不同产地丹参中有效成分的含量比较

用索氏提取法提取丹参的水溶性有效成分,用冷浸法提取丹参的酯溶性有效成分,以HPLC法测得的丹参素、丹参酮ⅡA和原儿茶醛含量为考察指标,对全国几个著名的丹参药材基地种植的丹参中丹参素、原儿茶醛和丹参酮ⅡA的含量及其稳定性进行了比较。不同产地丹参有效成分含量有较大差异。河南和四川产的丹参中酚酸类化合物含量最高,每克药材丹参素含量分别为19．79mg和20．35mg,每克药材原儿茶醛含量分别为5．58mg和4．35mg,贵州铜仁地区产的丹参丹参酮ⅡA含量最高,每克药材达0．4mg。     

HPLC法测定丹参饮片中丹参酮ⅡA的含量

目的:采用高效液相色谱法测定市售八批丹参饮片中丹参酮ⅡA的含量.方法:高效液相色谱法,Inertsill ODS-SP(4.6× 150mm,5 μm),流动相:甲醇-水(75∶25),检测波长:270 nm,流速:1.0 ml/min.结果:丹参酮ⅡA在(1.43～68.35)μg/ml范围内有良好的线性关系,r=0.9999 (n=6).丹参饮片中丹参酮ⅡA的含量普遍偏低,只有山东饮片中的两个批次含量较高.结论:考察分析丹参饮片中丹参酮ⅡA的含量,可为临床使用提供依据.     

茯苓中多糖的提取及含量测定

采用水煎煮、稀碱浸提茯苓中的多糖,通过正交试验优选工艺条件。结果表明,稀碱浸提茯苓中的多糖的工艺较为合理,其操作简单,提取时间短,收率较高．为测定提取液中的多糖含量,以苯酚—硫酸法,制得有色糖醛衍生物,用分光光度法,在490nm波长处测定吸光度,回归方程线性关系好。方法简单易行、稳定、快速。     

白花除虫菊同源四倍体株系花期除虫菊酯含量及农艺性状分析

采用高效液相色谱法测定了16个白花除虫菊[Pyrethrum cinerariifolium（Trev．）Vis．]同源四倍体株系干花中的总除虫菊酯、总除虫菊酯Ⅰ（PyⅠ）和总除虫菊酯Ⅱ（PyⅡ）含量,并分析了16个同源四倍体株系花中总除虫菊酯含量的动态变化规律以及花期的农艺性状。结果表明,管状花开放初期,同源四倍体株系干花中的除虫菊酯含量最高,其中11个株系的总除虫菊酯含量高于二倍体株系且7个株系干花中的总除虫菊酯含量高于1．4％,达到一级花的质量标准。同源四倍体株系的花薹和花序的农艺性状表现出明显的多倍体性状,花薹低,花盘直径大,干花产量高,通过合理密植可以提高同源四倍体株系的干花产量。     

厚朴类有效成分的含量测定及高效液相色谱图

用高效液相色谱法对我国木兰科植物“厚朴类”中的酚类和季胺碱类作了定性和定量分析,并提供色谱图,结果表明不同产地的“厚朴”,图谱相同,仅含量有差别,但不同种的“厚朴”,色谱图不同.此结果可作为评价“厚朴类“药材质量和鉴别的方法.根据各类厚朴有效成分的存在,有一定的规律,为木兰科植物化学分类提供了有价值的资料。     

广西金丝桃属植物有效成分金丝桃素的含量测定研究

采用 UV-VIS法和 HPLC法检测了广西产金丝桃属植物及其提取物中有效成分金丝桃素的含量 ,建立了 HPLC测定金丝桃素的新方法 ,该法有良好的重现性及精密度。     

丹葛酚酮胶囊HPLC指纹图谱及9种有效成分的含量测定

建立丹葛酚酮胶囊的HPLC指纹图谱,并同时测定其中9种有效成分的含量,为其质量评价提供依据。采用Eclipse XDB-C₁₈色谱柱(4.6 mm×250 mm,5μm),以0.05%甲酸-乙腈为流动相梯度洗脱,流速1.0 mL/min,检测波长280 nm,柱温30℃,进样量10μL,建立了丹葛酚酮胶囊的HPLC指纹图谱。10批丹葛酚酮胶囊指纹图谱中有28个共有峰,相似度均大于0.99,经与对照品比对确认了16个成分,对葛根素、3′-羟基葛根素、3′-甲氧基葛根素、葛根素芹菜糖苷、大豆苷、丹酚酸B、隐丹参酮、丹参酮Ⅰ、丹参酮Ⅱ_A 9种主要成分进行了定量分析,线性、精密度、稳定性、重复性和加样回收率均符合定量要求,所建立的方法简便、稳定、可靠,指纹图谱结合多指标成分的含量可有效控制产品的质量。     

何首乌同源四倍体的诱导及生理指标的测定

用秋水仙素诱导何首乌(Polygonum multiflorumThunb.)同源多倍体的最佳条件为用0.2%秋水仙素溶液处理其试管苗幼嫩顶芽36 h,并接种于含2.0 mg.L-16-BA和0.2 mg.L-1IAA的MS启动培养基上。对诱导出的多倍体株系进行染色体计数分析,结果表明,诱导产生的多倍体均为四倍体,染色体基数2n=4x=44。生理指标测定结果表明,何首乌同源四倍体株系试管苗的超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化物酶(POD)和黄嘌呤氧化酶(APX)活性及叶绿素含量等指标均高于二倍体株系。     

镉胁迫对丹参生长及有效成分积累的影响研究

采用盆栽试验方法,研究了镉（Cd2＋）对丹参（Salvia miltiorrhiza Bunge）的生长及其有效成分积累的影响。结果表明,镉胁迫下丹参的生长受到了显著抑制,体内Cd2＋残留量、可溶性蛋白含量和膜脂过氧化程度显著增加,叶绿素含量降低。与对照相比,镉胁迫下丹参叶片水溶性酚酸类化合物咖啡酸和迷迭香酸的含量显著降低（P〈0．05）,原儿茶酸含量增加,丹参素、原儿茶醛和丹酚酸B的含量也降低,但变化均不显著（P〉0．05）。而根系中这6种酚酸类化合物含量均降低,其中迷迭香酸的含量变化极显著（P〈0．01）。镉胁迫下丹参根系脂溶性丹参酮类化合物二氢丹参酮、丹参酮I和隐丹参酮含量均显著降低,而丹参酮lIA含量变化不显著。丹参叶片中水溶性酚酸类化合物合成关键酶苯丙氨酸解氨酶（PAL）和酪氨酸氨基转移酶（TAT）的活性显著降低,而肉桂酸4一羟化酶（C4H）和4一香豆酸CoA连接酶（4CL）的活性显著升高。这些结果均说明镉胁迫可以降低丹参的产量和质量。     

HPLC法测定白芥子药材中芥子碱硫氰酸盐的含量

本文采用RP-HPLC法测定了不同产地白芥子药材中芥子碱硫氰酸盐的含量,方法为色谱柱Alltima Phenyl,5μ,250×4.6mm;流动相乙腈-0.08mol/L磷酸二氢钾溶液(1585),检测波长326nm;流速1mL/min.柱温室温.实验表明,该法快速、简便,具有很好的重现性和稳定性.     

丹参离体微繁技术研究

以丹参(Salvia miltiorrhiza Bunge)离体幼茎、叶、叶柄为外植体,对其丛生芽、不定芽的诱导和增殖、生根、移栽等方面进行系统研究,探讨了有关丹参的离体快速微繁技术。试验表明：MS 6-BA1．0mg／L是诱导初代培养的芽产生丛生芽的最佳培养基,其诱导生芽率为100％,丛生芽增殖的最佳培养基为MS 6-BA1．0mg／L NAA0．01mg／L;以叶为外植体,用MS 6-BA 0．5～2．0mg／L诱导不定芽可取得较好效果,其诱导生芽率为100％,不定芽增殖的最佳培养基为MS 6-BA1．0mg／L,其增殖倍数达24倍;诱导生根较好的培养基为1／2MS 0．1mg／L IBA,移栽先水培再土培,成活率可达100％。     

不同生长调节剂对丹参快速繁殖的影响

探讨了丹参(Salvia miltiorrhiza Bunge)快速繁殖过程中不同生长调节剂的影响.实验表明:MS 6-BA 2.0mg/L NAA 0.05 mg/L是诱导初代培养的芽产生大量丛生芽的最佳培养基,其诱导生芽率为100%;最佳的丛生芽增殖培养基为MS 6-BA 1.0 mg/L NAA 0.01 mg/L,其增殖倍数为15倍;MS 6-BA 0.5～2.0 mg/L是诱导大量不定芽的最佳培养基,其诱导生芽率为100%,最佳的不定芽增殖培养基为MS 6-BA 1.0 mg/L,其增殖倍数为24倍;诱导生根较好的培养基为1/2MS IBA 0.1 mg/L,生根率为98%,移栽成活率为100%.     

丹参胁迫诱导基因SmSIP1的表达特征分析

从丹参EST库中筛选到一个胁迫诱导蛋白基因,命名为SmS1P1,其序列全长296bp,编码80个氨基酸。生物信息学预测表明SmS1P1是一个亲水的,不具有跨膜结构域,包含一个N-端信号肽和多个可能的磷酸化位点的蛋白。实时荧光定量PCR分析显示,SmS1P1在根中的表达量高于茎和叶,并且受ABA和干旱的诱导,推测其可能参与根部的胁迫应答反应。     

丹参生物工程的研究与开发

中药材的品质改良是中药现代化进程中的一个重要问题,现代生物工程技术是进行中药材品质改良的可行途径之一。对丹参的组织培养、毛状根诱导培养及基因工程等方面的最新进展作一综述,以期为利用生物工程技术遗传改良丹参品质提供一些参考。     

丹参SRAP反应体系的建立与优化

相关序列扩增多态性(SRAP)是一种新发展起来的分子标记技术.实验以丹参总DNA为模板,对SRAP-PCR反应体系的重要参数设置梯度实验,筛选最佳的SRAP-PCR反应条件.经过大量重复性实验,建立了一套适用于丹参稳定可靠、重复性好、带型清晰的SRAP-PCR反应体系:25μL的反应体系中,模板DNA量40ng、2.5mmol/L Mg2 浓度、0.8μmol/L的上下游引物、200μmol/L的dNTPs以及Taq酶1U.研究结果表明,该体系可应用于丹参植物种质的分类鉴别,并为其地道性及功能基因的研究奠定基础.     

丹参悬浮培养细胞原生质体的制备和活力检测

对丹参悬浮培养细胞原生质体制备条件进行了研究,并利用FDA染色和钙离子荧光探针Fluo-3/AM装载对制备得到的原生质体的活力和功能进行了检测。丹参悬浮培养细胞原生质体的制备条件为:悬浮培养细胞酶解的适宜酶液组合为纤维素酶1.5%、果胶酶0.3%和离析酶0.5%;适宜的甘露醇浓度为0.4 mol/L;酶解时间为12 h;在600 r/min转速下离心5 min收集,纯化得到原生质体,其产量为1.1×106/g FW,FDA检测显示其活力为95%以上,荧光探针Fluo-3/AM可成功装载到原生质体中。     

丹参肉桂酰辅酶A还原酶基因克隆与生物信息学分析

分析丹参转录组数据库,获得一条新的肉桂酰辅酶A还原酶(cinnamoyl-CoA reductase,CCR)基因,命名为SmCCR-2(GenBank注册号为JF784010)。该基因包含一个长为966 bp的完整开放读码框,编码321个氨基酸残基。生物信息学分析显示,SmCCR-2编码的蛋白具有NWYCY基序,属于NABD_Rossmann超家族,相对分子量为35.80 kD;预测SmCCR-2为中性亲水的稳定蛋白,存在跨膜结构域。实时荧光定量PCR结果表明,SmCCR-2基因在丹参各组织都有表达,茎中表达量最高。其表达受到病原菌的影响,表明SmCCR-2基因可能与植物防御反应有关。     

高速逆流色谱法分离纯化丹参并尝试制订中药指纹图谱

用国产高速逆流色谱（HSCCC）分离纯化中草药——丹参,选用正己烷乙醇水体系,固定相保留率达到788%。采用分步洗脱,3个产地丹参各分离得到12个洗脱组分,经高效液相色谱仪和紫外光谱仪检测证明3张HSCCC洗脱图谱中对应洗脱峰为同一组分。HSCCC洗脱图谱不包含非共有峰,并且对应洗脱峰保留时间的相对标准偏差RSD<3%,符合国家标准关于制订指纹图谱方法学考察资料的技术参数。因此,HSCCC作为制订指纹图谱的方法之一具有可行性。     

丹参肉桂醇脱氢酶基因（SmCAD）的克隆及表达分析

肉桂醇脱氢酶（cinnamyl alcohol dehydrogenase,CAD）依赖于NADPH还原肉桂醛及其衍生物,是催化木质素单体生物合成途径的最后一步关键酶。通过分析丹参转录组数据库,从丹参中获得一条肉桂醇脱氢酶基因,命名为SmCAD（Genebank注册号：HQ162287）。该序列包含一个长为1083 bp的开放阅读框,有3个内含子和4个外显子,编码360个氨基酸,含有NADP（H）结合域,Zn1和Zn2锌结合位点。利用BD walking的方法获得其启动子序列1202 bp,序列分析结果表明,SmCAD启动子区包含茉莉酸甲酯（MeJA）、脱落酸（ABA）、赤霉素（GA3）响应元件以及MYB结合位点。利用实时荧光定量PCR分析表明,该基因在丹参根、茎、叶中均有表达,且其表达受到MeJA的诱导和GA3的抑制,推测该基因可能参与了丹参对外源信号的应答反应。研究结果可为进一步研究SmCAD基因在丹参中的具体功能提供理论依据。     

丹参bHLH转录因子基因SmMYC2的克隆和表达分析

MYC2是植物茉莉酸类激素响应途径中的核心转录因子,在植物防御反应、次生代谢调控及生长发育过程中均有重要的调控作用。基于丹参转录组和基因组survey序列,本研究克隆了丹参转录因子MYC2的基因序列,并命名为Sm MYC2(Gen Bank No.KJ945636)。Sm MYC2基因的c DNA序列长度为1910 bp,开放阅读框(ORF)的长度为1809 bp,编码602个氨基酸,无内含子;该基因编码蛋白与烟草、番茄等植物的MYC2蛋白具有较高的同源性;Sm MYC2蛋白无跨膜结构域、信号肽等结构。实时荧光定量PCR检测结果显示,Sm MYC2在丹参的根、茎、叶、花中均有表达,并且在根和茎中的表达量更高;此外,该基因表达受茉莉酸甲酯、光和机械损伤的诱导,但受赤霉素的抑制。本实验结果为进一步探讨Sm MYC2基因在丹参中的生物学功能奠定了基础。