建及损伤组织修复过程,ADM与TGF-β1可能通过相互拮抗,共同调节成纤维细胞胶原的生成.     

Apelin对大鼠离体肺动脉环的舒张作用及与一氧化氮的关系

目的：探讨新的小分子活性肽Apelin对大鼠离体肺动脉环的舒张作用及与一氧化氮（NO）途径的关系,并比较低氧大鼠的肺动脉环对Apelin的舒张反应与正常大鼠的差异。方法：36只大鼠随机分为正常组与低氧组;采用离体血管环灌流法,检测Apelin对去甲肾上腺素（NE）预收缩的大鼠离体肺主动脉环的舒张效应,观察去内皮或用一氧化氮合酶抑制剂（L-NAME）、可溶性鸟苷酸环化酶（sGC）抑制剂（ODQ）孵育后该舒张率的变化。结果：①在正常组大鼠肺动脉环,Apelin（0.01~100 nmol/L）具有浓度依赖性的舒张效应。去除内皮后,Apelin对NE预先收缩的肺血管舒张效应明显减弱（P〈0.01）。L-NAME或ODQ预孵育后,Apelin的舒张效应均明显减弱（P均〈0.01）。②低氧组大鼠的肺动脉环对Apelin的舒张反应明显低于正常组大鼠,在最大浓度100 nmol/L时,Apelin的效应低60.45%（P〈0.01）,而两组EC50相比差异无显著性（P〉0.05）。结论：Apelin具有内皮依赖性的舒张肺动脉环的作用,该效应与NO-sGC-cGMP信号途径有关;低氧大鼠的离体肺动脉环对Apelin的舒张反应减弱。     

常氧和急性低氧下大鼠传导性肺动脉平滑肌细胞的电生理特性

本文旨在研究大鼠传导性肺动脉平滑肌细胞（pulmonary artery smooth muscle cells,PASMCs）的电生理特征及对急性低氧的反应。用酶解法急性分离出1-2级分支的PASMCs,通过全细胞膜片钳方法研究常氧及急性低氧状况下细胞钾电流的差异,并在常氧下先后使用iBTX和4-AP阻断大电导钙激活钾离子（large conductance Ca-activated K^＋,BKCa）通道及延迟整流性钾离子（delayed rectifier K^＋,KDR）通道后,观察细胞钾电流特征。根据细胞的大小、形态及电生理特征可将PASMCs分为Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ类。iBTX对Ⅰ类细胞几乎无作用,而4-AP几乎完全阻断它的钾电流;Ⅱ类细胞的钾电流在加入iBTX后大部分被抑制,其余的对4．AP敏感;Ⅲ类细胞的钾电流对iBTX及4-AP均敏感。急性低氧对三类细胞的钾电流均有不同程度的抑制,并使Ⅰ类细胞的膜电位显著升高,而Ⅱ、Ⅲ类细胞膜电位升高的程度不如Ⅰ类显著。结果表明,传导性肺动脉有3种形态及电生理特性不同的PASMCs,在急性低氧时其钾电流不同程度地受到抑制,同时静息膜电位也有不同程度去极化,这些可能参与急性低氧时传导性肺动脉舒缩反应的调节。KDR及BKCa通道在3种细胞中的比例不同可能是急性低氧对3种PASMCs影响不同的离子基础。     

低氧性肺动脉高压小鼠体内脂质水平的变化

目的：观察低氧性肺动脉高压小鼠体内脂质代谢的变化,探讨脂质代谢异常在低氧性肺动脉高压发生发展中的意义。方法：SPF级雄性C57BL/6小鼠20只,随机分为2组（n=10）：常氧组和低氧组。常压连续低氧3周（9%~11% O₂,23 h/d）复制慢性低氧性肺动脉高压模型,测定小鼠右心室压（RVSP）和右心室与左心室加室间隔重量比,Elisa法检测血浆中总胆固醇（TC）、低密度脂蛋白（LDL）、高密度脂蛋白（HDL）的含量;real-time PCR法检测肝组织中3-羟基-3-甲基戊二酸单酰辅酶A还原酶（HMGCR）、低密度脂蛋白受体（LDLR）、清道夫受体B1（SR-B1）、固醇调节元件结合因子2（SREBF2）等基因的表达。结果：低氧组小鼠RVSP、RV/（LV+S）显著高于常氧组（P<0.05）,血浆中HDL含量及HDL/LDL比值较常氧组显著降低（P<0.05）,肝组织中LDLR、SR-B1基因表达较常氧组显著下调（P<0.05）;RVSP与HDL/LDL比值及LDLR、SR-B1基因表达呈显著负相关（P<0.05）。结论：脂质代谢异常参与小鼠低氧性肺动脉高压的形成。