RAPD技术及其在微生物学方面的应用

198 0年 ,Ｂｏｔｓｅｉｎ提出ＤＮＡ限制性片段长度多态性 (ＲＦＬＰ)可以作为遗传标记 ,从此开创了直接应用ＤＮＡ多态的新阶段。 80年代后 ,ＤＮＡ多聚酶链式反应 (ＰＣＲ)的发展 ,使直接扩增ＤＮＡ的多态性成为可能 ,并在此基础上产生了许多种新型分子标记 ,诸如扩增片段多态性 (ＡＬＦＲ)、串联重复序列(ＶＮＴＲ)、单链构型多态性 (ＰＣＲ ＳＳＣＰ)、序列特异扩增区域 (ＳＣＡＲ)、随机扩增多态性ＤＮＡ(ＲＡＰＤ)等。而ＲＡＰＤ是较为突出的一种。ＲＡＰＤ是由Ｗｉｌｌｉａｍｓ和Ｗｅｌｓｈ在 1 990年各自独立发现的一种ＤＮＡ多态检…     

粗山羊草随机扩增多态性DNA研究

用随机扩增多态性ＤＮＡ（ＲＡＰＤ）技术对原产地不同、分属于两个亚种的２９份粗山羊草进行了基因组ＤＮＡ多态性分析。３１个１０核苷酸引物在２９份粗山羊草中扩增到２９７条带,其中４５．７９％表现出多态性;在ｓｓｐ．ｅｕｓｑｕａｒｒｏｓａ（２０份）和ｓｓｐ．ｓｔｒａｎｇｕｌａｔａ（９份）中分别扩增到２８８和２６８条带,各有４７．２２％和２９．２９％表现出多态性,说明前者比后者的基因组ＤＮＡ多态性丰富。原产     

大豆灰斑病菌生理小种的RAPD标记

运用随机扩增多态性ＤＮＡ（ＲａｎｄｏｍａｍｐｌｉｆｉｅｄｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｃＤＮＡ,ＲＡＰＤ）技术对发生于中国东北的大豆灰斑病菌（Ｃｅｒｃｏｓｐｏｒｉｄｉｕｍｓｏｊｉｍｕｍ）的１０个生理小种进行基因组ＤＮＡ多态性分析,用１３个１０－核苷酸随机引物获得了１１１个ＲＡＰＤ标记,其中８６．５％具有多态性,通过聚类分析确定了供试小种间的亲缘关系,试验证明,ＲＡＰＤ技术分析大豆灰斑病菌遗传传变异可提供大量     

日本血吸虫中国大陆株基因多态性研究

对日本血吸虫中国大陆株湖南、湖北、江西、安徽、四川、云南隔离群以及一个实验室传代品系从基因水平进行了多态性研究。首先,在用ＰＣＲ－ＳＳＷＣＰ技术分析了２８Ｓ ｒＤＮＡ－Ｄ２高变区基础上,测定了该区安徽和云南隔离群的ＤＮＡ序列;其次,用ＰＣＲ获得了含有ＩＴＳ的ｒＤＮＡ片段,并对其进行了酶切点重复序列的多态性分析;最后,用ＲＡＰＤ技术分析了全基因组ＤＮＡ的多态性。结果表明,安徽与云南隔离群的２８Ｓ ｒ     

AFLP标记及在植物中的应用

ＡＦＬＰ是 1 992年由荷兰Ｋｅｙｇｅｎｅ公司Ｚａｂｅａｕ、Ｖｏｓ在ＰＣＲ和ＲＦＬＰ的基础上发展起来的一种检测ＤＮＡ多态性的新方法[1] ,并于1 993年获得欧洲专利局专利。与ＲＦＬＰ类似 ,ＡＦＬＰ也是通过限制性内切酶片段的不同长度检测ＤＮＡ多态性的一种ＤＮＡ分子标记技术。由于ＲＦＬＰ是以传统的Ｓｏｕｔｈｅｒｎ杂交为基础的 ,操作繁琐 ,对ＤＮＡ多态性的检出的灵敏度不高 ,在连锁图上有很多大的空间区。随着ＰＣＲ技术广泛应用 ,对分子标记技术的发展产生了巨大的推动作用。除了ＲＦＬＰ(限制性内切酶酶切片段长度多态性标记 …     

BALB／C小鼠的白内障突变与大片段小卫星DNA多态性的变化

为了探讨ＢＡＬＢ／Ｃ小鼠白内障突变品系与ＢＡＬＢ／Ｃ小鼠保种品系二者间小卫星ＤＮＡ多态性的变化,为进一步研究变异小卫星位点与白内障突变基因的关系最终找到导致这种白内障形成的基因奠定基础,采用α－＾３２Ｐ－ｄＣＴＰ标记的人类小卫星ＤＮＡ探针Ｍｙｏ,通过Ｓｏｕｔｈｅｒｎ杂交比较了正常ＢＡＬＢ／Ｃ和ＢＡＬＢ／Ｃ白内障突变体小卫星ＤＮＡ多态性的变化。结果：ＢＡＬＢ／Ｃ白内障小鼠种内ＤＮＡ多态性带纹分布高度     

白僵菌不同菌株DNA扩增图谱与其来源的相关性分析

采用ＲＡＰＤ技术对２８个不同来源的球孢白僵菌菌株的ＤＮＡ指纹图谱进行了测定。菌株间显示了ＤＮＡ图谱的多态性,但系统聚类分析结果表明,其多态性与菌株的原寄主和原采集地之间未表现出相关性。     

DNA分子标记技术及其在植物遗传多样性研究中的应用

本文阐述了ＤＮＡ限制性片段长度多态性、ＤＮＡ指纹图谱、单位点小卫星、单位点微卫星及随机扩增多态ＤＮＡ等主要的ＤＮＡ遗传标记技术的基本原理和方法．综述了不同ＤＮＡ标记的优缺点及其在植物遗传多样性研究中的应用前景．     

用gFM31探针进行谷子品种的指纹分析

用高度多态性探针ｇＦＭ３１对５９个谷子（ＳｅｔａｒｉａｉｔａｒｌｉｃａＢｅａｕｖ．）品种（包括地方品种、育成品种及品系）进行ＤＮＡ指纹分析,共鉴别出５８种类型,而黑谷和黑粒１５１６给出完全相同的带型,二者有可能是同一材料。通过对ｇＦＭ３１ＤＮＡ序列分析,未发现其中有小卫星ＤＮＡ和微卫星ＤＮＡ序列。该探针虽在谷子品种中显示很高的多态性,但与禾谷类的其他物种的ＤＮＡ杂交信号微弱,表现出较强的谷子基因组特异性。     

雌雄异株葡萄的性别鉴定研究

通过扫描电镜观察花粉的形态;分析叶片超氧化物歧化酶同工酶（ＳＯＤ）;ＲＡＰＤ分析基因组ＤＮＡ多态性,来鉴别葡萄的性别。结果表明：葡萄雌雄株的花粉形态存在着较大的差异;在本实验条件下葡萄雌雄株叶片ＳＯＤ同工酶谱带一致;一些引物的ＲＡＰＤ产物间存在着多态性,在葡萄雌雄株的基因组ＤＮＡ序列中存在着碱基排列顺序的差异。实验指出,花粉形态和基因组ＤＮＡ的多态性分析是进行性别鉴定的有效方法。     

微卫星DNA及其PCR技术的进展

微卫星ＤＮＡ是一种最常见的重复序列之一,具丰富的多态性,高度杂合性、重组率低等优点,是一种较好的ＤＮＡ多态标记。本着重介绍了微卫星ＤＮＡ的特点,其ＰＣＲ技术新进展及出现的问题。     

香菇亲本菌株及其杂交后代的RAPD分析

运用随机扩增多态性ＤＮＡ技术对源于两个香菇双核菌的孢子单核体,原生质体单核体及其杂交后代进行了基因组ＤＮＡ多态性分析,用９个随机引物共扩增出１１６条ＤＮＡ片段,其中８２．５％具有多态性,综合分析９个随机引物的扩增谱带,可将所有供试亲本单核本清楚地工,且单聚类分析的结果与其来源及遗传背景相吻合。此外,用两个双核亲本菌株的各４个不同酱 孢子单核体两两酱所得的所有杂交组合,也均可与双核亲本菌株明确地区分     

随机扩增多态性DNA技术在林业中的应用

１ＲＡＰＤ的原理随机扩增多态性ＤＮＡ（ＲａｎｄｏｍＡｍｐｌｉｆｉｅｄＰｏｌｙｍｏｒｐｈｉｃＤＮＡ,ＲＡＰＤ）系１９９０年由美国科学家采用ＰＣＲ技术发展起来的。在发现ＲＡＰＤ多态性的同时,也证明了ＲＡＰＤ标记的分离符合孟德尔独立分配规律,从而确立了ＲＡ...     

BALB／c等小鼠线粒体DNAD环区PCR—SSCP分析

用ＰＣＲ－ＳＳＣＰ方法分析ＢＡＬＢ／ｃ等７个近交系小鼠线粒体ＤＮＡ（ｍｔＤＮＡ）的多态性,探讨其遗传起源及亲缘关系,结果发现,这些小鼠ｍｔＤＮＡ的高变异性区,Ｄ－ｌｏｏｐ ５’及３’端的ＳＳＣＰ电泳带型完全相同,未发现多态性。表明ＴＡ２、６１５、Ｔ７３９、ＢＡＬＢ／ｃ、Ｃ３Ｈ、Ｃ５７ＢＬ／６Ｊ、ＤＢＡ／２等近交系小鼠的ｍｔＤＮＡ具有高度的同源性。     

野大豆群体DNA随机扩增产物的限制性内切酶消化

为了提高ＲＡＰＤ方法检测野大豆群体ＤＮＡ多态性的能力,随机扩增产物用限制性内切酶消化,通过聚丙烯酰胺凝胶电泳分离后用银染法检测酶切产物。结果发现：１．有的限制性内切酶能够消化野大豆群体ＤＮＡ的随机扩增产物,有的却不能。２．有的限制性内切酶消化无ＲＡＰＤ个体的扩增产物后能够产生多太性ＤＮＡ片段,有 内切酶不能产生。３．有的引物的无ＲＡＰＤ个体的扩增产物经限制性内切酶消化后能够产生多态性的ＤＮＡ片会面     

鱼类线粒体DNA多态性研究

介绍了鱼类线粒体ＤＮＡ多态性研究的方法及其在鱼类各学科领域中的广泛应用。     

影响籼稻DNA限制性片段长度多态性检测的因素分析

对窄叶青（籼稻）和京系１７（粳稻）的ＲＦＬＰ进行了系统分析。结果表明，某种酶多态性检测能力与同时检测到此多态性的其余酶的数目之间存在极显著的正相关（ｒ＝０．９６２＊＊）。由此推论，籼粳稻大部分ＲＦＬＰ可能来自大范围ＤＮＡ的结构变化而不是碱基取代。ｃＤＮＡ克隆虽然具有高度的保守性，但却具有比基因组克隆更高的多态性检测能力。在实验使用的探针范围内，探针长度和检测到多态性无相关性。由探针检测到的多态性位     

RAPD标记与作物改良

建立于ＤＮＡ基础之上的分子标记对于作物改良和多态性研究具有重要作用。     

末端标记限制性片段的基因组DNA指纹法

报道了分析基因组ＤＮＡ多态性的方法：未端标记限制性片段的基因组ＤＮＡ指纹法。通过此方法对莫桑比胸非鲫核ＤＮＡ进行了初步的分析。结果表明,此方法是一种简单,灵敏,稳定,可变换带复杂程度和有着广泛应用前景的一种鉴定生物基因型的方法。     

水稻的AFLP研究初报——反应条件的优化及对温敏核不育等位突变系的分析

通过对５４６０Ｓ和５４６０Ｆ这一对水稻等位突变系的ＡＦＬＰ分析,比较了ＡＦＬＰ与ＲＡＰＤ及ＲＦＬＰ检测ＤＮＡ多态性的相对效率。结果表明,这３种分子标记的ＤＮＡ多态性检出效率依次为ＡＦＬＰ＞ＲＡＰＤ＞ＲＦＬＰ;找出了水稻ＡＦＬＰ分析的最适反应条件;在这对等位突变系之间找到了一些多态性ＡＦＬＰ产物,已完成了对４个多态性ＡＦＬＰ产物的克隆,其中３个为单拷贝顺序;用这３个单拷贝克隆的混合物为探针,对作者自己构建的５４６０Ｓ水稻的ＢＡＣ库进行了筛选,获得了１２个阳性克隆,为今后ＢＡＣ库的筛选打下了基础。此外,对上述３种分子标记各自的优缺点及它们在ＤＮＡ多态性检测中的适用之处进行了分析探讨。