抑制PI3K信号通路促进TRAIL诱导人乳腺癌细胞MCF-7凋亡

肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体（tumor necrosis factor-related apoptosis-inducing ligand, TRAIL）对癌细胞有独特的细胞毒性作用,而对正常细胞没有影响. 但乳腺癌细胞耐受TRAIL诱导凋亡.本研究探索磷脂酰肌醇-3激酶（phosphatidylinositol 3-kinase,PI3K）信号通路对人乳腺癌MCF-7细胞耐受TRAIL的影响. 采用MTT法、显微照相以及DAPI染色观察TRAIL对MCF-7细胞生长的抑制作用以及诱导细胞凋亡状况;流式细胞分析细胞凋亡的情况;激光共聚焦显微镜观察多聚ADP核糖多聚酶-1（poly(ADP-ribose) polymerase -1,PARP-1）的迁移和定位;Western印迹分析死亡受体、caspase-3/8、磷酸化的AKT［pAKT(Ser473)］、Src和PARP-1等蛋白质表达. 结果显示,小剂量TRAIL（< 80 nmol/L）和Ly294002（< 40μmol/L）对MCF-7细胞生长没有显著的抑制作用,但是大剂量TRAIL（160 nmol/L）和Ly294002（80 μmol/L）则能抑制MCF-7细胞生长;低剂量Ly294002协同TRAIL抑制MCF-7细胞生长,并诱导细胞凋亡;Ly294002和TRAIL共同作用能促进PARP-1从胞浆进入细胞核;蛋白质表达分析显示,MCF-7细胞均表达死亡受体DR4、DR5、诱骗受体DcR1和DcR2、以及caspase-8,但是不表达caspase-3;Ly294002和TRAIL共同作用也能抑制pAKT(Ser473)和Src的表达,并且导致PARP-1断裂. 本研究结果提示,抑制PI3K信号可增加MCF-7细胞对TRAIL诱导的敏感性;MCF-7细胞通过PI3K/AKT途径促进Src的表达耐受TRAIL的细胞毒性作用Ly294002联合TRAIL是一种新的药物组合方式治疗乳腺癌.     

脱氧核酶抑制Akt1基因对MCF-7乳腺癌细胞生长的影响

目的应用脱氧核酶抑制Akt1的表达,观察MCF-7乳腺癌细胞生长及凋亡情况。方法采用噻唑蓝比色法（MTT）检测脱氧核酶抑制MCF-7乳腺癌细胞增殖作用;DAPI染色法分析细胞凋亡形态学的变化;流式细胞术检测脱氧核酶对MCF-7乳腺癌细胞凋亡的影响;运用蛋白免疫印迹检测分析Akt1、pro—caspase-3、pro-caspase-9的变化。结果Aktl脱氧核酶对MCF-7乳腺癌细胞在体外的生长具有抑制作用;DRz1组的细胞早期凋亡率显著高于未处理组;荧光显微镜下可见典型的凋亡形态学变化;脱氧核酶作用后,免疫印迹检测Aktl蛋白表达降低,pro—caspase-3、9均被活化。结论AktlDRzl能有效下调MCF-7乳腺癌细胞Akt1的蛋白表达水平,抑制MCF-7细胞的生长,且凋亡途径可能依赖于caspase-3、9的相关的线粒体凋亡途径。     

SmacN7诱导乳腺癌细胞MDA-MB-157凋亡的作用及其机制*

目的:探讨SmacN7对乳腺癌细胞MDA-MB-157凋亡的作用及机制。方法:将0-20 μmol/L的SmacN7应用于乳腺癌细胞MDA-MB-157,用MTS法检测细胞增殖活性,流式细胞仪检测细胞凋亡、细胞周期,hoechst33342染色观察细胞核型变化,JC-1染色检测线粒体膜电位,LDH释放实验检测药物细胞毒性,qPCR检测各基因转录水平,并通过抑瘤实验证实该药抑制乳腺癌增殖的作用。结果:应用SmacN7后,乳腺癌细胞MDA-MB-157增殖抑制率和细胞凋亡率均增加(P＜0.01),核型发生显著变化,细胞线粒体膜电位降低,LDH释放量增加,并上调TRAIL、DR4、DR5、p53、PARP-1、Bax、Bid、BAK、caspase-3、caspase-8、caspase-9基因的转录水平(P＜0.01),下调 Ras、PI3K、AKT、mTOR、Bcl2、Bcl-xL、MCL-1、Survivin、cIAP-1、cIAP-2基因的转录水平(P＜0.01)。结论:SmacN7可通过TRAIL介导的死亡受体途径和线粒体介导的内源性凋亡途径诱导乳腺癌细胞MDA-MB-157凋亡,发挥抗乳腺癌的作用。     

抑制c-FLIP基因促进TRAIL诱导的乳腺癌细胞凋亡(英文)

目的:探讨抑制c-FLIP的表达对TRAIL诱导乳腺癌细胞MCF-7凋亡的影响。方法:重组腺病毒Ad-c-FLIP-siRNA和Ad-sTRAIL单独及联合感染对TRAIL耐药的乳腺癌细胞MCF-7,应用实时荧光定量聚合酶链反应(Real-time PCR)检测病毒感染后各组细胞内c-FLIP和TRAIL的mRNA表达变化;MTT法和结晶紫染色法检测MCF-7细胞活性,Hoechst 33258荧光染色检测各组细胞的凋亡情况。结果:与阴性对照组比较,c-FLIP-siRNA组和c-FLIP-siRNA+TRAIL组c-FLIP的mRNA相对表达量分别是(0.32±0.16)和(0.39±0.48)倍;TRAIL组和c-FLIP-siRNA+TRAIL组TRAIL的mRNA相对表达量分别是(96.21±1.54)和(87.33±1.66)倍;TRAIL组、c-FLIP-siRNA组及c-FLIP-siRNA+TRAIL组的抑制率(%)分别为(60.27±1.25)、(11.34±1.74)及(74.91±2.12)。对比阴性对照组的凋亡率(3.12±1.54),TRAIL组(12.79±2.46)和c-FLIP-siRNA+TRAIL组(25.50±3.17)组的凋亡率明显增高(P0.05),c-FLIP-siRNA组(6.85±2.82)的凋亡率变化不明显,差异无统计学意义(P0.05)。结论:siRNA抑制c-FLIP基因的表达能显著促进TRAIL对乳腺癌细胞MCF-7凋亡的诱导作用。     

二烯丙基二硫诱导人乳腺癌MCF-7细胞凋亡及机制的研究

目的:研究二烯丙基二硫(DADS)诱导人乳腺癌MCF-7细胞凋亡及其分子机制。方法:AO／EB荧光染色法、流式细胞仪检测细胞凋亡率;Western blot法检测DADS对caspase-3剪切片断的影响,及对MAPKs通路相关蛋白,包括p-JNK、JNK表达的影响。结果:DADS对乳腺癌细胞株MCF-7生长具有明显的抑制作用,经AO／EB形态变化分析,可见明显的细胞凋亡特征;DADS处理MCF-7细胞6、12、24、48 h,流式细胞仪检测细胞的凋亡率分别为3．74％、9．22％、20.2％、42％,而对照组细胞的凋亡率仅为3．03％(P<0．05);不同浓度的DADS作用于MCF-7细胞24 h后,Western blot法检测发现caspase-3出现断裂片断,并随着浓度的增加断裂更明显。进一步研究发现,DADS处理MCF-7细胞后,JNK磷酸化水平明显升高。结论:DADS能诱导乳腺癌细胞株MCF-7细胞凋亡,JNK信号通路抑制可能是DADS诱导其调亡的分子机制之一。     

胃癌细胞TRAIL受体的表达与其对TRAIL敏感性的关系

目的:探讨胃癌细胞表面TRAIL受体表达水平及其与TRAIL敏感性的关系.方法:PI染色、流式细胞仪检测TRAIL诱导BGC-823及SGC-7901细胞的凋亡率,流式细胞仪检测细胞膜表面四种TRAIL受体-R1、R2、R3、R4的表达情况.结果:TRAIL诱导胃癌细胞凋亡具有剂量和时间依赖性,BGC-823较SGC-7901对TRAIL诱导的凋亡更敏感,TRAIL(100μg·L-1)作用24h的细胞凋亡率分别是59.9%、24.3%.死亡受体TRAIL-R1/DR4、TRAIL-R2/DR5在BGC-823细胞膜表面表达的阳性率高达97.87%和99.42%,而在SGC-7901分别为7.03%和95-31%,诱骗受体TRAIL-R3/DcR1、TRAIL-R4/DcR2在两株细胞膜表面极少表达.结论:胃癌细胞对TRAIL诱导凋亡的敏感性差异可能与细胞膜表面死亡受体有关,尤其与DR4的表达有关.     

抑制survivin表达对软骨多糖诱导乳腺癌细胞凋亡的增敏作用

目的:研究靶向抑制survivin表达对软骨多糖诱导乳腺癌MCF-7细胞凋亡的影响.方法:将survivin-siRNA转染乳腺癌MCF-7细胞.用定量PCR和Western-blotting检测转染后细胞内survivin基因表达水平,流式细胞仪和Hochest染色检测细胞凋亡的改变.结果:软骨多糖可抑制MCF-7细胞的生长,其生长抑制率与药物浓度和作用时间呈依赖关系;软骨多糖作用MCF-7细胞后,survivin表达降低;转染survivin-siRNA能促进软骨多糖诱导MCF-7细胞凋亡.结论:靶向抑制survivin表达对软骨多糖诱导乳腺癌细胞凋亡具有增敏作用.     

bFGF对乳腺癌细胞系MCF-7细胞增殖与凋亡的影响

目的观察碱性成纤维细胞生长因子（bFGF）对体外培养人乳腺癌MCF-7细胞增殖和凋亡的影响,初步探讨bFGF作用机制。方法在饥饿培养的MCF-7细胞中加入bFGF和PD98059处理,以MTT法、吖啶橙染色及流式细胞术观察细胞生长与凋亡情况;并用Western blot检测caspase-3蛋白含量。结果对照组细胞形态发生改变：核质固缩、有凋亡小体形成;细胞凋亡率较高;Western blot分析表明,caspase-3蛋白明显表达。bFGF处理后,细胞变饱满,凋亡现象减少;细胞增殖比明显增加;与对照组相比凋亡细胞比例下降,并诱导细胞进入S期;随着bFGF浓度增加,caspase-3蛋白表达水平降低,在一定范围内呈剂量依赖性。加入PD98059可抑制bFGF的这些作用。结论bFGF可以促进细胞增殖,加速人乳腺癌细胞系MCF-7细胞的细胞周期进程,抵抗无血清饥饿诱导的凋亡,其作用部分可能是通过Ras-Raf-ERK1/2途径介导的。     

病理性周期性张应力诱导人牙周膜细胞凋亡的机制研究

目的:阐明病理性周期性张应力诱导人牙周膜细胞凋亡的分子机制。方法:人牙周膜细胞取自健康前磨牙,经过3?5代传代,细胞受到20%牵张力,时间为6 h或24 h,通过用膜联蛋白异硫氰酸荧光素(V-FITC)和碘化丙啶(PI)结合流式细胞仪检测细胞凋亡,用Western Blot法研究caspase-3,cleaved caspase-3,116 kDa PARP-1和85 k Da PARP-1蛋白的表达变化。结果:人PDL细胞受到病理性周期性张应力时存在凋亡,并以一种时间依赖的方式增加。受到病理性周期性张应力后裂解的caspase-3和PARP蛋白随着时间增加,然而抑制caspase-3的活性却可以抑制细胞的凋亡,但并不能抑制由其他通路导致的凋亡。结论:病理性周期性张应力通过caspase-3/PARP途径诱导人牙周膜细胞的凋亡。     

PI3K/AKT 通路参与调控乳腺癌多药耐药和侵袭转移的研究

目的:探讨磷脂酰肌醇-3-激酶/丝苏氨酸蛋白激酶(phosphatidylinositol 3 kinase/serine-threonine kinase,PI3K/AKT)信号通路与乳腺癌多药耐药和侵袭转移的相关性。方法:以乳腺癌细胞系MCF-7为母本,持续低浓度加药诱导建立阿霉素(Adriamycin,ADR)耐药系MCF-7/ADR’。细胞免疫荧光检测两细胞系中磷酸化AKT(phosphorylated AKT,P-AKT)、P-糖蛋白(P-Glycoprotein,P-gp)、基质金属蛋白酶2(matrix metalloproteinase-2,MMP-2)的表达。PI3K抑制剂LY294002作用两系前后,Western Blot检测P-AKT、MMP-2、P-gp的表达改变及qRT-PCR检测MMP-2、MDR1的表达改变。结果:P-AKT、P-gp(MDR1)、MMP-2在MCF-7中为低表达或不表达,MCF-7/ADR’中为高表达。LY294002作用两系后,P-AKT、P-gp(MDR1)、MMP-2在MCF-7/ADR’中的表达明显减低(P<0.05),MCF-7无明显改变。结论:抑制PI3K/AKT信号通路可有效降低MCF-7/ADR’耐药和侵袭转移能力,PI3K/AKT通路是调控乳腺癌多药耐药和侵袭转移的重要信号通路之一。     

抑制c-FLIP基因促进TRAIL诱导的乳腺癌细胞凋亡

目的：探讨抑制c-FLIP的表达对TRAIL诱导乳腺癌细胞MCF-7凋亡的影响。方法：重组腺病毒Ad-c-FLIP-siRNA和Ad-sTRAIL单独及联合感染对TRAIL耐药的乳腺癌细胞MCF-7,应用实时荧光定量聚合酶链反应（Real-time PCR）检测病毒感染后各组细胞内c-FLIP和TRAIL的mRNA表达变化;MTT法和结晶紫染色法检测MCF-7细胞活性,Hoechst 33258荧光染色检测各组细胞的凋亡情况。结果：与阴性对照组比较,c-FLIP-siRNA组和c-FLIP-siRNA＋TRAIL组c-FLIP的mRNA相对表达量分别是（0.32±0.16）和（0.39±0.48）倍;TRAIL组和c-FLIP-siRNA＋TRAIL组TRAIL的mRNA相对表达量分别是（96.21±1.54）和（87.33±1.66）倍;TRAIL组、c-FLIP-siRNA组及c-FLIP-siRNA＋TRAIL组的抑制率（%）分别为（60.27±1.25）、（11.34±1.74）及（74.91±2.12）。对比阴性对照组的凋亡率（3.12±1.54）,TRAIL组（12.79±2.46）和c-FLIP-siRNA＋TRAIL组（25.50±3.17）组的凋亡率明显增高（P〈0.05）,c-FLIP-siRNA组（6.85±2.82）的凋亡率变化不明显,差异无统计学意义（P〉0.05）。结论：siRNA抑制c-FLIP基因的表达能显著促进TRAIL对乳腺癌细胞MCF-7凋亡的诱导作用。     

臭椿酮诱导人黑色素瘤A375细胞凋亡及其机制研究

为研究臭椿酮(Ailanthone,AIL)诱导人黑色素瘤A375细胞凋亡的作用及作用机制,以人黑色素瘤A375细胞为研究对象,采用MTT法测定AIL对人黑色素瘤A375细胞生长增殖的抑制作用。用倒置相差显微镜观察AIL对A375细胞形态的影响,用荧光倒置显微镜观察Hoechst33258染色后AIL对A375细胞核的影响,用AnnexinV-FITC/PI双染法检测AIL诱导A375细胞凋亡的作用,用分光光度法检测caspase-3和caspase-9的活性,Westernblot检测p-PI3Kβ(Ser1070),PI3Kβ,p-Akt(Ser473)和Akt蛋白表达水平的变化,接着用PI3K抑制剂LY294002进行干预,进一步验证AIL对PI3K/Akt信号通路及细胞凋亡的影响。实验结果表明,AIL能够明显抑制A375细胞增殖,使A375细胞数目变少、附着力和透光性减弱,AIL能够诱导A375细胞凋亡,使其细胞核染色质发生固缩并呈现高亮,且使A375细胞早期及晚期凋亡率均增加,AIL作用后能够使caspase-3和caspase-9活性增加,AIL能够抑制PI3K和Akt蛋白磷酸化,从而使PI3K/Akt信号通路失活。较AIL单独作用,AIL和LY294002共同作用后对PI3K和Akt蛋白磷酸化的抑制作用增强且诱导凋亡作用增加,进一步说明AIL通过失活PI3K/Akt信号通路来诱导A375细胞凋亡。     

选择性环氧化酶-2抑制剂对乳腺癌细胞的化疗增敏作用

目的:观察选择性环氧化酶-2(COX-2)的抑制剂塞来昔布对表柔比星抗乳腺癌MCF-7细胞增殖和诱导凋亡作用以及探讨其机制.方法:应用四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法分析塞来昔布联用表柔比星对MCF-7细胞的生长抑制作用,流式细胞术检测细胞的凋亡,western blotting检测凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax、caspase-3的表达.结果:10μmol/l的cxlecoxib和10μg/l表柔比星联用细胞抑制率和早期凋亡率均显著增高,并引起caspase-3上调及裂解激活,bcl-2下调,bax则变化不大.结论:塞来昔布对表柔比星抗乳腺癌MCF-7细胞有协同作用,其诱导凋亡与caspase-3激活和Bcl-2表达下调有关.     

甲基莲心碱抗乳腺癌 MCF-7细胞的研究

目的:观察甲基莲心碱对乳腺癌细胞系MCF-7增殖和凋亡的影响,并探讨其诱导乳腺癌细胞系MCF-7凋亡的可能作用机制。方法:采用体外培养人乳腺癌细胞系MCF-7,CCK-8实验检测不同浓度甲基莲心碱对MCF-7细胞增殖抑制作用;乳酸脱氢酶(LDH)试剂盒(微板法)检测细胞上清液LDH含量;流式细胞术分析甲基莲心碱对MCF-7细胞周期及凋亡的影响;实时定量PCR(RT-PCR)检测线粒体凋亡相关基因Bax和Bcl-2的表达水平。结果:CCK-8、LDH结果显示甲基莲心碱以时间、浓度依耐性的方式抑制乳腺癌MCF-7细胞的增殖及促进细胞毒性的增加;流式细胞术结果表明不同甲基莲心碱作用下MCF-7的平均凋亡率分别为(15.44±0.52)、(18.81±2.24)、(24.26±2.84)、(36.90±3.15)、(59.27±5.86),且使其周期阻滞于G0/G1期;RT-PCR检测结果证明甲基莲心碱可上调乳腺癌细胞中促凋亡基因Bax的表达,而下调抑制凋亡基因Bcl-2。结论:甲基莲心碱以时间和浓度依赖的方式抑制乳腺癌细胞增殖、细胞毒性增加,导致细胞周期于G0/G1阻滞并促进癌细胞凋亡。甲基莲心碱抗乳腺癌的可能作用机制是激活线粒体凋亡途径。     

RNA 干涉介导的Plk1 沉默对乳腺癌细胞恶性生物表型的影响

目的:研究乳腺癌细胞中丝/苏氨酸蛋白激酶Plk1基因表达下调后对其恶性生物表型的影响。方法:利用pSilencer4.1-CMVneo质粒,分别构建针对Plk1基因的RNA干涉载体(pSilencer4.1-shPlk1),利用脂质体Lipofectamine2000转染MCF-7细胞,G418筛选稳定的转染细胞系。半定量RT-PCR和Western blot分别检测Plk1基因mRNA和蛋白表达,MTT和克隆形成试验检测细胞增殖活性的变化,流式细胞仪分析细胞周期和凋亡的变化,最后分析MCF-7细胞对紫杉类药物(紫杉醇和多西他赛)化疗敏感性的变化。结果:成功筛选了稳定转染细胞系(MCF-7/shPlk1和MCF-7/shcontrol)。同MCF-7/shPlk1细胞相比,MCF-7/shPlk1细胞中Plk1基因mRNA和蛋白表达水平分别下调65.8%和74.4%(P<0.05)。同MCF-7/shcontrol,MCF-7/shPlk1细胞增殖速度显著抑制,到第5天时抑制率达到44.9±3.2%(P<0.05)。同时,MCF-7/shPlk1细胞的克隆形成能力显著降低(P<0.01)。流式细胞仪技术分析细胞周期结果表明:MCF-7/shPlk1细胞的G2/M期细胞比例显著增加了21.1±4.1%,而S期细胞比例则显著降低了(18.5±3.1%;P<0.05)。流式细胞仪技术分析细胞凋亡结果表明:MCF-7/shPlk1细胞的凋亡率约显著增加了13.1±2.3%(P<0.05)。同时还发现:MCF-7/shPlk1细胞中激活的caspase-3蛋白显著增加,Bcl-2蛋白显著降低,而Bax蛋白则显著增加。结论:RNA干涉载体能特异性下调乳腺癌细胞中Plk1基因的表达,从而抑制乳腺癌细胞的增殖和体外克隆形成能力,同时诱导乳腺癌细胞的G2/M期阻滞和细胞凋亡率显著增加。因此,靶向Plk1基因的生物治疗有望成为未来临床乳腺癌的一个重要的辅助治疗策略。     

左旋咪唑抑制乳腺癌细胞MCF-7生长的作用机制

左旋咪唑可作为乳腺癌治疗的辅助药物,然其抑制乳腺癌细胞MCF-7生长的作用机制仍未清楚。为探究左旋咪唑抑制乳腺癌细胞生长的分子机制,该研究通过CCK-8法检测左旋咪唑对MCF-7细胞活力的影响,细胞划痕检测细胞迁移变化,显微镜下观察细胞形态学变化,吖啶橙/溴化乙啶双荧光染色法(AO-EB)检测细胞凋亡,免疫印迹法(Western blot,WB)检测PI3K/Akt、Bcl-2/Bax、Caspase-9/3相对表达变化。结果显示,与对照组相比,加药组细胞增殖受到显著抑制,其效应与药物浓度和作用时间均呈正相关;与对照组相比,加药组细胞形态发生皱缩,趋于圆形,胞内出现大量空泡;细胞划痕结果显示,加药组细胞迁移能力受到显著抑制;AO-EB结果表明,加药组细胞凋亡小体增加,细胞凋亡率显著上升;免疫印迹法结果表明,与对照组相比,加药组PI3K/Akt、Bcl-2相对表达量显著下降(P0.01),Bax、Caspase-9、Caspase-3蛋白表达显著上升(P0.001)。结果表明,左旋咪唑可通过抑制PI3K/Akt、Bcl-2/Bax信号途径来抑制乳腺癌细胞MCF-7的增殖、迁移,从而促进细胞凋亡,抑制细胞的生长。     

木犀草素对表皮生长因子诱导的人乳腺癌细胞增殖的抑制作用及其机制（英文）北大核心CSCD

本研究的目的是探讨木犀草素体外抑制表皮生长因子(epidermal growth factor,EGF)诱导的乳腺癌细胞增殖的机制。MTT法检测了木犀草素对乳腺癌细胞MCF-7和MDA-MB-231增殖的影响以及木犀草素对EGF诱导的乳腺癌细胞MCF-7增殖的影响。Western blot法检测了木犀草素对EGF受体、磷脂酰肌醇3蛋白激酶(PI3K)/Akt、丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)/Erk1/2及转录活化因子3(STAT3)蛋白表达的影响。结果显示,木犀草素能显著抑制乳腺癌细胞MCF-7和MDA-MB-231的增殖,但对MCF-7细胞的影响更显著,因此本文后续实验以MCF-7为研究对象。进一步研究结果显示,木犀草素对EGF诱导的MCF-7细胞增殖也有显著的抑制作用,Western blot结果表明,木犀草素和EGFR通路阻断剂AG1478均能抑制EGF诱导的EGF受体和STAT3蛋白磷酸化水平,木犀草素、Akt通路抑制剂LY294002以及Erk1/2通路阻断剂PD98059均能显著抑制EGF诱导的Akt和Erk1/2蛋白磷酸化水。以上结果揭示,木犀草素能抑制人乳腺癌细胞EGF信号通路,其中PI3K/Akt、MAPK/Erk1/2、STAT3信号通路是其发挥作用的主要下游信号转导通路。本实验结果为将木犀草素开发成新型抗乳腺癌药物提供了理论依据。     

PPAR??激动剂罗格列酮对人乳腺癌细胞生长 抑制及诱导凋亡作用研究

目的:观察氧化酶体激活物增殖受体(PPARγ)激动剂罗格列酮(ROZ)在体外激活PPARγ后对MCF-7细胞的生长抑制及诱导凋亡作用。方法:MTT法检测ROZ对MCF-7细胞的生长抑制作用;集落形成实验观察ROZ对MCF-7细胞集落形成的影响;不同浓度ROZ作用72h,Hoechst33342染色观察MCF-7细胞的形态变化,流式细胞光度分析术(FCM)检测凋亡细胞百分率以及ROZ对细胞周期的影响;Western blot方法检测ROZ对MCF-7细胞Bcl-2、Caspase-3表达的影响。结果:ROZ可呈剂量依赖性抑制MCF-7细胞的生长及集落形成。ROZ浓度为6×10-5M和3×10-4M时则G1期细胞数明显增加,S期相应减少。Hoechst33342染色经ROZ处理的肿瘤细胞染色质呈颗粒状,且有凋亡小体出现。FCM检测结果显示,ROZ作用72h凋亡细胞数达22.05%。Western blot提示ROZ可抑制Bcl-2表达,促进Caspase3表达。结论:ROZ在体外可抑制MCF-7细胞的增殖并诱导其凋亡,这可能与其抑制Bcl-2表达、促进caspase3表达有关。提示ROZ有望成为乳腺癌治疗药或肿瘤治疗的辅助用药,PPARγ有潜力成为肿瘤治疗的新靶点。     

木犀草素对表皮生长因子诱导的人乳腺癌细胞增殖的抑制作用及其机制（英文）

本研究的目的是探讨木犀草素体外抑制表皮生长因子(epidermal growth factor,EGF)诱导的乳腺癌细胞增殖的机制。MTT法检测了木犀草素对乳腺癌细胞MCF-7和MDA-MB-231增殖的影响以及木犀草素对EGF诱导的乳腺癌细胞MCF-7增殖的影响。Western blot法检测了木犀草素对EGF受体、磷脂酰肌醇3蛋白激酶(PI3K)/Akt、丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)/Erk1/2及转录活化因子3(STAT3)蛋白表达的影响。结果显示,木犀草素能显著抑制乳腺癌细胞MCF-7和MDA-MB-231的增殖,但对MCF-7细胞的影响更显著,因此本文后续实验以MCF-7为研究对象。进一步研究结果显示,木犀草素对EGF诱导的MCF-7细胞增殖也有显著的抑制作用,Western blot结果表明,木犀草素和EGFR通路阻断剂AG1478均能抑制EGF诱导的EGF受体和STAT3蛋白磷酸化水平,木犀草素、Akt通路抑制剂LY294002以及Erk1/2通路阻断剂PD98059均能显著抑制EGF诱导的Akt和Erk1/2蛋白磷酸化水。以上结果揭示,木犀草素能抑制人乳腺癌细胞EGF信号通路,其中PI3K/Akt、MAPK/Erk1/2、STAT3信号通路是其发挥作用的主要下游信号转导通路。本实验结果为将木犀草素开发成新型抗乳腺癌药物提供了理论依据。     

紫丁香苷调控PI3K/Akt/mTOR信号通路诱导乳腺癌细胞凋亡的研究

目的 研究紫丁香苷的抗乳腺癌作用及分子机制，为紫丁香苷的临床应用提供理论依据。方法 MTT检测紫丁香苷对乳腺癌细胞增殖的抑制作用；台盼蓝、TUNEL和Annexin V-FITC/PI染色检测细胞的凋亡状况，Western bolt检测Caspase-3的活化情况，判断细胞凋亡是否发生；检测凋亡相关蛋白B淋巴细胞瘤2（Bcl-2）的表达，结合JC-1染色探讨紫丁香苷对线粒体凋亡途径的影响；运用PI3K激动剂Recilisib做对比，qRT-PCR和Western bolt检测紫丁香苷调控PI3K/Akt/mTOR通路诱导癌细胞凋亡的作用。结果 紫丁香苷对乳腺癌细胞的增殖具有时间和剂量依赖的抑制作用，能诱导癌细胞发生凋亡。进一步研究发现，紫丁香苷处理后，细胞内Caspase-3被激活，Bcl-2表达下降，线粒体膜电位明显丧失，PI3K、Akt和mTOR的mRNA与蛋白质水平表达无明显变化，但蛋白质磷酸化水平明显下降；Recilisib处理后部分抵消了紫丁香苷对乳腺癌细胞凋亡的作用。结论 紫丁香苷对乳腺癌细胞MDA-MB-231和MCF-7具有良好的抑制作用，其通过抑制PI3K/Akt/mTOR信号通路的活化来抑制细胞增殖并诱导细胞发生线粒体途径的凋亡。紫丁香苷是具有开发潜力的抗乳腺癌药物。