灵芝尿嘧啶营养缺陷型菌株的筛选和分子鉴定

【背景】营养缺陷型是一种应用广泛的分子标记,但是目前在灵芝中还未有研究和应用报道。【目的】为灵芝遗传转化研究、杂交育种和菌种鉴别提供亲本材料和技术支持。【方法】采用紫外光诱变、单单杂交、孢子单核化的方法从灵芝单核体菌株出发得到尿嘧啶营养缺陷型双核体菌株。【结果】获得8株稳定的尿嘧啶营养缺陷型单核体突变菌株和7株尿嘧啶营养缺陷型双核体菌株。【结论】灵芝尿嘧啶营养缺陷型菌株在添加外源营养物的基础上可恢复正常生长,可以为灵芝遗传转化体系的构建和灵芝育种提供材料。     

栽培条件对灵芝子实体中四种重金属含量的影响

以不同灵芝品种、不同栽培基质、不同栽培方式、不同生长时期获得的菌草灵芝和木屑灵芝为原料,对栽培基质及灵芝子实体中铅、砷、汞、镉4种重金属的含量参照国际标准进行检测,结果表明虽然菌草栽培基质中重金属含量高于木屑栽培基质,但菌草灵芝对重金属富集率远低于木屑灵芝,成熟期的菌草灵芝与木屑灵芝中的重金属含量均低于农业行业标准和国家标准。因此菌草可以替代木屑用作灵芝栽培的营养来源。     

灵芝悬浮培养中添加微颗粒Talc对灵芝酸产生的影响

灵芝酸是灵芝中重要的药理活性物质,其低产量限制了它的广泛应用和深入研究,高效提高液体发酵中灵芝酸的含量十分必要。以CGMCC 5.65为材料,在悬浮培养条件下,研究添加微颗粒Talc对灵芝酸产生的影响。结果表明,微颗粒Talc添加显著减小了灵芝细胞粒径,对照组为(3.33±0.16)mm,15g/L微颗粒Talc添加组为(2.04±0.12)mm。灵芝细胞中单体灵芝酸和总灵芝酸的含量在微颗粒Talc添加条件下也显著提高。15g/L微颗粒Talc添加组的总灵芝酸含量达到(1.51±0.02)mg/100mg细胞干重,GA-Mk、GA-T和GA-Me的含量最高为(6.02±0.29)、(5.08±0.14)和(1.71±0.09)μg/100mg细胞干重,分别是对照的1.6、4、1.9和1.4倍。另外,15g/L微颗粒Talc添加条件下鲨烯和羊毛甾醇的最大积累量分别为(3.69±0.23)和(34.86±6.41)μg/100mg细胞干重,是对照的2.6和4.2倍;灵芝酸生物合成途径关键基因fps和cyp-5150l8的表达量最高为对照的2.35和1.53倍。     

富钙灵芝的深层培养

目的:研究灵芝深层发酵过程中钙对灵芝生长及钙的富集作用的影响。方法:用重氮化法将ABA分别与牛血清白蛋白(BSA)、卵清白蛋白(OVA)连结,得到ABA的免疫抗原和包被抗原,并采用紫外全波长扫描和SDS-PAGE鉴定合成的抗原;以经过鉴定的抗原免疫白兔,制备出ABA的多克隆抗体;采用间接酶联免疫法对抗血清进行效价检测;通过离子交换层析法获得纯化的抗体。结果:当培养基中硝酸钙的添加量达到600mg/100g时,灵芝生长和富集钙的效果最好;添加量超过800mg/100g时,灵芝富集钙的效果明显降低。富钙灵芝中有机钙的含量约占总钙量的97.30%。结论:在培养基中添加低浓度的钙,对灵芝的生长和钙的富集有促进作用,为开发新型有机钙提供了依据。     

灵芝的奇形生长

灵芝(Ganoderma lucidum) 是目前农村广泛栽培的药用真菌。近几年,药物学工作者发现灵芝与其它真菌相比,更富含有机锗。锗是人体必须的重要微量元素,它有降血脂、抗癌、延缓衰老、增强机体活性等功能。但无机锗对人体有毒性,人体所需的锗只能以有机锗的形式从食物中吸收。由于在营养补剂和化妆美容品中大量使用灵芝抽提物,目前灵芝的市场     

灵芝酸乳制作工艺初探

采用灵芝菌深层培养的滤液 ,可以制成灵芝酸乳 ,经测定 ,灵芝酸乳中可溶性固形物的含量为 11.2 % ,乳酸含量为 0 .72 % ,酸度为 77°T。酸乳同时具有灵芝的药用价值和乳酸饮料的丰富营养。制作工艺简便 ,易于开发     

莲子壳主料对代栽灵芝生长及其生产效益的影响

莲子壳作为农业副产物体量较大,可用作食用菌栽培原料。本研究以资源化利用莲子壳和拓展灵芝栽培原料来源、降本增效为目的,以10%、20%、40%、60%和80%的莲子壳替代基础配方(杂木屑45%、玉米芯45%、麦麸5%、玉米粉4%、石膏1%)的木屑和玉米芯,研究各试验配方的灵芝农艺性状、品质及生产效益,从中优选出莲子壳基质高效配方,为探究莲子壳在代料灵芝生产中的应用提供依据。结果表明,培养料添加一定比例莲子壳可促进灵芝菌丝生长,60%处理的菌丝生长速度最快,达4.44mm/d;基料添加莲子壳会减少菌柄长度、菌盖厚度和子实体含水量,对菌盖大小、菌柄直径和单朵鲜重无明显影响。活性成分测定结果表明,随栽培料莲子壳比例的增加,灵芝子实体多糖和蛋白质含量明显增加,80%处理的多糖含量(10.57mg/g)是对照的1.66倍、蛋白质含量(15.14%)显著高于对照(14.12%);而栽培料莲子壳对灵芝子实体三萜酸的影响呈“低比例促进、高比例抑制”趋势。另外,莲子壳配方会显著提高灵芝子实体氨基酸总量,以10%处理最高,氨基酸总量为32.44%,该处理检测到13种氨基酸的含量最高值。生产效益分析表明,栽培...     

双层灵芝的培养方法

我们在研究食用菌通气条件的过程中,发现了通气与灵芝结盖的关系十分密切。通过实验,找出了灵芝结盖的规律并培养出双层菌盖的灵芝。灵芝菌盖形成的条件在营养条件和pH值满足的情况下,灵芝能否进入子实体分化阶段,关键在于管理,其中通气对灵芝形成菌盖起着决定的影响。     

高速逆流色谱法分离灵芝中的灵芝烯酸B

本实验建立一种快速从灵芝子实体中制备灵芝烯酸B的方法。以沪农灵芝1号子实体乙醇提取物为原料,经过D101大孔树脂粗分,用60%乙醇洗脱后,采用高速逆流色谱对获得的灵芝酸性三萜进行分离制备。确定最佳溶剂体系为正己烷-乙酸乙酯-甲醇-水（V/V/V/V,5:5:2:9）,上相作为固定相,下相作为流动相,单因素法和正交实验设计确定高速逆流色谱法分离灵芝烯酸B的最佳工艺为：流速2.0mL/min,转速900r/min,一次上样量为500mg时,制备得到灵芝烯酸B化合物得率为(9.07±0.16)%,纯度为(85.04±3.45)%。用质谱、核磁对得到的灵芝烯酸B进行了结构鉴定。此法操作简单高效,为大量制备灵芝烯酸B提供了参考。     

虫药蜣螂对灵芝发酵物风味组成的影响

采用顶空-气相色谱-质谱联用对虫药蜣螂和添加蜣螂发酵后的灵芝发酵物的风味物质进行了测定,进而分析了添加蜣螂对灵芝发酵物风味组成的影响。结果表明,虫药蜣螂和灵芝发酵物(添加蜣螂)中分别含有40和30多种风味物质。添加蜣螂发酵后,灵芝发酵物跟对照相比新出现了5种风味物质,分别为苯甲醛、α-松油醇、苯乙醇、唑苯并噻和桃金娘烯醇。其中α-松油醇、苯乙醇和唑苯并噻是蜣螂中的风味成分,苯甲醛和桃金娘烯醇为新产生成分。所有5种风味物质均为食品香料物质。蜣螂中其它风味成分经灵芝发酵转化或降解后,未出现在灵芝发酵物中。因此,添加蜣螂发酵对灵芝发酵物的风味无不良影响。结果还提示灵芝细胞可生物转化或降解虫药蜣螂中的部分风味物质。     

灵芝液体发酵条件的优化研究

通过单因素和正交试验,优化灵芝5760深层培养的营养需求与环境条件对灵芝菌丝体生物量及次生代谢产物发酵液多糖的作用。结果表明,适宜灵芝液体菌种培养和液体发酵的培养基配方为麦麸粉5%,黄豆饼粉3%,KH2PO40.10%,MgSO40.09%;适宜的环境条件为初始pH5.5,装液量32%,生物量最大时为第8～9d;适宜接种的种龄为6d,接种量为10%;发酵周期6d,搅拌转速150r/min,消沫剂添加量可为0.20%。从硒对灵芝5760菌丝体生长及深层发酵生物量的影响,灵芝5760富硒培养适宜浓度为100μg/mL;从加硒时间对生物量的作用,在菌龄适宜时期加入即第1d。     

葡萄糖-1-磷酸对灵芝多糖合成的影响

在以葡萄糖为唯一碳源进行灵芝液态发酵时,通过添加不同浓度的代谢中间产物葡萄糖-1-磷酸,研究其对灵芝胞外多糖产量、单糖组成、合成途径相关酶的影响,从而确定影响灵芝多糖单糖组成的关键酶。结果显示,添加葡萄糖-1-磷酸对灵芝多糖产量和多糖的单糖组成并无明显影响。在检测的3种灵芝多糖合成关键酶中,葡萄糖-1-磷酸的添加抑制磷酸葡萄糖变位酶(PGM)、磷酸葡萄糖异构酶(PGI)的酶活,对磷酸甘露糖异构酶(PMI)无明显影响。此外,通过相关性分析后发现,发酵过程中半乳糖和甘露糖比例的变化分别与PGM和PGI、PMI具有相关性。本文结果对实现灵芝多糖代谢的灵活调控提供有益的参考。     

添加黄芩对灵芝发酵液中酪氨酸酶抑制剂活性的影响

本文以酪氨酸酶抑制率为指标,对添加黄芩的灵芝液体发酵培养基进行优化并考察其发酵过程.结合正交实验和响应面分析,优化的培养基组成为(g/L):黄芩 6.3,麸皮12.0,蛋白胨6.0,玉米粉 15.6,葡萄糖 6.86,豆饼粉11.3.在此条件下,发酵产物的酪氨酸酶抑制率理论最大值为52.87%.磷酸二氢钾的最适添加浓度为1.5 g/L,而硫酸镁添加后,酪氨酸酶抑制率持续降低,呈现出负效应.添加黄芩的灵芝发酵过程中pH变化较未添加黄芩时缓和;灵芝发酵液的酪氨酸酶抑制活性显著提高,酪氨酸酶抑制剂的产生与细胞的生长呈现部分偶联型.     

油酸促进灵芝三萜液态深层发酵的工艺研究及规模化验证

灵芝三萜是灵芝中主要的活性成分之一,前期研究发现油酸可以促进灵芝三萜液态深层发酵下的发酵合成。本研究主要对油酸促进灵芝三萜液态深层发酵的工艺进行优化,并进行3L发酵罐规模的验证。通过单因素实验考察油酸的添加方式、添加时间和添加浓度对灵芝三萜的影响,结合响应面实验,获得最优工艺条件并进行验证：在发酵第32h添加1.21%高温灭菌油酸,最高灵芝三萜含量为42.69mg/g;在发酵第7h添加1.35%过滤除菌油酸,最高三萜含量为43.38mg/g,分别比对照提高2.04倍和2.08倍。在1 000mL摇瓶中添加高温灭菌油酸和过滤除菌油酸,灵芝三萜含量分别为32.18和32.48mg/g,为对照的1.96倍和1.95倍;在3L发酵罐规模下灵芝三萜含量分别为28.66和25.13mg/g,为对照的1.62倍和1.42倍。本研究系统优化了油酸促进灵芝三萜液态深层发酵的工艺条件,并在与工业生产相对应的3L发酵罐上进行验证。该研究可为灵芝三萜的规模化发酵提供重要参考和借鉴。     

复合有机氮源对灵芝三萜液态深层发酵的影响

以灵芝为材料,在前期研究基础上,以不同酵母粉作为氮源,研究复合有机氮源对灵芝三萜液态深层发酵的影响。首先,由单因素实验考察3种不同的酵母粉对灵芝菌丝体合成灵芝三萜的影响,确定酵母粉的最适宜浓度范围。在此基础上,根据中心组合实验设计,对3种酵母粉分别采用2种复合和3种复合的方式,优化复合有机氮源的最佳组合配比。结果表明：当基础培养基中添加6.6g/L的酵母粉N-1与6.6g/L的酵母粉N-2时,灵芝三萜产量可达0.478g/L（理论产量为0.485g/L）,比添加单一酵母粉N-1、N-2、N-3分别提高了21%、139%、103%,其氮源用量为两种组合时最低。当基础培养基中酵母粉N-1、N-2与N-3添加量分别为5.07g/L、3.78g/L、7.63g/L时,灵芝三萜产量达0.514g/L（理论产量为0.510g/L）,比单因素对照组分别提高了30%、157%和74%。本研究优化的复合氮源添加方式可明显提高灵芝菌丝体液态深层发酵生产灵芝三萜的产量,为其规模化液态深层发酵的生产提供科学数据。     

氮源对灵芝菌丝体液态深层发酵合成灵芝三萜的影响

以沪农灵芝1号为供试菌株,葡萄糖作为碳源,用硫酸铵、氯化铵、鱼粉蛋白胨、胰蛋白胨和酵母粉作为氮源,研究不同种类氮源对灵芝菌丝体液态深层发酵过程的影响。首先,确定了N-10酵母自溶粉作为发酵的氮源,降低了发酵的复杂性和不确定性;其次,考察N-10酵母自溶粉不同浓度对灵芝菌丝体发酵合成灵芝三萜过程中菌丝体的生物量、葡萄糖消耗、灵芝三萜产量等方面的影响,确定了N-10酵母自溶粉的适宜添加浓度。在此基础上,采用响应面中心组合设计,对4因素最佳水平范围进行研究,结果表明,葡萄糖、N-10酵母自溶粉、磷酸二氢钾和七水硫酸镁的含量分别为31.06g/L、2.76g/L、1.77g/L和1.99g/L时,灵芝三萜的理论产量为21.166g/kg干菌丝体,实际发酵产量提高到21.153g/kg干菌丝体。与原工艺相比,新工艺的灵芝三萜产量提高了6.22%。     

HPLC测定灵芝子实体水提物及相关产品中三萜的含量

灵芝药品大多以灵芝子实体水提物为原料,为快速准确测定灵芝子实体水提物及相关产品中三萜的含量,建立了具有较好分离效果的HPLC分析测定方法。通过优化色谱柱和洗脱条件,优选出Agilent Zorbax SB-Aq C18色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm),以乙腈-乙酸水溶液(0.01%)为流动相梯度洗脱,流速为1.0 mL/min,检测波长252 nm,柱温30℃,该条件下灵芝酸A、灵芝酸F等10种灵芝酸得到较好的分离。方法学考察显示该分析方法精密度、重复性、稳定性和加样回收率的RSD值均小于5%,可以用于灵芝酸C2、灵芝酸G、灵芝烯酸B、灵芝酸B等10种灵芝酸的定量检测。通过对灵芝子实体原料、水提物和市售灵芝产品中10种三萜类成分分析发现,灵芝子实体水提物中均含有这10种三萜,含量为2.52%–6.83%,较子实体原料大幅提高,市售的灵芝产品中的三萜含量为0.27%–0.84%。该方法的建立为灵芝水提物及其产品质量标准的建立奠定基础。     

高速逆流色谱法制备灵芝萜烯酮醇

本研究建立一种从灵芝子实体提取物中快速制备灵芝萜烯酮醇的方法.以沪农灵芝1号子实体为原料,经乙醇提取、D101大孔树脂富集后,再经一次正相色谱柱层析,获得富含灵芝萜烯酮醇的流分.采用高速逆流色谱法对该流分进行分离,优化分离条件,获得的最佳条件为:溶剂体系为正己烷-乙酸乙酯-甲醇-水(V/V/V/V,12∶24∶18∶9...     

灵芝富碘实验中氨基酸含量的探讨

在灵芝TW液体深层富碘培养过程中,碘元素能显著提高灵芝菌丝体中氨基酸的含量,不富碘的灵芝菌丝体氨基酸含量为26.95％,在培养基中添加0．1％碘化钾而获得的富碘灵芝菌丝体及富碘锌锗硒灵芝菌丝体氨基酸含量分别为35．37％、35．86％,另外其氨基酸的组成也相对发生了显著的变化,因而推测碘元素可能是灵芝中某些氨基酸含成过程中的辅基或是其激活因子。     

灵芝菌丝发酵提取液减肥作用的初步探讨

目的:对灵芝菌丝发酵提取液的减肥作用进行初步研究.方法:用高营养饲料建立营养性肥胖小鼠模型后,治疗组用灵芝菌丝发酵提取液灌胃,对照组用无菌生理盐水,观察体重变化.结果:灵芝菌丝发酵提取液能明显降低肥胖小鼠体重.讨论:灵芝菌丝发酵提取液具有减肥、降低体重作用.