核酸定量检测试验应用于HIV-1感染实验室诊断的探讨

目的:探讨核酸定量检测在HIV-1感染实验室诊断中的应用。方法:选取145例第四代抗原/抗体联合诊断筛查试验为阳性反应的血浆样本,分别用Western印迹和HIV-1核酸定量方法进行检测,综合对比分析2种方法检测结果。结果:Western印迹检出阳性样本120例,不确定样本17例,阴性样本8例;HIV-1核酸定量试验检出结果大于检测限样本131例,其中包括12例Western印迹不确定样本、2例Western印迹阴性样本;有3例Western印迹阳性样本用HIV-1核酸定量检测试验未能检出。结论:核酸定量检测试验对于HIV-1感染阳性样本是一种有效的实验室诊断方法;对HIV-1核酸定量检测结果为"TND"的样本,建议加做Western印迹或结合其他补充试验结果进行综合诊断。     

一些新的艾滋病(AIDS)抗体试验可预测病程减少误诊

有些公司打算做一些可直接检测艾滋病(AIDS)病毒的试验,虽然在目前进行的对于检测AIDS病毒抗体的试验取得了一定进展。例如,Bio-Rad Laboratories公司(里士满,加利福尼亚州)已向美国食品及药物管理局提出一项以改进Western blot技术为基础的试验申请。据该公司报道,这项新试验(不同于目前一些试验)似乎可以区别那些有艾滋病或将发展成艾滋病以及哪些已发现有艾滋病但仍健康的人的体内的各种抗体类型之间的差异。     

1 例艾滋病合并皮肤结核分枝杆菌感染

病例介绍 患者男,60岁.2007年10月出现不明原因发热,伴有尿频、尿急,经抗感染及抗病毒治疗2个月后,疗效不明显.2007年12月10日患者接受人类免疫缺陷病毒(human immunodeficiency virus,HIV)抗体初筛试验,结果阳性,后经上海市疾病预防控制中心蛋白印迹(Western blot)法检测,确诊为HIV-1感染,为进一步治疗,以"艾滋病"(acquiredimmunodeficiency syndrome,AIDS)于2007年12月17日收入我院.     

巴斯德研究所证实第二种艾滋病毒并在乙型肝炎疫苗研制方面取得进展

巴斯德研究所(法国巴黎)的Luc Montagnier和他的同事证实,存在着第二种艾滋病毒。据他们报道,该病毒是在西部非洲的人体内发现的,能引起免疫缺陷综合症。现在,他们已在30例患者身上(其中17例出现十足的艾滋病症状,而4例出现与艾滋病相关的综合症)鉴定了对该病毒的抗体。从11例患者的淋巴细胞中得到了逆转录病毒的分离株,并且用DNA 探针进行了分析。所有的新病毒(HIV-2)都已被鉴定,而没有一株是原始的艾滋病毒(HIV-1)。这些结果实质上表明:HIV-2具有感染性并引起艾滋病;但尚未弄清 HIV-2的流行程度是怎样的,也不知道它是否有与 HIV-1一样的致病性。但几乎可以肯定,艾滋病     

埃德温·迈勒·萨瑟恩

核酸分子杂交和印迹技术已成为分子生物学研究的一项基本技术,包括检测DNA的Southern印迹、检测RNA的Northern印迹和检测蛋白质的Western印迹,这些技术在遗传病的基因诊断、基因组定量和定性分析、特异蛋白质检测、性别分析和亲子鉴定过程中发挥着极为重要的作用,这些技术的最初突破是由埃德温·迈勒·萨瑟恩(Edwin Mellor Southern)爵士于1975年完成的.     

从一名外国留学生检测出人免疫缺陷病毒(HIV-1)抗体

我们在开展艾滋病监测期间,应用酶联免疫吸附试验(HTLV-Ⅲ EIA,Abbott厂产)从817份血清标本中筛出三例人免疫缺陷病毒(HIV)抗体,EIA反复阳性(其OD值,760号>2.0,392号为0.747,554号为0.315)。再用间接免疫荧光(IFA)和蛋白印迹试验(Western Blot简称W.B)检测,发现除760号标本呈现IFA强阳性(1/80稀_释)和W.B呈现7条与HIV蛋白带型相应的抗体结合带外,其余2例IFA和W.B试验均为阴性,虽然554号标本在P24位置呈现一条弱沉淀线,但没有诊断意义。根据公认     

Innogenetics公司分离到第三种艾滋病毒

Innogenetics 公司和热带医学研究所(比利时,Antwerp)从两名非洲患者血液中分离到第三种艾滋病毒(HIV~(-3))。该病毒与最常见的 HIV-1和罕见的 HIV-2均不同。公司为了寻找新的艾滋病毒株,并以基因工程方法研制相应的病毒蛋白抗原而进行筛选工作。在此过程中发现了该病毒。早在1987年,Innogenetics 就推出一种能对当时已知的艾滋病毒进行快速抗原检测。现在,公司研究人员发现该法也能检测 HIV-3。Akzo(荷兰,Arnhem)的一家子公司 Organon Teknika 将此检测法投入市场。最近,Innogenetics 从一家日本公     

口腔HIV检测法获批准

经历了长期的等待,美国食品与药物管理局(FDA)终于批准了Epitope,Inc’s(Beaverton,OR)的OraSure口腔标本收集器,用于检测抗HIV-1抗体。以Epitope首次提出申请到获得批准,FDA的申批过程延续了三年六个月。该检测以这样的事实为基础:若受染患者的唾液中没有大量的AIDS病毒,则可检测到抗体。 收集样品时,患者需口含一块口香糖,并通过口香糖使收集垫贴于面颊内侧二分钟。然后将收集垫封于容器中并送至Epitope的实验室。研究人员用标准AIDS检测和Western印迹确证试验检测抗HIV的抗体。检测结果将向医院的同行报告,再由他们通知患者。Epitope人士说,这项新检测法毫无痛苦,侵害     

HIV-1Tat蛋白抑制DNA修复和增强细胞辐射敏感性

近年来临床研究发现,艾滋病合并肿瘤患者放疗后产生的正常组织和皮肤毒性反应明显高于普通肿瘤患者.本研究将探讨HIV-1Tat蛋白是否影响细胞对电离辐射敏感性及机理. 两个表达Tat蛋白的细胞系TT2和TE671-Tat均来源于人的横纹肌肉瘤细胞（TE671）并已转染了不同来源的tat基因.使用细胞辐射后克隆形成率检测辐射敏感性,RT-PCR和Western 印迹检测基因表达,彗星电泳和γ-H2AX位点检测DNA双链断裂和修复. TT2和TE671-Tat细胞的辐射敏感性与转染空载体及对照细胞相比明显增加.彗星电泳和γ-H2AX位点检测表明,在表达Tat蛋白的细胞中,辐射诱导DNA双链断裂的修复水平明显降低.通过RT-PCR和Western 印迹检测进一步证实,表达Tat蛋白的细胞中DNA修复蛋白DNA-PKcs的表达被抑制. HIV-1Tat蛋白抑制DNA-PKcs的表达,降低DNA双链断裂的修复,使细胞的电离辐射敏感性增高.本研究为了解AIDS合并肿瘤患者对放射治疗敏感性变化提供了重要信息.     

应用斑点金免疫渗滤试验快速同步检测抗HIV-1，HIV-2 IgG抗体

应用斑点金免疫渗滤试验(dotimmunogoldfiltrationassay,DIGFA)建立了一种同步快速检测四种抗HIV-1/2IgG抗体的HIV诊断试纸。通过基因工程技术在大肠杆菌中表达了5种HIV抗原蛋白片段(P24,GP41,GP36,GP120V3,GP120C)。这5种抗原蛋白首先被固定在硝酸纤维素膜上,然后滴加待测血清,其中的病毒抗体通过免疫反应与抗原结合,再加胶体金标记的葡萄球菌蛋白A(SPA),待其渗过膜片后,洗涤,即可形成肉眼可见的红色斑点。用已确证的21份HIV阳性血清(其中包括1份HIV-1标准阳性血清和1份HIV-2标准阳性血清)和30份阴性血清进行了试验,结果表明该快速检测方法与ELISA方法无显著差异。该检测方法不需任何仪器,仅凭肉眼即可判定结果,整个检测过程不超过5分钟。与传统的的ELISA法相比,具有方便快速,成本低廉,应用范围广等优点。同时,此HIV快速诊断试纸可以同步检测并区分针对HIV-1和HIV-2感染的不同检测标志物(抗P24、GP41、GP120和GP36抗体),这对提高快速检测的灵敏度和准确性,以及对判断HIV感染者是否临近或已进入AIDS期有着较高的应用价值。     

应用明胶颗粒凝集试验检测人免疫缺陷病病毒(HIV-1)抗体

明胶颗粒凝集试验是测定HIV-1抗体的新方法。本研究将明胶颗粒凝集试验与ELISA法、蛋白印迹法和间接免疫荧光试验做了比较,观察本方法的敏感性和特异性。共检测了195份来自法国和非洲象牙海岸的血清,凡是蛋白印迹法阳性的血清,明胶颗粒凝试验都是阳性。这表明本方法是特异和敏感的,方法简便,不需特殊仪器,省时,可用于HIV-1抗体的筛选,但多数蛋白印迹法可疑的血清,明胶颗粒试验均阴性。因此,对蛋白印迹法测出的可疑者应该用数种方法进行追踪检测。     

HIV-1包膜蛋白gp41优势抗原的构建及可溶性表达

目的:筛选1型人免疫缺陷病毒(HIV-1)中国流行株中包膜蛋白gp41的优势抗原片段,构建具有区域流行代表性的HIV-1 gp41重组抗原,为改进现有HIV-1初筛试剂盒中使用的同类抗原奠定基础。方法:利用免疫斑点杂交和生物信息学方法,从收集自重庆、广州、上海的区域代表性150份HIV-1感染者血清标本中筛选gp41抗原性强的候选样本,利用RT-PCR及巢式PCR方法扩增包含重要抗原表位决定蔟的gp41基因片段,与原核表达载体pQE30连接,转化大肠杆菌M15构建gp41重组抗原表达菌株,表达后经亲和层析纯化、SDS-PAGE和Western印迹鉴定。结果:兔源HRP标记的gp41多抗能识别标本中gp41抗原性差异,得到候选样本,扩增包含gp41主要抗原表位片段;构建了包含gp41抗原表达簇的重组原核表达质粒,表达、纯化后经His标签抗体Western印迹鉴定为阳性。结论:高纯度的重组优势gp41抗原的构建和鉴定,为进一步改进现有HIV初筛诊断奠定了基础。     

应用斑点金免疫渗滤试验快速同步检测抗HIV-1,HIV-2 IgG抗体

应用斑点金免疫渗滤试验(dotimmunogoldfiltration assay,DIGFA)建立了一种同步快速检测四种抗HIV-1/2IgG抗体的HIV诊断试纸.通过基因工程技术在大肠杆菌中表达了5种HIV抗原蛋白片段(P24,GP41,GP36,GP120V3,GP120C).这5种抗原蛋白首先被固定在硝酸纤维素膜上,然后滴加待测血清,其中的病毒抗体通过免疫反应与抗原结合,再加胶体金标记的葡萄球菌蛋白A(SPA),待其渗过膜片后,洗涤,即可形成肉眼可见的红色斑点.用已确证的21份HIV阳性血清(其中包括1份HIV-1标准阳性血清和1份HIV-2标准阳性血清)和30份阴性血清进行了试验,结果表明该快速检测方法与ELISA方法无显著差异.该检测方法不需任何仪器,仅凭肉眼即可判定结果,整个检测过程不超过5分钟.与传统的的ELISA法相比,具有方便快速,成本低廉,应用范围广等优点.同时,此HIV快速诊断试纸可以同步检测并区分针对HIV-1和HIV-2感染的不同检测标志物(抗P24、GP41、GP120和GP36抗体),这对提高快速检测的灵敏度和准确性,以及对判断HIV感染者是否临近或已进入AIDS期有着较高的应用价值.     

HIV-1广谱中和抗体筛选技术的研究进展

HIV-1广谱中和抗体(HIV-1 bNAbs)是一类可以中和大多数流行株的抗体。HIV-1 bNAbs的研究可以为抗艾滋病药物提供候选分子和为艾滋病疫苗设计提供指导,是评估艾滋病疫苗效果的重要指标之一。HIV-1 bNAbs可通过传统筛选技术获得,如杂交瘤技术、EBV转化和展示库技术等。近年来,随着单细胞克隆和分选技术的发展,HIV-1 bNAbs的筛选效率和抗体特异性显著提高。多项技术结合的筛选手段和新型筛选技术LIBRA-seq,以及生物信息学辅助的筛选技术将抗体序列和功能信息统一起来,为HIV-1 bNAbs筛选和疫苗设计提供技术支持。除了HIV-1,这些筛选技术和方法也可用于其他病毒bNAbs的筛选,为疫苗设计和抗病毒药物开发提供了有益启示。综述了广泛应用于HIV-1 bNAbs的筛选技术和最新进展,为后续HIV-1或其他病毒bNAbs的筛选提供参考。     

血友病患者血清中淋巴腺病病毒/人T细胞Ⅲ型病毒抗体检测

对浙江省1982～1984年注射了美国产浓缩Ⅶ因子制剂的18例血友病患者,用酶联免疫吸附法(ELTSA)检测了血清中淋巴腺病病毒/人T细胞Ⅲ型病毒(LAV/HTLV-Ⅲ)抗体,发现4例阳性,并经免疫荧光试验和Western印迹法证实。2例应用了国产浓缩Ⅷ因子者抗体阴性。一例从美国来华旅游死于艾滋病者,LAV/HTLV-Ⅲ抗体阳性。本研究证明,LAV/HTLVⅢ病毒巳通过美国生产的Ⅷ因子制剂传入中国。     

限制性显示技术制备HIV-1B亚型基因片段的研究

目前已知引起人类艾滋病(AIDS)的人类免疫缺陷病毒(HIV)有HIV-1和HIV-2两个型,其中在世界范围内流行的是HIV-1.该型已确定至少有A～J 11个亚型,而在我国则以B、C、E亚型为主[1].     

艾滋病治疗模型

试验动物感染HIV后不发病严重阻碍了艾滋病治疗和疫苗的开发,而现在情形发生了根本性变化。据美国旧金山加利福尼亚大学研究组报道,狒狒感染HIV-2后得了艾滋病。 该大学研究小组采用来自象牙海岸的单个HIV-2毒株感染五只狒狒,结果试验的所有五只狒狒均呈现HIV阳性反应。其中三只显示典型的艾滋病病态的免疫变化,包括CD4 T细胞显著减少,且通常在患艾滋病过程中又出现继发性疾病。因此,研究人员声称,这些狒狒是科研人员建立的第一个艾滋病灵长     

HIV-2 Gag蛋白的表达研究

HIV-2是引起艾滋病的主要病原之一,与HIV-1相比,其致病性弱,感染的潜伏期长,有的甚至不发展成艾滋病。但HIV-2的易感宿主较HIV-1广,除人和猩猩之外,HIV-2还能感染猴等灵长类动物,这将为艾滋病疫苗和实验动物模型的研究提供有利条件。 我们应用原核高效表达载体pBV220在大肠杆菌中分别表达了HIV-2gag全部和部分蛋白(去掉与pol重叠序列)。在此基础上我们又将gag全部和部分序列置于痘苗病毒P7.5和     

HIV-1 tat基因改造及其蛋白表达、纯化与抗体制备

目的:为了方便实验室工作中HIV-1B'/C亚型及C亚型Tat蛋白的检测,制备了相应的Tat蛋白及其抗体。方法:将我国HIV-1B'/C亚型流行株tat基因的第1个外显子和HIV-1C亚型tat基因的第2个外显子融合在一起,将密码子替换为大肠杆菌的优势密码子,通过合成引物、PCR拼接的方法,获得目的基因序列;在原核系统中与pET32a 载体中的His·Tag、Trx·Tag及S·Tag进行融合表达;目的蛋白经Ni 金属螯合层析柱纯化后,用于免疫家兔,制备多克隆抗体。结果:PCR拼接获得306bp的目的基因序列;在原核系统中融合表达得到相对分子质量约31000的融合蛋白,占菌体总蛋白的21%。纯化后的融合蛋白免疫家兔,制备了多克隆抗体,Western印迹结果显示,获得的多克隆抗体与HIV-1B'/C亚型的Tat蛋白反应良好;间接免疫荧光结果表明,获得的多克隆抗体与HIV-1B'/C亚型和C亚型的Tat蛋白都能产生特异性反应。结论:制备的多克隆抗体能够使用间接免疫荧光方法检测HIV-1C亚型的Tat蛋白,使用Western印迹方法和间接免疫荧光方法都能检测HIV-1B'/C亚型的Tat蛋白。     

一种拮抗HIV-1并靶向DC的融合基因的设计及表达鉴定

艾滋病病毒 (Human immunodeficiency virus,HIV) 通过与靶细胞膜的融合感染宿主细胞,研究表明阻断HIV与受体靶分子的结合可以阻止HIV进入宿主细胞,抑制HIV病毒的感染。设计合成了一个包含CD4和CCR5与HIV-1结合的主要功能结构区,及Flt3-L和Mip-3α分子的融合基因,构建了2个融合基因的真核表达载体pABK-CKR5-CD4/Flt3L-Mip3α (pABK-HIV-MF) 和pABK-CKR5-CD4 (pABK-HIV-MT),在人胚肾293细胞中进行了表达。RT-PCR、细胞免疫荧光技术、ELISA和Western blotting检测结果表明融合基因在真核细胞中获得了正确的表达,这为进一步研究其对于HIV-1的拮抗并靶向树突状细胞 (DC) 清除研究奠定了基础。