斜带石斑鱼黏膜免疫系统结构的研究

对斜带石斑鱼皮肤、眼角膜、鳃、前肠及后肠等黏膜相关免疫组织结构进行了研究。通过组织切片的H E染色及透射电镜的观察 ,描述了黏膜组织的显微结构、主要免疫相关细胞在黏膜组织中的分布情况及各免疫细胞的超微结构。结果表明黏膜组织中存在杯状细胞、淋巴细胞、巨嗜细胞、单核细胞、嗜曙红细胞、嗜中性粒细胞等免疫相关细胞 ,具有在黏膜局部独立完成免疫应答的细胞基础。另外 ,还观察到了皮肤表皮对异物的吞噬过程。本文还就黏膜免疫组织的非特异和特异性免疫应答 ,以及黏膜免疫是否独立于系统免疫等问题进行了讨论。     

斜带石斑鱼淋巴器官个体发育的组织学

本文应用连续组织切片技术和组织学观察,对出膜后1～60天的斜带石斑鱼(Epinephelus coioides)各期仔鱼、稚鱼和幼鱼的淋巴器官组织进行了研究,描述了淋巴器官的个体发育过程和组织学结构特征。研究表明：实验水温为22．0～27．8℃时,孵化后第10天出现头肾原基。头肾原基由未分化的造血干细胞组成。随着鱼体的生长,头肾原基的造血干细胞很快分化成不同类型的细胞;头肾主要由网状内皮系统支持下的淋巴造血组织构成。第11天出现脾脏原基。脾脏原基由造血细胞组成,淋巴化速度相对较慢。脾脏在整个发育过程中,红细胞和类红细胞占优势,没有红髓和白髓之分。第13天出现胸腺原基。胸腺发育速度较快,是明显的淋巴器官。胸腺主要由胸腺细胞(淋巴细胞)和上皮细胞组成,外区和内区没有明显的界限,但很容易区分。胸腺外被单层的上皮细胞层与咽腔相隔,保持浅表的位置,并且在整个发育过程中,胸腺与头肾是独立分开的。免疫器官原基出现顺序是头肾、脾脏和胸腺;而免疫器官淋巴化的顺序是胸腺,头肾和脾脏。和其它硬骨鱼类一样,斜带石斑鱼在早期发育阶段,淋巴器官的发育较迟,出现相对滞后的现象[动物学报49(6)：819～828,2003]。     

斜带石斑鱼(♀)×鞍带石斑鱼(♂)受精细胞学的组织切片观察

人工诱导雌核发育二倍化的关键是掌握极体排出和卵裂的时机,掌握该规律最直接的方式即进行受精细胞学的研究。以鞍带石斑鱼(Epinephelus lanceolatus)为父本,斜带石斑鱼(Epinephelus coioides)为母本,通过人工授精获得受精卵,收集受精后不同时刻的卵子,经Smith′s液固定、石蜡包埋、切片、苏木精-伊红染色和显微组织观察。结果表明:受精后第30~60 s精子入卵;第3 min精子星光出现;第5 min卵子排出第二极体;第7~15 min雌雄原核相互靠近,并最终融合;第15 min以后合子核开始分裂。鞍带石斑鱼精子进入斜带石斑鱼卵子的时间与多数硬骨鱼类比较没有显著差别;但是,第二极体排出及第一次卵裂的时间较早。研究展示了斜带石斑鱼与鞍带石斑鱼杂交的受精细胞学的基本发育过程,并为后续的人工诱导石斑鱼雌核发育研究提供了理论依据。     

体重对斜带石斑鱼能量收支的影响

鱼类能量学是研究能量在鱼体内转换的学科,其核心问题之一是能量收支各组分之间的定量关系及其各种因子(如温度[1—5]、盐度[6]、体重[7—11]、性别[12]、摄食水平[13—18]、饵料种类[19,20]等)的影响作用。欧美等发达国家对鱼类能量学研究起步较早,迄今已经初步建立了多种鱼类的能量收支模式[21,22];国内在该领域较系统的研究起始于90年代初[23—25],主要局限于淡水鱼类,近年来又对海水鱼类进行了大量研究[26]。斜带石斑鱼(Epinephelus coioides)俗称青斑,为暖水性中下层鱼类,是广东省海水网箱养殖的主要品种之一。斜带石斑鱼分布于西太平洋的硫球群岛、澳大利亚以及贝劳和菲济群岛的东部,常栖息于大陆沿岸和大岛屿,但在河口和离岸100m深的水域中也可发现[27]。通过本项研究将有助于揭示海洋暖水性中下层鱼类的能量学特征。1材料与方法1·1材料来源与驯养实验用斜带石斑鱼,采自广东省大亚湾水产试验中心。实验用斜带石斑鱼经淡水浸泡10min后,置于室内容积0·5t桶内驯养,待摄食和生长趋于正常后,开始实验。驯化时间为30d。实验于2006年10—11月在广东省大亚湾水产试验中心进行。1...     

斜带石斑鱼PACAP的原核表达及活性分析

自1989年从绵羊下丘脑提取物发现垂体腺苷酸环化酶激活多肽（Pituitary adenylate cyclase activating polypeptide,PACAP）以来（Miyata et al．,1989）,已证明它能促进垂体激素释放,同时还具有神经递质、神经调质和神经营养等作用,使对PACAP的研究成为十分活跃的领域。PACAP属于血管活性肠肽（VIP）-胰高血糖素-生长激素释放因子-分泌素家族（Campbell and Scanes,1992）成员,已鉴别出包含27和38个氨基酸两种类型。对原索动物（McRory et al．,1997）、两栖类（蛙）（Alexandre et al．,2000）、爬行类（蜥蜴）（Pohland Wank,1998）、鸟类（鸡）（McRory et al．,1997）,啮齿类（鼠）（Ghatei et al．,1993）等脊椎动物PACAP的研究多集中在结构与进化方面,对功能了解甚少。     

斜带石斑鱼(♀)×鞍带石斑鱼(♂)杂交子代(青龙斑)消化系统的早期发育

本文研究斜带石斑鱼(Epinephelus coioides)(♀)×鞍带石斑鱼(E.lanceolatus)(♂)杂交子代(青龙斑)仔、稚、幼鱼的消化系统发育,描述了其消化器官发育过程和组织学结构特征,充实青龙斑生物学研究文库,为其发育生物学研究和苗种培育提供技术支撑。青龙斑苗种培育于2012年6~8月期间进行。水温为(30±1)℃,盐度为28±1。利用形态学和连续组织切片技术,对出膜后0~40日龄幼鱼的消化系统进行了观察和研究。消化系统发育可划分为内源性营养、混合营养和外源性营养3个阶段:0至3日龄为内源性营养阶段,初孵仔鱼消化管为一简单的直形管,卵黄囊大,椭圆形,口和肛门尚未与外界相通;口腔中出现鳃弓的雏形,3日龄仔鱼食道由2~3层的复层立方上皮细胞组成,形成较低的褶皱;胃与小肠和食道的分界明显,上皮由单层柱状细胞组成;肠道分化,肛门开通体外,开始摄食;肝细胞团和胰腺细胞团形成。4~5日龄为混合营养阶段,6日龄之后进入外源性营养阶段,卵黄囊已经完全被吸收,前、中、后肠和直肠区分明显,肠黏膜上皮中出现少量的杯状细胞,由肠腔面向深层依次可以分为黏膜层、黏膜下层和浆膜层,肌层不明显。至25日龄,消化系统的结构和功能已经较为完善。38日龄时,胃、幽门盲囊、肠以及直肠各段分界明显,黏膜褶皱高度为前肠中肠后肠;肌层厚度为后肠前肠中肠;消化道和消化腺组织结构与成鱼基本相同。青龙斑的消化系统发育和分化是与其生理功能的逐步完善同步的。     

斜带石斑鱼CD4基因克隆和组织表达分析

CD4 作为TCR的共受体可以提高TCR/抗原-MHC复合体的稳定性,辅助TCR识别抗原,并且参与T细胞活化.本研究从斜带石斑鱼Epinephelus coioides头肾中克隆得到全长2240 bp的CDM cDNA序列,该序列包含长1410 bp的ORF,编码469个氨基酸,预测蛋白分子包含一段信号肽,4个Ig样区...     

斜带石斑鱼仔鱼变态过程中甲状腺的发育变化

斜带石斑鱼(Epinephelus coioides)属鲈形目,科,石斑鱼属,为暖水性中下层鱼类,是我国南方沿海重要的经济养殖鱼类。长期以来,许多海水鱼仔稚鱼培育阶段的一大难题是成活率低1。目前斜带石斑鱼的大规模苗种培育仍未很好解决,仔鱼经历第二背鳍棘从生长到吸收的变态过程时死亡率很高。       

饲料精氨酸水平对斜带石斑鱼幼鱼生长和肠道形态的影响

正精氨酸作为一种鱼类生长发育所必需的碱性氨基酸,是机体合成蛋白质的重要成分[1],对肠细胞的增殖分化和维持细胞形态结构具有重要的保护作用[2]。对陆生动物如羊[2]、仔猪[3,4]和鼠[5]等的研究表明,日粮中添加精氨酸能显著提高肠道绒毛高度和隐窝深度,从而提高肠道消化吸收能力。目前,在鱼类的相关研究中,Cheng等[6]报道在饲料中添加精氨酸或谷氨酰胺能显著提高杂交条纹鲈(Motone chrysopsxMorone,saxatilis)和美国红鱼(Sciaenops ocellatus)[7]前肠和中肠的皱襞和微绒毛高度,增大肠道吸收面积。肠道是动物吸收利用精氨酸的     

斜带石斑鱼经葡萄糖灌喂后的代谢反应

糖类的主要生理功能是为动物机体提供能量,而且是比蛋白质和脂肪更为廉价的能源。相对于陆生恒温动物,鱼类尤其是肉食性鱼类对糖的利用能力低下,似乎先天性地具有糖尿病患者的某些生理特征。饲料中过高的糖水平会导致鱼类抗病力下降、生长速度减缓、死亡率增加等症状。鱼类解除葡萄糖负荷的能力有限从而表现     

SRIF及CSH对斜带石斑鱼脑垂体生长激素合成和分泌的调控

斜带石斑鱼 (Epinepheluscoioides)属于雌性先成熟、具有性转变的雌雄同体鱼类。生长激素释放抑制因子 (SRIF)是鱼类生长激素 (GH)分泌的主要抑制性调节剂 ,半胱胺 (CSH)可抑制SRIF的作用。本文采用静态孵育系统 ,应用RPA及RIA研究SRIF及CSH对斜带石斑鱼GHmRNA表达及GH分泌的调节。结果显示 ,SRIF能以剂量依存方式抑制斜带石斑鱼脑垂体释放GH ,时间越长作用越强。但SRIF作用 2 4h对GHmR NA水平的影响不显著 ,表明SRIF是斜带石斑鱼GH释放的抑制性调节剂 ,对GHmRNA的表达没有明显影响。较低剂量的CSH (10 -4- 10 -2 mol/L)使斜带石斑鱼的GH释放量增加 ,较高剂量 (10 -1mol/L)的CSH引起的GH增加趋势减缓 ,这种现象可能与较高剂量的CSH不仅抑制下丘脑SRIF的释放 ,同时影响GHRH的释放 ,使得GH的分泌量增幅下降有关 ;无论是较高剂量还是较低剂量的CSH都不能使GHmRNA的水平增加 ,表明CSH只能引起GH的释放量增加 ,不影响GH的合成。GnRH与CSH共同作用引起的GH释放量明显高于CSH单独作用的效应 ,其主要原因是由于GnRH促进GHmRNA的表达所致     

A set of 16 consensus primer pairs amplifying the complete mitochondrial genomes of orange-spotted grouper (Epinephelus coioides) and Hong Kong grouper (Epinephelus akaara)

Groupers are of considerable economic value; however, their classification and evolutionary relationships have long been hindered by the overwhelming number of species and lack of morphological specializations. Mitochondrial genome is a source of original markers that are potentially useful in the study of phylogeny and population genetics of groupers. We describe a set of 16 new primer pairs that allow PCR amplification of the entire mitochondrial genomes of orange-spotted grouper and Hong Kong grouper. This primer set has been defined for consensus over eight other grouper species, facilitating further studies on the molecular evolution and population genetics of groupers.     

Socially controlled male-to-female sex reversal in the protogynous orange-spotted grouper,Epinephelus coioides

Socially controlled sex change in teleosts is a dramatic example of adaptive reproductive plasticity. In many cases, the occurrence of sex change is triggered by a change in the social context, such as the disappearance of the dominant individual. The orange-spotted grouper Epinephelus coioides is a typical protogynous hermaphrodite fish that changes sex from female to male and remains male throughout its life span. In this study, male-to-female sex reversal in male Epinephelus coioides was successfully induced by social isolation. The body length and mass, gonadal change, serum sex steroid hormone levels and sex-related gene expression patterns during the process of socially controlled male-to-female sex reversal in E. coioides were systematically examined. This report investigates the physiological mechanisms of the socially controlled male-to-female sex reversal process in a protogynous hermaphrodite grouper species. The results enable us to study the physiological control of sex change, not only from female to male, but also from male to female.     

重组斜带石斑鱼生长激素及其抗血清在放射免疫测定中的应用

将斜带石斑鱼(Epinephelus coioides)生长激素成熟多肽cDNA序列克隆到质粒pRSET,与6x组氨酸等原核编码序列融合获得重组质粒pRGH6,转入大肠杆菌BL21(DE3),获得高效表达,表达量占细菌总蛋白的43％。免疫印迹证明表达产物为含斜带石斑鱼生长激素的融合蛋白,Ni^2 亲合层析柱纯化融合蛋白,以此为抗原免疫家兔制备特异性的抗血清。以纯化的重组生长激素和特异性的抗血清建立斜带石斑鱼生长激素的放射免疫测定法,该方法的灵敏度、特异性和重复性均达到测定血液生长激素的水平。研究了多巴胺的受体激动剂阿扑吗啡对静态孵育斜带石斑鱼脑垂体碎片释放生长激素的影响,结果表明,阿扑吗啡能以剂量依存方式促进斜带石斑鱼垂体释放生长激素。     

Molecular cloning and expression analysis of interferon-gamma-inducible-lysosomal thiol reductase gene in orange-spotted grouper, Epinephelus coioides

In mammals, interferon-gamma-inducible-lysosomal thiol reductase (GILT) has been demonstrated to play a key role in the processing and presentation of MHC class II-restricted antigen (Ag) by catalyzing disulfide bond reduction, thus unfolding native protein Ag and facilitating subsequent cleavage by proteases. In this study a cDNA containing the orange-spotted grouper GILT (OsgGILT) coding sequence has been cloned and its complete sequence determined. The full-length cDNA of OsgGILT gene is 1066 bp nucleotides (nt) encoding a protein of 260 amino acids (aa), with a putative molecular weight of 28.7 kDa. The deduced OsgGILT possesses the typical structural feature of mammalian GILT, including an active-site CXXC motif, a GILT signature sequence CQHGX(2)ECX(2)NX(4)C, and 10 conserved cysteines. The result of real-time PCR showed that OsgGILT mRNA was expressed in heart, liver, brain, gill, kidney and muscle and more highly expressed in spleen. The OsgGILT expression is obviously up-regulated in spleen and kidney after induction with LPS, these results suggest that OsgGILT may be involved in the immune response to LPS challenge in orange-spotted grouper.