电离辐射诱导DNA链断裂的动力学研究

通过测试γ射线辐照下超螺旋ｐＢＲ３２２ ＤＮＡ分子单链断裂（ＳＳＢ）,双链剂量效应,得到ＳＳＢ、αＤＳＢ产额与ＤＮＡ现含一定浓度甘露醇的ＤＮＡ溶液体系中,Ｇ（ＳＳＢ）、Ｇ（αＤＳＢ）的例数与ｃ（ＤＮＡ）的倒数成线性关系,并以二级动力学描述了ＤＮＡ和甘露醇分子对．ＯＨ的竞争反应,得到．ＯＨ引起ＳＳαＤＳＢ的速率常数及其效率。     

γ辐射诱导质粒DNA单链断裂的反向氧效应

以凝胶电泳法研究了γ辐射引起质粒ＤＮＡ单链断裂（ＳＳＢ）的氧效应,发现含自由基清除剂－甘露醇的ＤＮＡ溶液在Ｎ２饱和条件下的ＳＳＢ产额大于空气饱和时的产额,使得Ｓ析氧增比（ＯＥＲ）小于１,即ＤＮＡ之ＳＳＢ存在反向氧效应,同时,Ｇ（ＳＳＢ）及其氧增比均随甘露醇浓度的增大而减小。     

.OH在博莱霉素A5介导的DNA断链反应中的作用

利用ＥＳＲ技术研究了博莱霉素Ａ５（ＢＬＭＡ５）、Ｆｅ＾２＋,Ｏ２体系中．ＯＨ的产生。并用ＴＢＡ反应检测了该系对ＤＮＡ的断链作用。以Ｆｅ＾３＋,Ｃｕ＾＋或Ｃｕ＾２＋替换Ｆｅ＾２＋,则体系中无．ＯＨ产生,同时也失去对ＤＮＡ的断链作用;一定浓匠．ＯＨ清除剂可完全清除．ＯＨ,地对ＤＮＡ断链影响甚微;还原剂可淬灭体系中的．ＯＨ,却能促进ＤＮＡ的断链反应;ＳＯＤ可清除体系中的．ＯＨ,失活的ＳＯＤ夫此功能,但两     

γ射线诱导DNA链断裂的机制研究

通过凝胶电泳扫描法测试了γ射线辐射下ｐＢＲ３２２超螺旋ＤＮＡ的单链断裂（ＳＳＢ）和双链断裂（ＤＳＢ）与辐射剂量的关系,验证了ＳＳＢ的产生方式,发现ＤＳＢ的形成与ＤＮＡ溶液中自由基清除效能σ有关：一方面,αＤＳＢ与βＤＳＢ的比随σ的增大而非线性增大;另一方面,σ＜１０８ｓ－１时,αＤＳＢ可由单自由基传递机制产生,而σ＞２×１０８ｓ－１时,αＤＳＢ则主要通过ＬＭＤＳ机制形成。另外,发现组成βＤＳＢ的两互补链上ＳＳＢ的距离ａ几乎不受自由基清除效能的影响。     

博莱霉素A_5、Fe~（2＋）、O_2混合的化学发光研究

利用超弱发光仪测得博莱霉素Ａ５（ＢＬＭＡ５）、Ｆｅ２＋、Ｏ２混合物有微弱化学发光,最大发射波长约为５９０ｎｍ;发光强度随ＢＬＭＡ５或Ｆｅ２＋浓度增大而增强;·ＯＨ清除剂甘露醇对发光无影响;Ｃｕ２＋、ＥＤＴＡ、ＤＮＡ对化学发光均有不同程度的抑制作用。上述结果说明：ＢＬＭＡ５与Ｆｅ２＋、Ｏ２混合可形成某种激发态复合物,并显示该激发态的形成与·ＯＨ无关,提示该激发态复合物可能是ＢＬＭＡ５降解ＤＮＡ的启动因子。     

亚硒酸钠诱发的晶状体上皮细胞DNA损伤及修复

观察了亚硒酸钠（Ｎａ２ＳｅＯ３）在体外作用于大鼠晶状体上皮细胞（ＲＬＥｃｅｌｌｓ）而造成的ＤＮＡ单链断裂（ｓｉｎｇｌｅｓｔｒａｎｄｂｒｅａｋｓ,ＳＳＢ）,并对其ＤＮＡ损伤、修复动力学做了初步研究．发现ＳＳＢ严重程度与亚硒酸钠的浓度呈线性相关,其ＳＳＢ重接修复约在３０～６０ｍｉｎ内完成．还作了有关非程序ＤＮＡ合成（ＵＤＳ）的检测,发现与ＳＳＢ相比,ＵＤＳ发生迟且持续时间更长,提示Ｎａ２ＳｅＯ３可能在体外对大鼠晶状体上皮细胞除造成ＳＳＢ以外,还可能造成其它种类的ＤＮＡ损伤．     

亚硒酸钠诱发的晶状体上皮细胞DNA损伤及修复

观察了亚硒酸钠（Ｎａ２ＳｅＯ３）在体外作用于大鼠晶状体上皮细胞（ＲＬＥ ｃｅｌｌｓ）而造成的ＤＮＡ单链断裂（ＳＳＢ）,并对其ＤＮＡ损伤、修复动力学做了初步研究。发现ＳＳＢ严重程度与亚硒酸钠的浓度呈线性相关,其ＳＳＢ重接修复约在３０￣６０ｍｉｎ内完成,还作了有关非程序ＤＮＡ合居（ＵＤＳ）的检测,发现与ＳＳＢ相比,ＵＤＳ发生迟且持续时间更长,提示Ｎａ２ＳｅＯ３可能在体外对大鼠晶状体上皮细胞除造成ＳＳＢ     

NNK诱发BEP2D细胞产生活性氧及其对DNA的损伤

通过测定细胞内和细胞上清中活性氧（ｒｅａｃｔｉｖｅ ｏｘｙｇｅｎ ｓｐｅｃｉｅｓ,ＲＯＳ）水平,以及ＤＮＡ 加合物——８－羟基脱氧鸟嘌呤核苷（８－ｈｙｄｒｏｘｙｄｅｏｘｙｇｕａｎｏｓｉｎｅ,ＯＨ８ｄＧ）含量,对烟草特异亚硝胺类化合物４－甲基亚硝胺－１（３－吡啶基）－１－丁酮（４－（ｍ ｅｔｈｙｌｎｉｔｒｏｓａｍ ｉｎｏ）－１－（３－ｐｙｒｉｄｙｌ）－１－ｂｕｔａｎｏｎｅ,ＮＮＫ）诱发人乳头状病毒永生化的人支气管上皮细胞（ｈｕｍ ａｎ ｐａｐｉｌｌｏｍ ａｖｉｒｕｓ－ｉｍ ｍ ｏｒｔａｌｉｚｅｄ ｈｕｍ ａｎｂｒｏｎｃｈｉａｌｅｐｉｔｈｅｌｉａｌｃｅｌｌｌｉｎｅ,ＢＥＰ２Ｄ）产生的ＲＯＳ及其对ＤＮＡ 的氧化损伤进行研究,并观察纳米硒的保护作用．结果表明,ＢＥＰ２Ｄ 细胞经不同浓度的ＮＮＫ 作用后,细胞内和细胞上清中ＲＯＳ以及ＯＨ８ｄＧ含量均显著增加,并有较好的剂量效应关系．１ μｍ ｏｌ·Ｌ－ １纳米硒（ｎａｎｏｓｅｌｅｎｕｉｍ ,ＮＳ）能明显抑制ＮＮＫ 诱发ＢＥＰ２Ｄ细胞产生的ＲＯＳ及ＯＨ８ｄＧ 水平．揭示ＮＮＫ 能造成细胞的氧化损伤,而ＮＳ对ＮＮＫ 所致细胞的氧化损伤有保护作用．     

铜锌超氧物歧化酶对几种羟自由基产生系统的影响

应用脱氧核糖降解法研究了ＣｕＺｎ－ＳＯＤ对几种·ＯＨ产生系统的作用机理．结果证明：ＳＯＤ对Ｆｅ（３＋）·Ｏ·Ｈ２Ｏ２系统中·ＯＨ的产生有明显的抑制作用,而失活ＳＯＤ或ＢＳＡ对它的抑制作用不大;在Ｆｅ（２＋）·Ｈ２Ｏ２和ＣＵ（２＋）·Ｈ２Ｏ２系统中,ＳＯＤ、失活ＳＯＤ和ＢＡＳ均能抑制·ＯＨ的产生;在Ｆｅ（２＋）·Ｏ系统中,ＳＯＤ对·ＯＨ产生作用不大,而失活ＳＯＤ或ＢＳＡ对它有明显的抑制作用．由此推测ＳＯＤ对·ＯＨ形成可能有三方面的影响：１．对Ｏ的清除作用,阻断Ｈａｂｅｒ－Ｗｅｉｓｓ反应;２．对金属离子的络合作用,降低·ＯＨ的产额;３．促进Ｈ２Ｏ２的积累,加快Ｆｅｎｔｏｎ反应．     

碳离子诱导的DNA双链断裂

ＤＮＡ双链断裂（ＤＳＢｓ）是电离辐射诱导的最重要的原发损伤,研究ＤＳＢｓ有利于揭示细胞辐射敏感性的机理。用倒转脉冲场凝胶电泳结合荧光扫描进行ＤＮＡ定量研究７５ＭｅＶ／ｕ１２Ｃ６＋对小鼠Ｂ１６黑色素瘤细胞ＤＳＢｓ的诱导,结果表明：ＤＳＢｓ产额约为０．７４ＤＳＢｓ／１００Ｍｂｐ／Ｇｙ;ＤＮＡ片段分布在两个区域。大片段区分子量约为１．４Ｍｂｐ～３．２Ｍｂｐ,分子量小于１．２Ｍｂｐ的为小片段区;并且随着剂量的增加,大片段区ＤＮＡ含量逐渐下降,而小片段区的ＤＮＡ含量显著增加。表明Ｂ１６ＤＮＡ分子上可能存在对重离子较为敏感的位点。     

H_2O_2－Fe~（3＋）所致人淋巴细胞DNA双链断裂损伤

采用脉冲电场凝胶电泳法检测Ｈ２Ｏ２－Ｆｅ（３＋）体系产生的ＯＨ对人淋巴细胞ＤＮＡ的双链断裂损伤．Ｈ２Ｏ２－Ｆｅ（３＋）浓度与ＤＮＡ双链断裂呈明显量效关系;随ＯＨ作用时间延长,细胞ＤＮＡ双链断裂加重;过氧化氢酶对ＯＨ损伤有明显抑制作用．脉冲电场凝胶电泳法可检测到的Ｈ２Ｏ２和ＦｅＣｌ３引起细胞ＤＮＡ双链断裂的最低浓度为０．３ｍｍｏｌ／Ｌ和６μｍｏｌ／Ｌ．     

H_2O_2与UV对DNA的损伤及DNA抗原性的影响

 Ｈ_２Ｏ_２与ＵＶ对ＤＮＡ的损伤及ＤＮＡ抗原性的影响梁俊峰（清华大学生物科学与技术系,北京１０００８４）杨彦,俞耀庭（南开大学分子生物学研究所,天津３０００７１）已经证明,系统性红斑狼疮（ＳＬＥ）患者血浆中高中滴度的抗双链ＤＮＡ（抗－ｄｓＤＮＡ）抗体同...     

人巨细胞病毒的分子克隆及其特异性DNA探针的制备

从人巨细胞病毒（ＨＣＭＶ）培养物中提取ＨＣＭＶ并抽提其ＤＮＡ,经限制性内切酶ＢａｍＨＩ完全消化后,与质粒ｐＢｌｕｅｓｃｒｉｐｔ－ＳＫ重组建立了ＨＣＭＶ的ＤＮＡ文库,从此文库。中随机筛选出两个重组质粒（ｐＣＭＶ－１和ｐＣＭＶ－２）,用ＢａｍＨＩ分析证明其中所含的病毒ＤＮＡ片段的大小分别为１．０ｋｂ和７．５ｋｂ,将这两种质粒大量扩增纯化后,用光生物素进行标记作为探针,证明其只与ＨＣＭＶ反应,与正常人细胞ＤＮＡ及Ⅰ型和Ⅱ型单纯疤疹病毒ＤＮＡ无交叉反应。     

叶绿体DNA及其在植物系统学研究中的应用

叶绿体ＤＮＡ及其在植物系统学研究中的应用黄瑶,李朝銮,马诚,吴乃虎（中国科学院成都生物研究所,成都,６１００４１）（中国科学院发育生物学研究所,北京,１０００８０）ＣＨＬＯＨＯＰＬＡＳＴＤＮＡＡＮＤＩＴＳＡＰＰＬＩＣＡＴＩＯＮＴＯＰＬＡＮＴＳＹＳＴＥ...     

SA脂质体介导DNA转染细胞的进一步研究

ＳＡ脂质体可高效介导ＤＮＡ转染ＣＶ－１细胞,本文进步研究表明,ＳＡ脂质体还可介导ＤＮＡ高效瞬时和稳定地转染ＣＨＯ和ＣＯＳ细胞。ＳＡ脂质体和ＤＮＡ形成复合物可保护ＤＡＮ不被核酸内切酶和ＤＮａｓｅＩ降解。荧光标记和细胞松驰素Ｂ抑制实验分别表明,ＳＡ脂质体易被细胞吸附,主要通过内吞传送ＤＮＡ进入细胞,而Ｌｉｐｏｆｅｃｔｉｎ主要通过融合传送ＤＮＡ进细胞。     

天然抗氧化剂丹参酮Ⅱ—A对肝细胞脂质过氧化产物与DNA相互作用的影响

［３Ｈ］花生四烯酸标记的肝细胞,经ＦｅＣｌ２－ＤＴＰＡ启动脂质过氧化后,细胞ＤＮＡ出现放射性,并随保温时间增加而逐渐增高,表明在细胞内脂质过氧化产物与ＤＮＡ发生相互作用,生成了一种ＤＮＡ加成物,经测定它具有特征荧光光谱,显示较低的增色效应和Ｔｍ值。用高度敏度荧光图象显微镜直接观察发现丹参酮Ⅱ－Ａ经细胞摄取后主要滞留在细胞膜与胞浆中。它能有效地抑制细胞脂质过氧化,减少脂质－ＤＮＡ加成物的产生,并阻止了细胞存活率和Ｏ６甲基鸟嘌呤转移酶活性的降低,其抑制率与ＶｉｔＥ,ＢＨＴ相近,但显著高于ＮａＮ３,甘露醇和ＳＯＤ。上述结果提示丹参酮Ⅱ－Ａ是一种新的有效的细胞内脂质过氧化产物与ＤＮＡ相互作用的抑制剂。它对ＤＮＡ的保护作用可能是通过清除脂类自由基而阻断脂质过氧化的链式反应,抑制ＤＮＡ加成物的生成,从而减少了细胞毒性。     

血管活性肠肽对兔支气管上皮细胞抗臭氧损伤的保护作用

用支气管刷洗法收集新西兰兔支气管上皮细胞（ＢＥＣ）,以臭氧（Ｏ３）攻击培养的ＢＥＣ,建立细胞损伤模型。测定ＢＥＣ的３Ｈ释放率计算Ｏ３的细胞毒指数（ＣＩ）、测定细胞内丙二醛（ＭＤＡ）的含量反映细胞氧化性损伤的程度,测定细胞内过氧化氢酶（ＣＡＴ）活性及还原型和氧化型谷胱甘肽（ＧＳＨ和ＧＳＳＧ）的含量反映细胞抗氧化能力。观察血管活性肠肽（ＶＩＰ）预处理对ＢＥＣ的细胞保护作用并初步探讨其保护机制。观察到：ＢＥＣ的３Ｈ释放率与Ｏ３暴露时间成正比;Ｏ３暴露２ｈ使ＭＤＡ含量和ＧＳＳＧ含量明显增加,ＧＳＨ减少;ＶＩＰ预处理呈剂量依赖性降低Ｏ３暴露的ＣＩ值、降低ＭＤＡ和ＧＳＳＧ含量、增加ＧＳＨ及ＧＳＨ／ＧＳＳＧ比值、增加ＣＡＴ活性,显示出细胞保护效应;ＶＩＰ的保护效应可被放线菌素Ｄ（Ａ－Ｄ）或蛋白激酶Ｃ阻断剂Ｈ７部分取消。结果表明：Ｏ３暴露会导致ＢＥＣ损伤,ＶＩＰ可通过增强ＢＥＣ的抗氧化能力而保护ＢＥＣ,ＶＩＰ的信号在细胞内的转导途径与基因转录及依赖ＰＫＣ的酶蛋白磷酸化有关。     

纤维二糖脱氢酶生成羟自由基和还原各种自由基的研究

利用电子顺磁共振（ＥＳＲ）技术和硫代巴比妥酸（ＴＢＡ）反应研究了纤维二糖脱氢酶（ＣＤＨ）生成·ＯＨ和还原各种自由基的能力．以纤维二糖为电子供体时,ＣＤＨ可以生成·ＯＨ．·ＯＨ生成量与ＣＤＨ、Ｆｅ３＋和Ｏ２的浓度有关．加入过氧化氢酶可使·ＯＨ的生成明显减少．ＣＤＨ可以还原自旋加合物［ＰＢＮ－ＯＨ］·、氮氧自由基和天然木素分子中的自由基．结果表明,ＣＤＨ具有生成·ＯＨ和还原各种自由基的能力．对该酶在木质纤维素降解中的作用进行了探讨     

三种类型辐射对质粒超螺旋DNA损伤的研究

用ａｇａｒｏｓｅ电泳和图象处理技术比较了６０Ｃｏγ射线、ＵＶ及低能Ｎ＋离子处理ｐＵＣ１９ＤＮＡ超螺旋结构的损伤效应及若干自由基清除剂的保护效应。结果表明：（１）γ射线和ＵＶ照射干燥ＤＮＡ的损伤显著低于水溶液样品;（２）Ｎ＋离子注入后超螺旋ＤＮＡ的减少（ＳＣ％）与剂量呈良好线性关系,而γ射线和ＵＶ组的ＳＣ％随剂量升高呈指数下降;（３）干燥ＤＮＡγ辐照组的Ｄ３７值为８２０Ｇｙ,ＳＣ完全消失的剂量ＬＤ为３８１４Ｇｙ,ＬＤ／Ｄ３７＝４．６５;ＵＶ照射组的相应值分别为：１．６５Ｊ／ｃｍ２,７．６５Ｊ／ｃｍ２,４．６４;Ｎ＋离子组的相应值为：３．２×１０１５Ｎ＋／ｃｍ２,５．０×１０１５Ｎ＋／ｃｍ２和１．５６。虽然上述三种辐射的剂量单位不同,不能直接比较其相对生物学效应,但从ＬＤ与Ｄ３７的比值可反映ＤＮＡＳＣ破坏的程度和终点剂量（ＳＣ％＝０）的大小。从而看出,Ｎ＋离子（高ＬＥＴ辐射）比γ射线（低ＬＥＴ辐射）ＵＶ（非电离辐射）对ＤＮＡ损伤作用更强;（４）乙醇、甘露醇等自由基清除剂对电离辐射损伤有很强的保护作用,但对ＵＶ损伤未见明显的保护效应     

乙型肝炎免疫指标全阴的原发性肝细胞癌患者体内HBV—DNA的检测…

本文以聚合酶链式反应（ＰＣＲ）对３５例乙型肝炎免疫指标（ＨＢＶｍ）全阴性的原发性肝细胞癌（ＰＨＣ）患者血清,外周血单核细胞（ＰＢＭＣ）肝活检标本进行乙型肝炎病毒ＨＢＶ－ＤＮＡ检测,其检出率分别为３４．２９％,６０．００％,６８．５７％,说明一部分血清ＨＢＶｍ全阴性的ＰＨＣ患者血清并非无传染性,ＥＬＳＩＡ法具有一定局限性。ＰＢＭＣ内有相当的ＨＢＶ－ＤＮＡ存在,这对于研究ＰＨＣ患者体内ＨＢＶ的存在情况