小菜蛾乙酰胆碱酯酶cDNA片段的克隆和序列分析

利用反转录-多聚酶链式反应(RT-PCR)的方法对小菜蛾Plutella xylostella的乙酰胆碱酯酶基因cDNA片段进行了克隆和序列分析。通过简并性上游引物和下游引物扩增出了小菜蛾乙酰胆碱酯酶基因281bp的cDNA片段。同源性分析表明, 该cDNA片段与其它昆虫乙酰胆碱酯酶基因序列具有较高的同源性。     

关于多聚酶链式反应扩增DNA片段结果分析方法的探究

通过理论和实验分析对多聚酶链式反应扩增DNA片段的实验进行了探究。     

人锰超氧化物歧化酶cDNA的克隆、测序及表达

用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)以人肝细胞总RNA为模板, 扩增了人锰超氧化物歧化酶(hMnSOD)的cDNA片段, 将此cDNA克隆到载体pGEM-T中.对重组质粒进行限制酶切分析和序列测定, 确定为含hMnSODcDNA的重组质粒将该hMnSODcDNA重组到表达载体pBV220内, 重组质粒在大肠杆菌DH5-α中表达hMnSOD, 表达产物占菌体总蛋白的14%, 具有持异性SOD酶活性.     

棉铃虫细胞色素P450 cDNA片段的克隆与序列分析

以 5龄实验室敏感品系棉铃虫Helicoverpaarmigera的总RNA为模板 ,采用简并性引物 ,利用反转录 -多聚酶链式反应 (RT PCR)扩增出了 2个新的长度分别为 2 3 7bp和 2 40bp的cDNA片段。序列分析表明 ,2 3 7bp的cDNA片段与棉铃虫P45 0CYP4家族有较高的相似性 ,最高达 73 %;而 2 40bp的cDNA片段与CYP6家族有较高的相似性 ,最高达 49%。     

人基因组YAC克隆DNA的Alu－PCR反应条件的系统研究

在人基因组ＹＡＣ克隆的Ａｌｕ－ＰＣＲ指纹分析中要求ＤＮＡ且扩增带具有ＹＡＣ特征性;在用ＡｌＵ－ＰＣＲ方法对ＹＡＣ克隆中的人类基因组ＤＮＡ片段进行特异的同位素标记时则要求被扩增标记的ＤＮＡ序列在插入片段中具有一定的弥散性。我们建立了两种不同的Ａｌｕ－ＰＣＲ反应体系以满足这一不同要求,并已得到较为满意的结果。根据不同条件下的Ａｌｕ－ＰＣＲ结果,分析了多引发位点ＰＣＲ中的一些现象,并作出了解释。     

NaCl胁迫对甘薯叶片叶绿体超微结构及一些酶活性的影响

随ＮａＣｌ胁迫浓度的提高,甘薯叶片叶绿体数目逐渐减少,类囊体膜片层松散、扭曲、破裂及逐渐解体膜片层检叶绿素含量下降。与此同时,Ｈ２Ｏ２、ＭＤＡ含量增加,ＡＳＰ、ＳＯＤ活性表现先上升后下降的趋势。耐盐品种在ＮａＣｌ胁迫下能维持较强的Ｈ２Ｏ２清除能力和较低的ＭＤＡ水平。     

大鼠肝脏脂酶基因的PCR扩增,序列分析和克隆

报导了应用聚合酶链式反应技术,扩增大鼠肝脏脂酶基因及其克隆和序列分析的结果,经３１个循环的坟增,得到大鼠肝脏脂酶及其Ｎ端结构域的ｃＤＮＡ,前为１５０８ｂｐ的片段,后为１０７６ｂｐ的片段。克隆事,对此二片估进行一限制性内切酶物理图谱分析,测定了ＤＮＡ序列,并已将它们克隆表达载体ｐＧＴ－ｄ中。     

哈茨木霉超氧化物歧化酶基因克隆与特性分析

构建了哈茨木霉菌丝的cDNA文库,并获得了3298条ESTs序列,对哈茨木霉(Trichoderma harzianum)ESTs序列本地数据库进行tBlastn检索,获得了哈茨木霉超氧化物歧化酶cDNA序列。cDNA序列全长751 bp,开放阅读框465bp,编码154个氨基酸组成的多肽,蛋白分子量为15.7kD。BlastP同源性分析表明该基因与麦角真菌(Claviceps purpurea)相似性最高为86%;与解脂耶氏酵母菌(Yarrowia lipolytica)相似性最低为72%。三级结构预测表明,其活性中心可能与His47,His49,His64,His72,His81,His121,D84位点有关,并构成其活性中心骨架。     

PCR定点突变血红蛋白基因的克隆和筛选

为开展以基因重组血红蛋白为基础的血液代用品研究,我们首先用PCR 突变法扩增出含血红蛋白α、β珠蛋白的串联基因片段,经测序表明,所克隆的α、β基因符合预期设计结果,未发生意外突变。     

甘薯贮藏蛋白(sporam in)A基因编码区克隆及序列同源性分析

采用 PCR技术 ,从我国广泛栽培甘薯品种南薯 88基因组中扩增和克隆到甘薯贮藏蛋白 A基因编码区段 ,并测定了其全部核苷酸序列 .该编码区长 65 7bp,编码一个长 2 1 9个氨基酸残基的蛋白质 ,其中信号肽长 37个氨基酸残基 ,成熟蛋白质长 1 82个氨基酸残基 ,其分子量为 2 0 k D.将该片段的核苷酸序列与已登录在 Gen Bank中的另外 6个甘薯贮藏蛋白 A基因编码区序列进行比较 ,发现其同源性高达 90 % ,说明甘薯贮藏蛋白 A基因编码区序列具有高度保守性 .虽然 7个基因编码区的核苷酸总变异为 1 0 % ,但在每两个基因之间的比较则表明其核苷酸的变异范围小于 7% .     

甘薯叶片蔗糖酶的分离纯化及其部分性质

纯化酶经聚丙烯酰胺凝胶电泳显示单一蛋白带,ＳＤＳ－ＰＡＧＥ显示一条蛋自带,其亚基分子量为３９．８ｋＤ。用ＳｅｐｈａｃｒｙｌＳ－２００凝胶过滤测得全酶的分子量为７９．４ｋＤ,该酶由两个相同亚基组成。其表观Ｋｍ为１２ｍｍｏｌ／Ｌ,Ｖｍａｘ为９９．５ｍｇ还原糖ｍｇ－１ｐｒｏｔｅｉｎｈ－１。     

棕榈酰化超氧化物歧化酶的制备及性质研究

为了增强超氧化物歧化酶的稳定性,用棕榈酸对其进行了修饰,在修饰条件下,酶分子表面氨基修饰率为55％时,酶的活力回收为63％。修饰后的酶在耐热、耐酸、耐碱、抗有机溶剂变性和抗蛋白水解能力上均高于天然超氧化物歧化酶,为将超氧化物歧化酶作成实用药物和进一步扩大其应用范围创造了条件。     

脓肿分枝杆菌非溶血性磷脂酶C蛋白MAB_0555基因克隆测序及生物信息学分析

目的克隆脓肿分枝杆菌（Mycobacterium abscessus,M.abscessus）非溶血性磷脂酶C基因MAB_0555,并对其测序以及生物信息学分析,为进一步研究其生物学功能及其在脓肿分枝杆菌致病机制中的作用提供基础。方法以脓肿分枝杆菌基因组DNA为模板,PCR扩增非溶血性磷脂酶C的基因片段,克隆入pQE-30质粒,构建重组原核表达载体pQE-30-MAB_0555,将其转化入大肠埃希菌DH5α,并进行序列测定及利用生物信息学软件DNAstar 5.0分析其生物学特性。结果 PCR扩增获得长1440 bp的MAB_0555基因片段,编码479个氨基酸,DNAstar等软件预测其蛋白质相对分子量（Mr）约为53 kD,并显示出具有良好的抗原性。结论成功获得序列正确的脓肿分枝杆菌MAB-0555基因,为其重组蛋白的表达及其相关研究奠定基础。     

重组人超氧化物歧化酶的基因克隆、表达及产物纯化研究

为了克隆人SOD-cDNA,构建表达载体,实现其在大肠杆菌中的高效稳定表达,通过抽提人肝组织总RNA,RT-PCR扩增人SOD cDNA,构建含rhSOD cDNA的表达质粒pLY-4/rhSOD,转化大肠杆菌JF1125进行表达研究。结果克隆到的rhSOD cDNA序列与文献报道一致,在宿主菌中获得高效表达,表达水平达68%以上;蛋白复性纯化工艺高效快速,rhSOD纯品纯度达98%以上,比活性达到2529u/mg;为用基因工程方法生产rhSOD打下基础。     

甘薯叶片组织培养一次成苗的研究

以甘薯叶片为外植体,在附加有不同植物激素的MS培养基上均诱导出愈伤组织,其中附加0.16mg/LNAA和1.0mg/LBA的MS培养基是诱导愈伤组织的适宜培养基。芽的分化在处理、基因型间差异较大,其中诱导芽分化的最佳培养基为附加1.0mg/LNAA、0.1mg/LBA和0.1mg/LABA的MS培养基。在所试的3个品种中,济南红分化率最高,宁-331次之,千系-682最差。最高分化率为21.5%,是前人报道最高分化率（11.0%）的1.95倍。分化苗移栽成活率达100%,大多数保持了原品种的特性。本文对生长素、细胞分裂素、ABA对器官分化的影响做了讨论。     

用甲酰胺提高多聚酶链式反应的特异性、灵敏度和效率的研究

在多聚酶链式反应体系中加入甲酰胺可以有效地抑制非特异性扩增,提高特异性扩增,并使反应的灵敏度提高一个数量级。     

一株耐碱Mn-SOD高产细菌的分离、基因克隆及序列分析

首次从长白山温泉土中筛选得到了一株高产耐碱SOD的细菌,通过抑制剂试验确定了该菌所产SOD类型为Mn-SOD。通过形态特征、生理生化特征及16SrDNA基因序列分析,与芽孢杆菌Bacillus sp.MO6同源性高达100%,与地衣芽孢杆菌Bacillus licheniformis同源性为99%。根据地衣芽孢杆菌Mn-SOD序列,并结合GenBank中已发表的多种细菌Mn-SOD基因保守区,分别设计引物,PCR扩增获得600bp的Mn-SOD全基因序列和430bp的核心片段,克隆sodA全基因序列,构建重组质粒pMD18-SOD。     

PCR-ELISA检测HBV DNA的研究

目的:建立一种敏感、特异的乙型肝炎病毒(HBV)DNA检测方法。方法:应用PCR扩增技术和核酸杂交技术结合酶促显色技术(即PCRELISA技术)来检测血清中的HBVDNA。结果:应用PCRELISA技术能够检出许多PCR琼脂糖凝胶电泳所检测不到的HBVDNA,大大地提高了检出率,而且,特异性强。结论:PCRELISA方法灵敏度高,特异性强,检测结果数据化,不受主观因素的影响 。     

分子分型技术用于流脑疫情的同源性分析

目的 应用多位点序列分型（Multilocus sequence typing,MLST）技术和脉冲场凝胶电泳（pulsed-field gel electrophoresis,PFGE）技术对大连市2014年4月同一工地两起流脑疫情得到的脑膜炎奈瑟氏菌株进行分子分型图谱分析,了解各菌株之间的亲缘关系。方法 对病例的脑脊液标本进行脑膜炎奈瑟菌PCR分群,对另一病例和所有密切接触者分离菌株进行多位点序列分型（MLST）试验和脉冲场凝胶电泳（PFGE）鉴定实验。结果 疑似病例标本PCR结果为脑膜炎奈瑟氏菌A群阳性,另一病例和所有密切接触者分离到的菌株PFGE图谱基本相同,表明来自同一克隆系。多位点序列分析结果为ST7。结论 两起疫情分离到的菌株型别之间具有高度的同源性,该病原菌类型为ST7的A群脑膜炎奈瑟氏菌。