双歧杆菌的分子生物学研究进展

双歧杆菌是一种有重要生理功能的益生菌,近年逐渐成为微生态领域研究的热点,现对其生理、生化方面的研究已较成熟。随着研究深入,分子生物学又成为该菌的研究重点。本文从其基因组、质粒、分型鉴定、基因工程等方面,介绍双歧杆菌的分子生物学研究进展。     

双歧杆菌的分子生物学研究进展

双歧杆菌的分子生物学研究进展重庆医科大学检验系重庆６３００４６蓝景刚,胡宏近年来,对双歧杆菌的研究十分活跃。本文将就双歧杆菌的表面结构、酶、细胞外分泌物质、颗粒和核酸等分子水平上的研究进展及其与微生态制剂的关系作一综述,以期对双歧杆菌的基础和应用研究...     

双歧杆菌的研究进展

双歧杆菌是人类最早发现的生理性细菌之一。双歧杆菌是能在健康人肠道内定植的益生菌 ,母乳喂养的婴儿肠道内该菌占总菌群的 92 %以上 ,现在已确认双歧杆菌是人体健康的重要标志之一 [1 ] 。双歧杆菌在健康成年人及长寿老人的胃肠道内是优势菌 ,当机体患病或衰老时肠道双歧杆菌较正常人少 [2 ] ,其数量随年龄变化呈动态变化趋势 ,并与许多生理、病理现象密切相关 ,因此引起了医学领域内专家们的广泛关注。国内针对双歧杆菌曾多次召开微生态学术讨论会 ,在国际上 ,1990年在日本举行国际双歧杆菌专题讨论会 ,对双歧杆菌的生理、生化、分类、作…     

双歧杆菌分子生物学鉴定的现状与展望

自1899年法国TISSIER发现双歧杆菌（Bifidobacterium）以来,人们发现它是机体的正常菌群并对人类肩负昔许多重要的生理作用：参与机体的营养代谢,抗病原体黏附,调节肠道正常菌群,抗肿瘤,抗衰老,抗电离辐射,增强机体免疫力等。因为显示益生菌有益健康的科学证据越来越多,人们把它作为一种微生物营养添加菌添加到乳制品与果蔬汁中,     

双歧杆菌的耐药性与质粒

目的：研究双歧杆菌的耐药性与质粒的关系。方法 对１７株５种来自微生态制剂的双歧杆菌进行抗生素药敏试验和质粒检测,利用溴化乙锭消除其质粒;比较质粒消除前后耐药性的改变。结果１７株双歧杆菌对氨基糖式类和多肽类抗生素呈强抗性;除１株短型双歧杆菌Ｂ１５７存有２．７Ｋｂ和５．６Ｋｂ两种质粒外,其余菌株均未质粒,消除后持粒的Ｂ１５７株菌对抗生素的敏感性并未改变。结论 此１７株双歧杆菌的耐药性与质粒无直接相关性     

分子生物学技术在双歧杆菌研究应用中的进展

双歧杆菌对人体健康作用越来越受到人们的关注,国内外含有双歧杆菌的药品和保健食品也越来越多,建立简便、快速、准确的检测鉴定方法和研制出新的基因工程菌已成为当前的重要课题。菌种的选择需要微生物在肠道定植、无致病性和无副作用。在以往的实验中,通过细菌培养、生化反应特征是重要的鉴定方法,如细菌壁成分分析和发酵产物的鉴定,以及遗传特征如DNA的碱基比例和DNA的同源性分析来完成。     

双歧杆菌研究进展

自Ｈｅｎｒｉ　Ｔｉｓｓｉｅｒ博士［５］,发现双歧杆菌,并用做益生菌（Ｐｒｏｂｉｏｓｉｓ）［１６］之日起,双歧杆菌就造福人类,创造了细菌学史上的极其辉煌的篇章．百年来不怕开拓创新,达到世代荣盛不衰。目前在世界范围内,不管３株或多株产品或制剂不下百余种［２］,双歧杆菌、乳杆菌、糖化菌、丁酸菌、蜡样芽胞杆菌［１６］,特别是为双歧杆菌增殖所单独选择性利用的低聚糖的研制开发,使得益生菌与低聚糖在防治人体疾病的联用方面互补,为微生态学的崛起,达到空前的境界［１６］。目前总的趋势是在软件上,不断应用微生态学原…     

双歧杆菌耐药性与质粒

随着微生态学理论与实践的不断发展,人们对维持正常菌群的生态平衡的重要性的认识越来越深刻［１］。根据微生态学的有关理论,多种活菌制剂已经被开发出来,在临床被用于恢复人体的正常菌群,用来治疗各种因素导致的肠道菌群失调［２］。现就与双歧杆菌活菌制剂研制和临...     

双歧杆菌黏附的研究进展

双歧杆菌是人体肠道正常菌群中的优势菌种 ,黏附和定植于肠黏膜上皮细胞后 ,对宿主发挥生物屏障、营养、免疫、抗肿瘤、抗衰老等生理作用。黏附 (ａｄｈｅｓｉｏｎ)是指微生物与宿主上皮细胞通过生物化学作用特异性地连接在一起。由于黏附是微生物与微生物、微生物与宿主相互关系的先决条件之一 ,是定植的第一步。因此 ,有关双歧杆菌黏附的研究越来越受到人们的重视。本文现就这一方面的研究进展作一综述。1　双歧杆菌对肠上皮细胞黏附的特点　　双歧杆菌进入肠道后能否黏附于宿主肠道黏膜上皮细胞表面 ,形成稳定的菌群 ,是关系到其是否能发…     

双歧杆菌研究进展

双歧杆菌是人和动物肠道内最重要的生理性细菌之一,它与其他生理性细菌成员构成了微生物群落,并与宿主构成一个微生态系统,它具有维持肠道微生态平衡、营养与促机体生长作用、免疫增强、抗衰老作用、防治高血压和动脉硬化、抗肿瘤作用等。双歧杆菌是一种革兰氏阳性的专性厌氧菌,具有革兰氏阳性菌的典型生物学特征。本文就双歧杆菌的研究历史、生物学特征、生物学作用、应用及发展前景做一综述。     

双歧杆菌属天然质粒系统分类

【背景】以往双歧杆菌质粒分类学研究较少,双歧杆菌属质粒系统分类方法缺失。【目的】建立双歧杆菌属天然质粒系统分类和鉴定方法,促进质粒在双歧杆菌生物学研究中的理解和应用。【方法】利用质粒复制起始蛋白进化树和基因组共线性分析方法,对目前所有已测序的双歧杆菌属天然质粒进行系统分类研究。【结果】双歧杆菌所有已知天然质粒可以划分为6个不同类型的质粒家族和3个独特的复合质粒,家族Ⅲ和家族Ⅵ质粒可进一步划分为不同的亚型类群。家族Ⅲ质粒是双歧杆菌属天然质粒的主要类型和优势家族。家族Ⅵ质粒成员亚型分类最丰富。在质粒家族水平,2种方法的分类结果完全一致。【结论】本文揭示了所有分析质粒之间的系统分类关系,建立了双歧杆菌属天然质粒系统的分类标准、方法和体系,可为今后双歧杆菌天然质粒分类和鉴定提供重要的理论参考和分类依据。     

双歧杆菌质粒聚合酶基因表达系统的构建及其鉴定

目的构建可以在双歧杆菌表达外源性基因的系统。方法PCR扩增双歧杆菌质粒聚合酶基因（BPP）并连接至质粒pBS—T以形成重组质粒pBS—BPP。PCR扩增双歧杆菌内源性阿拉伯糖苷酶的启动子及分泌性信号肽DNA序列（ara）并连接至质粒pBAD—A以形成重组质粒pBAD—ara,然后将增强绿色荧光蛋白（eGFP）基因连接至质粒pBAD—ara以形成重组质粒pBAD—ara—GFP。采用基因重组技术重组含有ara、BPP、eGFP基因序列并可将外源性基因分泌表达于菌体外及锚定表达于细胞壁的质粒pBS—BPP—ara—GFP,激光共聚焦显微镜下观察含有pBS—BPP—ara—GFP质粒及对照质粒的E．coli,验证eGFP定位表达情况。结果所构建的表达系统可以在E．coli中表达eGFP基因。结论通过基因重组方法成功构建了双歧杆菌表达系统,其可将外源基因分泌表达于菌体外。     

万古霉素耐药性肠球菌分子生物学研究进展

近年来肠球菌逐渐成为院内感染的重要病原菌,尤其引人关注的是万古霉素耐药性肠球菌（VRE）有不断增多的趋势。了解VRE的耐药机制对有效控制其扩散传播具有重要意义。我们就VRE基因组学及蛋白质组学的研究进展情况进行简要概述。     

蝎毒素基因分子生物学研究进展

介绍了克隆蝎毒素cDNA和基因组基因的策略以及蝎毒素cDNA的结构和毒素蛋白前体的翻译后加工过程,同时综述了蝎毒素基因组基因的组织结构及其mRNA前体的加工以及重组蝎毒素基因表达的研究进展.     

微囊藻毒素生物合成及其检测的分子生物学研究进展

随着世界各地水体富营养化的日益加剧,蓝藻水华的爆发频率越来越高,爆发范围也越来越广,已经成为国内外学者高度关注的重大环境问题。微囊藻水华是淡水水体中危害最严重的一类,特别是在我国巢湖、太湖和滇池等大型湖泊,经常爆发微囊藻水华,给水体生态系统和人类健康带来了巨大的危害。本文简介了微囊藻毒素的化学结构与危害,综述了微囊藻毒素mcy基因簇、Adda生物活性结构以及肽链合成与环化等关键生物合成过程,并重点归纳了聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)、实时定量PCR(real time quantitative PCR detecting system,QPCR)、基因芯片(gene microarray)和变性梯度凝胶电泳(denaturing gradient gel electrophoresis,DGGE)等用于藻毒素检测的分子生物学技术方法,最后对相关研究进行了展望。     

植物凝集素的分子生物学研究

植物凝集素是一类具有高度特异性糖结合活性的蛋白,含有一个或多个可与单糖或寡聚糖特异可逆结合的非催化结构域。它的糖结合特异性主要针对外源寡糖,主要生理功能是介异植物的防御反应。到目前为止已克隆了２２２个植物凝集素基因。作者就植物凝集素的分类、性质、功能、凝集素基因的克隆和凝集素的翻译后加工过程作一综述。     

植物类异戊二烯代谢途径的分子生物学研究进展

New advances in molecular biology of plant secondary metabolic pathway were summarized. The biosynthesis of artemisinin was used as an example, combined with the research work in the authors' laboratory. Some new ways for producing plant secondary metabolites were proposed.     

双歧杆菌肽聚糖结构及分子量的分析

从双歧杆菌细胞壁中分离纯化肽聚糖,研究其化学成分、结构和分子量分析。经氨基酸、多糖和蛋白质含量分析和肽聚糖的溶解实验鉴定,所提取物质的主要成分为肽聚糖;经核磁共振和红外光谱分析,所提取肽聚糖的结构与已知的肽聚糖的结构相吻合,其糖链结构为由D型吡喃糖N-乙酰葡糖胺和N-乙酰胞壁酸以β-1,4-糖苷键连接而组成;经SDS-PAGE和多种染色方法结合,分析经溶菌酶水解后的肽聚糖,其分子量的分布呈弥散状,范围在97.6kD到14.4kD之间。     

长双歧杆菌NCC2705高效转化系统的建立及GFP表达

目的:建立长双歧杆菌NCC2705高效稳定的电转化系统,并以其为宿主表达绿色荧光蛋白(GFP),构建一个稳定的带报告基因的表达载体。方法:从双歧杆菌克隆载体pDG7中切取其在双歧杆菌中复制所必需的pMB1复制子插入质粒pUC19的多克隆位点区,并将gfp基因在双歧杆菌中进行表达;设计双歧杆菌电击转化体系,研究在不同电击电压条件下的电转效率。结果:首先构建了大肠杆菌-长双歧杆菌穿梭质粒pUB1和带有gfp基因的表达质粒pUB2,用电击法将之转化至双歧杆菌,当细菌生长到D600nm约为0.5时制备感受态细胞,在电容25μF、电阻200Ω、电压12.5 kV/cm的电击条件下进行完整质粒转化,可得到较高的转化率。结论:构建了以长双歧杆菌NCC2705为宿主的高效稳定的表达系统,为进一步研究益生菌的分子生物学和功能特性提供了基础。