双拷贝人α型心钠素基因的组建及大肠杆菌分泌型克隆与表达

将单拷贝人α心钠素基因3′端用Ban Ⅱ酶解除去包括终止密码在内的36个碱基对,代之以人工合成的含Glu-Lys-Phe-Glu连接片段与另一单拷贝人α心钠素基因的5′端串连成编码60肽的双拷贝心钠素基因,克隆于大肠杆菌分泌型表达载体pIN-Ⅲ-OmpA_2质粒中,表达生成60肽的双拷贝人α型心钠素衍生物,在信号肽的作用下分泌至胞膜间质并自动切割为60肽的外源基因产物。分子量约8K的表达产物用分子筛或超滤膜分离后再经HPLC纯化,表达产物具有明显的心钠素放免活性和舒张血管活性。     

阿霉素肾病大鼠肌肉和静脉注射心钠素基因利尿作用的比较研究

为探讨心钠素基因经体细胞转移对阿霉素诱导的肾病动物泌尿功能的影响及其治疗肾病的潜力,采用肌肉或静脉内直接注射裸DNA的方法,将人心钠素基因的逆转录病毒载体分别导入阿霉素肾病动物体内,以期为其提供持续性的心钠素来源。结果发现,人心钠素基因经肌肉和静脉内直接注射这2 种途径导入后,均可使阿霉素肾病动物的尿量/体重比明显增加,有效利尿作用时间大于15d。试验期间,实验组肾病动物的体重明显增长,血浆中的心钠素浓度在基因转移5d 后明显升高,但动物尿中的K⁺和Na⁺浓度无明显变化。以上结果说明,心钠素基因经肌肉和静脉2 种途径导入均可明显改善肾病动物的泌尿功能,具有治疗肾病的潜力。     

诱导方式对P_L启动子控制下人工合成心钠素28肽基因转录动态变化的影响

本文用含有人工合成28肽心钠素基因质粒的大肠杆菌(TAP106-pYX40),分别进行温度诱导和丝裂霉素C诱导,提取菌体中的总RNA,与γ-~(32)P标记的心钠素基因片段进行RNA打点杂交,并通过测定杂交阳性信号的总灰度值(Totalgray value),建立了人心钠素基因特异mRNA相对定量方法,从而观察到温度诱导对P_L启动子控制下的心钠素基团转录发生得慢,特异的mRAN产量较低,但转录所持续的时间长,而丝裂霉素C诱导对P_L启动子控制下的心钠素基因转录发生得快,特异mRNA产量高,但持续的时间短。     

多串心钠素的纯化与活性测定

为获得纯化心钠素(ANP)单体,采用离子交换及疏水柱层析,纯化融合蛋白麦芽糖结合蛋白(MBP)-ANP和MBP-3ANP,用凝血因子Xa切割MBP-ANP后,经阳离子柱分离获得ANP单体.对ANP单体与BMP-3ANP进行生物学活性检测.1　材料与方法1.1　材料含心钠素多拷贝基因的重组表达质粒pMal-nANP...     

人α-心钠素全基因的化学合成

用固相亚磷酰胺法(solid-phase phosphoramidite method)合成了人α-心钠素(简称α-hANP)的全基因。合成的α-hANP基因全长为96bp,包括编码α-hANP的结构基因、基因5＇端的谷氨酸(作为表达产物用内肽酶Glu-C专一裂解的位点)密码子GAA、基因3＇端的终止信号TGA及基因两端的接头部分。基因分7个寡聚核苷酸片段在DNA合成仪上合成,然后一次性酶促连接成为完整的α—hANP双链基因。化学合成的基因克隆到M13载体上,经分子杂交鉴定筛选出的α-hANP基因克隆株,用双脱氧链终止法进行序列分析,证明核苷酸顺序正确。     

在大肠杆菌中表达可溶的多串心钠素

为获得大量的α心钠素,构建了含α心钠素多拷贝基因的重组表达载体ｐＭａｌ－ｎＡＮＰ．经ＩＰＴＧ诱导后,在Ｅ．ｃｏｌｉＪＭ１０９中稳定表达融合蛋白．优化诱导条件后,重组蛋白主要以可溶形式存在．利用ａｍｙｌｏｓｅ亲和柱初步纯化后的融合蛋白具有较好的生物学活性     

内皮素和心钠素生物学作用的相互影响

高剂量内皮素可直接刺激心房肌释放心钠素,低剂量则反之;心钠素对内皮素合成与释放的影响具有组织特异性,其抑制血管内皮细胞释放内皮素,刺激甲状旁腺细胞合成释放内到素。心钠素主要通过钙拮抗机制抑制内皮素的生物学效应。内皮素亦拮抗心钠素的、肾和内分泌效应。     

心功能不全患者血浆心钠素测定的临床意义

本文观察了40例心脏病心功能不全患者的心钠素测定情况。心功能不全患者的血浆心钠素含量明显高于对照组,心功能不全越严重,血浆心钠素水平越高,且随着心功能的好转,血浆心钠素水平逐渐降低。因此作者认为血浆心钠素的测定是反映心功能不全的一种简便可靠的指标之一。     

人和大鼠脊髓内的心钠素样物质

应用特异的心钠素免疫金银染色和放射免疫测定法,证明在人和大鼠脊髓内亦存在有心钠素样物质。心钠素免疫金银染色发现在人脊髓各段均有心钠素免疫反应阳性的神经元广泛分布。这些神经元主要位于脊髓腹角,同时脊髓背角和侧角亦有少量分布。应用对照吸收试验,其心钠素免疫反应阳性颗粒便消失或明显减少。心钠素放射免疫测定发现,从大鼠颈髓到胸、腰、骶髓均有心钠素样物质存在,其中以骶髓含量最高,为21.9±4.48ng/g组织;腰髓次之,为3.78±0.74ng/g组织;颈、胸髓含量最低,分别为0.58±0.14和0.46±0.21ng/g组织。应用凝胶过滤和高压液相层析证明,大鼠脊髓中心钠素亦以多分子形式存在,但以28个氨基酸的大鼠心房利纳多肽(rANP)为主。此外,对在体大鼠脊髓蛛网膜下腔灌流研究发现,高钾去极化刺激可使大鼠脊髓心钠素样物质释放。     

心功能不全患者浆心钠素测定的临床意义

本文观察了４０例心脏病心功能不全患者的心钠素测定情况。心功能不全患者的血浆心钠素含量明显高于对照组,心功能不全越严重,血浆心钠素水平越高,且随站心功能的好转,血浆心钠素水平逐渐降低。因此作者认为浆心钠素的测定是反映心功能不全的一种简便可靠的提之定。     

基因定点诱变删除及天然α型心钠素的分泌型表达

用基因定点诱变技术,删除了pO_1α ANF表达质粒中的33对碱基,使人α型心钠素结构基因直接与大肠杆菌分泌型表达质粒pIN-Ⅲ-OmPA中的信号肽酶切位点编码区相连,构成天然人α型心钠素的表达质粒pANF,在IPTG诱导下表达28肽的天然人α型心钠素。纯化后的表达产物具有天然心钠素的放免活性和很强的舒张血管的生物活性。     

心钠素在强啡肽降压效应中的作用

前已报道,吗啡能刺激心钠素的释放。本文报告,静注强啡肽可引起大鼠血压的降低,这一作用可为纳洛酮和抗心钠素IgG预处理所阻断。静注强啡肽可引起大鼠血浆中心钠素水平升高和心房心钠素的下降。实验结果提示,强啡肽的降压效应可能由心房中心钠素释放所致。     

基因工程人α心钠素发酵研究

本研究采用的基因工程菌为酵母Y33：：YFD71－3,其基因型为α,his,1eu,ade,suc．摇瓶培养时心钠素的表达水平为l～2rag／L。在含有葡萄糖、YNB以及不同量腺嘌呤、组氨酸和亮氨酸的YG培养基中作摇瓶培养．当细胞的生长由腺嘌呤限制时,蛋白的分泌有明显增加·在YG培养基中加入5g／L的CAA后腺嘌呤成为限制性基质,培养基中腺嘌呤、YNB和亮氪酸用量对心钠素的表达有很大影响。在5L反应器中进行补料分批培养,流加葡萄糖、YNB、cAA、腺嘌呤、组氨酸和亮氨酸,心钠素的最高浓度达到24．8mg／L。     

心钠素前体分子内调控对心肌Na^＋—K^＋—ATP酶的作用

目的：研究利钾尿肽及心钠素前体分子内调控作用对心肌Ｎａ＋Ｋ＋ＡＴＰ酶的作用。方法：将大鼠心肌匀浆后,分别加入利钾尿肽、心钠素以及利钾尿肽＋心钠素,用比色法测定Ｎａ＋Ｋ＋ＡＴＰ酶活性。将大鼠心脏悬挂于Ｌａｎｇｅｎｄｏｒｆ灌流装置,分别以利钾尿肽、心钠素、利钾尿肽＋心钠素为灌流液,灌注心脏,用四道生理仪观测左心室内压、左心室收缩最大速率,左心室舒张最大速率,心率及冠脉流量。结果：心钠素虽然对Ｎａ＋Ｋ＋ＡＴＰ酶有抑制作用（抑制率２６．２％）,但是,与对照无显著性差异（Ｐ＞０．０５）。利钾尿肽显著抑制酶的活性（抑制率４６．５％,Ｐ＜０．０１）这种抑制作用可被心钠素抵消（抑制率１７．６％,Ｐ＞０．０５）。利钾尿肽可以增加左心室收缩和舒张最大速率以及左室内压,而这种强心作用可因心钠素的加入而消失或减弱。结论：利钾尿肽可以抑制心肌Ｎａ＋Ｋ＋ＡＴＰ酶的活性,产生强心作用,心钠素可以抵消以上作用。     

在大肠杆菌中分泌型表达人α心钠素衍生物

<正> 我们化学合成及克隆了α-ANF基因井将其重组于大肠杆菌分泌型表达质粒pIN-Ⅲ-OmpA进行表达;表达产物为N端多11肽的39肽α-ANF类似物,完全分泌至培养外液中;生物学活性测定表明,表达产物具有与天然心钠素相同的免疫活性及降压、利尿和舒张血管的生物活性。     

心脏分泌的激素—心钠素

心钠素（ＡＮＰ）是由心脏分泌的肽类激素，具有强烈的排钠利尿、降低血压等生理作用。在哺乳动物许多重要器官内均有心钠素的靶组织，心钠素与受体结合后，通过第二信使ｃＧＭＰ发挥生理作用。心钠素的研究具有十分重要的意义。     

自发性高血压大鼠脑动脉心钠素受体分布的计量学研究

用软脑膜铺片技术,兔疫组织化学方法及全自动图像分析仪对１７周龄自发性高血压大鼠脑血管床心钠素受体分布密度进行研究、结果表明,自发性高血压大鼠脑小动脉及细动脉壁上心钠素受体分布密度明显低于正常血压大鼠,Ｐ＜０．０１。此外,在细小动脉分叉部位心钠素受体分布密度增加,而自发性高血压大鼠中其分叉部位的受体密度明显低于正常血压大鼠。从实验结果显示,我们试用的软脑膜铺片技术显然弥补了组织切片中从血管横断面观察心钠素受体分布的局限性,清楚地展现了整个血管床心钠素受体分布特征。根据实验结果提示这些阻力性动脉心钠素受体密度减少与细小动脉舒血管反应减弱,外周阻力增加,血压升高有着明显的关系;尤其是对调节外周循环血量和外周阻力充当闸门作用的细小动脉分叉部位,心钠素受体密度降低这一特征在高血压发生机制中可能起着重要作用。     

心钠素在GABA调节下丘脑正中隆起LHRH释放的介导作用研究

已证明脑神经递质GABA可促进下丘脑正中隆起LHRH神经元末梢的释放功能,这一作用可能通过抑制某些抑制性神经递质或调质释放而实现。本研究旨在观察作为体内循环调节肽的心钠素在大鼠脑内的分布,对LHRH释放的影响及对GABA调节LHRH释放的中介作用。实验结果发现:(1)雄性大鼠不同脑区心钠素的含量不同,其中以下丘脑正中隆起组织含量最高;(2)不同浓度的心钠素(10~(-8)-10~(-6)mol/L)可显著抑制LHRH从下丘脑正中隆起释放,并呈现剂量反应关系。(3)GABA(10~(-6)mol/L组)可显著抑制心钠素的释放;GABA的这一抑制作用可被GABA受体拮抗剂荷包牡丹碱(Bicuculline)完全反转。上述结果提示心钠素参与调节下丘脑正中隆起(ME)LHRH神经元末梢的释放机能,它亦可能介导GABA对下丘脑正中隆起LHRH的调节作用。     

自发性高血压大鼠运动后心肌c-fos和心钠素基因表达的变化

目的 :研究运动对高血压肥大心脏心肌初级和次级应答基因 (immediateearlygeneandlateresponsegene)表达的影响。方法 :采用Northern分子杂交方法对游泳运动 10周后自发性高血压大鼠 (spontaneouslyhypertensiverats ,SHR)心肌初级应答基因c fosmRNA和次级应答基因心钠素 (atrialnatriureticfactor ,ANF)mRNA的表达进行比较研究。结果 :游泳SHR收缩压和舒张压分别比安静SHR降低 2 2 %和 2 5 % (P <0 .0 1) ,但左心室重 /体重比值两组间无明显差异 (P >0 .0 5 )。SHR最后一次游泳 2 4h后 ,心肌c fosmRNA表达与安静SHR相比无明显差异 ,但两组大鼠比SHR的正常血压对照鼠WistarKyoto(WKY)分别提高 83 %和 80 %。游泳SHR心肌ANFmRNA表达比安静SHR降低 3 2 % ,但仍比WKY大鼠高 2 9%。结论 :SHR经过游泳运动后 ,出现心室肌ANF基因表达降低与c fos基因表达增强的不一致现象可能是运动改善高血压肥大心脏的分子机制之一。     

抗稻瘟病体细胞突变体的抗性遗传分析

以ZA_(15)和ZB_(11)等2个致病小种对6个抗稻瘟病体细胞突变体进行了抗性遗传分析。结果表明,86-S1、88-86、88-42和88-40等4个突变体对ZA_15、ZB_(11)小种的抗性分别由1个显性基因控制,同时这2个抗性基因还存在紧密的连锁关系。88-127和88-145对ZA_15的抗病性受2个重复显性基因控制;而对ZB_(11)的抗性则分别受2个互补显性基因和1个显性基因控制。等位性测定表明,86-S1、88-42和8B-86等3个突变体具有的抗性基因是等位的,可能是Pi-(?)或与之等位的抗性基因。