玉米赤霉烯酮降解酶毕赤酵母表达载体的构建及其表达

目的构建毕赤酵母表达载体pPIC9-ZEN-jjm,筛选高效分泌表达活性目的蛋白的菌株。方法克隆ZEN-jjm基因,经EcoRⅠ和NotⅠ双酶切连接至pPIC9中,电转化至毕赤酵母GS115。利用RDB培养基和甲醇诱导表达进行筛选。HPLC检测表达蛋白降解玉米赤霉烯酮的活性。结果测序表明ZEN-jjm成功插入pPIC9中,SDS-PAGE表明获得1株高效表达目的蛋白的重组酵母,其分子量约29 kDa。HPLC表明其能有效地降解玉米赤霉烯酮。结论玉米赤霉烯酮降解酶在毕赤酵母中获得了高效分泌表达。     

瞬时与延迟叶绿素荧光及820nm光反射动力学同步测量技术在光合作用研究中的应用

在光合作用研究中,通过分析瞬时叶绿素荧光诱导动力学曲线,可以获得围绕光系统Ⅱ(photosystemⅡ,PSⅡ)发生的原初光化学反应的信息。通过分析延迟叶绿素荧光诱导动力学和衰减动力学曲线,可以探寻发生电荷重组而产生延迟荧光的不同基团,从而更加直接地了解PSⅡ的状态。而820 nm光反射可以用来检测发生在光系统Ⅰ(photosystemⅠ,PSⅠ)的原初光化学反应。文章简要介绍了这三种动力学的发生原理及其在光合作用研究中的优缺点,并举例说明了瞬时荧光、延迟荧光及820 nm光反射动力学同步测量技术在光合作用研究中的应用,以及三者之间的互补与印证作用。     

硬膜外阻滞复合静脉麻醉与气管插管全身麻醉在腹腔镜胆囊摘除中的护理比较

目的:观察腹腔镜胆囊摘除术(LC)两种不同麻醉方式下患者的不同生理变化用于指导临床护理.方法:LC患者50例,随机均分为两组.Ⅰ组,硬膜外阻滞复合静脉麻醉;Ⅱ组气管插管全身麻醉.观察各时段患者血流动力学变化,术后恶心、呕吐及术后疼痛与镇静情况.结果:Ⅰ组在手术开始后半小时内血流动力学波动较Ⅱ组大(P＜0.01),Ⅱ组在术毕后半小时内血流动力学波动较Ⅰ组大(P＜0.01).且术后恶心、呕吐发生率较Ⅰ组高(P＜0.01),疼痛与镇静效果较Ⅰ组差(P＜0.01).结论:硬膜外阻滞复合静脉麻醉用于腹腔镜的胆囊摘除术,因其术后苏醒期血流动力学改变轻,术后恶心、呕吐发生率低,术后止痛、镇静较完善.在护理上优于气管插管全身麻醉患者.     

反向斑点杂交检测泰泽病原体

目的建立一种简洁稳定、特异灵敏的检测泰泽病原体(Tyzzer’s organism)的反向斑点杂交方法(reverse dot blot,RDB)。方法根据泰泽病原体16S rDNA保守基因组序列设计引物和特异性探针,上游引物用生物素标记,进行PCR扩增,建立反向斑点杂交方法,用此法进行了特异性和灵敏度实验,同时,用RDB、ELISA和IFA对41只小鼠、38只大鼠进行了检测。结果 RDB特异性强,最低检测限为4.5 ng/μL。对79例实验动物的检测中,与ELISA检测结果一致性为100%,阳性率是7.59%(6/79);与IFA一致性为92.4%(73/79),IFA阳性率是0%。结论建立了PCR扩增与分子杂交相结合的准确、灵敏、特异的泰泽病原体反向斑点杂交检测方法。     

番荔枝内酯抑制线粒体复合物Ⅰ的作用机理

番荔枝内酯是对线粒体复合物Ⅰ具有强烈抑制作用的天然产物,它是一条以含末端γ-内酯环及四氢呋喃环为主要结构特征的长烷基链化合物。本文简述了番荔枝内酯抑制线粒体复合物Ⅰ的动力学特征和构效关系以及作为抗癌药物与杀虫剂的应用情况。     

~(125)Ⅰ—标记尖吻蝮蛇出血毒素Ⅰ在家兔体内的药代动力学研究

用~(125)Ⅰ标记从尖吻蝮蛇(Agkistrodon acutus)毒中分离出的出血毒素(Ⅰ Aa-HI),得到Ⅰ~(125)Ⅰ—AaHI。静脉注射~(125)Ⅰ—AaHI到家兔体内,对~(125)Ⅰ—AaHI在动物体内的分布和药物代谢动力学进行研究。注射~(125)Ⅰ—AaHI 5小时后将家兔杀死,测定各组织的放射性强度。结果表明有血脑屏障存在。~(125)Ⅰ—AaHI代谢的大量产物由肾通过尿排出。对于药物代谢动力学,计算机模似结果为一室模型,其中生物半衰期T_(1/2)为55.9分钟,K值为0.0124分钟。我们认为在动物体内可能有AaHI相关的结合位点或受体存在。     

瑞芬太尼复合右美托咪定在心脏手术中的麻醉效果及对血流动力学的影响

目的:分析瑞芬太尼(REM)复合右美托咪定(DEX)在心脏手术中的麻醉效果及对患者血流动力学的影响。方法:选取我院2013年12月至2015年9月行心脏手术的100例患者,按随机数字表法分为两组麻醉Ⅰ组和麻醉Ⅱ组各50例。麻醉Ⅱ组患者以REM复合DEX进行麻醉;麻醉Ⅰ组患者以REM行麻醉。比较不同麻醉方式的麻醉效果及对血流动力学的影响。结果:麻醉Ⅱ组患者手术不同时间点动脉压、心率、血氧饱和度变化不明显,(P0.05)。麻醉Ⅰ组患者插管即刻动脉压、心率、血氧饱和度下降显著,经t检验对比后有统计学意义(P0.05)。麻醉Ⅱ组Ramsay评分明显高于麻醉Ⅰ组,经t检验对比后有统计学意义(P0.05)。两组患者拔管、苏醒、恢复呼吸时间相近,无显著差异(P0.05)。麻醉Ⅱ组麻醉优良率明显高于麻醉Ⅰ组,经x~2检验对比后有统计学意义(P0.05)。结论:REM复合DEX在心脏手术中的麻醉效果确切,可维持患者血流动力学的平稳,提高镇静效果。同时不影响其拔管、苏醒和呼吸恢复,值得推广。     

植物细胞单体及多聚态肌动蛋白的选择测定:DNaseⅠ抑制法

本文利用单体actin可专一性抑制DNase Ⅰ活性的原理,建立了一套简便、准确的测定actin含量及其状态的生化方法。并对actin抑制DNase Ⅰ的动力学特征进行了初步研究。     

水分胁迫对小麦叶绿素a荧光诱导动力学的影响

利用调制式荧光动力学分光光度计研究了水分胁迫对小麦叶片及叶绿体的叶绿素α荧光诱导动力学的影响.结果表明,水分胁迫对小麦光合作用的损伤是多部位的,它影响了PSⅠ活性、PSⅡ活性以及CO_2同化.对于PSⅡ的损伤部位除了它的氧化侧处,还可能损伤了PSⅡ反应中心.     

关于举办“全国新药药代动力学学术研讨会”的通知

国家食品药品监督管理局培训中心和中国临床药理学与治疗学杂志社将于 2 0 0 4年 10月 12 - 16日在深圳共同主办“全国新药药代动力学学术研讨会”。现将有关事项通知如下 :一、参加人员从事新药研究的科研院所有关人员 ,制药企业新药研发部门有关人员 ,临床药理基地从事Ⅰ期临床试验的研究者、临床药学工作者。二、研讨内容1 新药药物代谢动力学研究背景知识介绍 ;2 药物及其代谢物浓度测定的现代仪器特点及其选择 ;3 新药药代动力学申报资料中的问题 ;4 新药临床药代动力学设计和实施要求 ;5 新药非临床药代动力学设计和实施要求 ;6 …     

急性等容血液稀释在猪肝原位移植术中的应用

目的：观察应用贺斯（羟乙基淀粉注射液,HAES-steril6％）实施急性等容血液稀释（ANH）对猪肝原位移植术血液动力学及凝血功能的影响。方法：16只健康家猪,体重20-30kg,随机分为Ⅰ组（对照组n=9）和Ⅱ期（实验组n=7）,在气管插管全麻下行猪肝原位移植术。无肝期采用体外静脉转流。除常规输液输血外,Ⅱ组于转流前应用贺斯行ANH。术中不同时期作血液动力学、血气及生化测定。结果：两组血液动力学均较稳定,两组在转流期前后凝血功能无差异。结论：在猪原位肝移植术中,应用贺斯实验ANH对血液动力学的稳定和凝血功能无明显影响。     

BglⅠ限制性核酸内切酶与环状pBR322-DNA专一性和非专一性相互作用的动力学及热力学

 本文选择限制性核酸内切酶BglⅠ和pBR322-DNA为试验系统,用酶促反应的动力学和热力学方法来研究内切酶对环状DNA分子的专一性和非专一性结合及切割过程,求得了各限制位点的切割速度k及活化能E,各限制位点催化速度常数k_c,酶同限制位点专一性结合的平衡常数k_S非专一性结合的平衡常数k_N及其热力学参数△H,△S。研究表明:不论底物的构型如何(线状还是环状),内切酶都以相似的动力学和热力过程对其进行结合与切割。     

人载脂蛋白A-Ⅰ半胱氨酸突变体的二级结构和脂质结合能力的比较

为探讨人载脂蛋白A-Ⅰ(apoA-Ⅰ,apolipoproteinA-Ⅰ)α螺旋不同位点的半胱氨酸突变后,对蛋白二级结构和脂质结合能力的影响,利用定点诱变技术构建apoA-Ⅰ的天然半胱氨酸突变体apoA-ⅠMilano(R173C),及其它α螺旋片段上的半胱氨酸突变体,分别为apoA-Ⅰ(S52C),apoA-Ⅰ(N74C),apoA-Ⅰ(L107C),apoA-Ⅰ(K129C),和apoA-Ⅰ(L195C).观察比较各种野生型及突变apoA-Ⅰ单体蛋白的α螺旋含量和二级结构稳定性及其脂质结合能力.结果显示,野生型apoA-Ⅰ,apoA-Ⅰ(S52C),apoA-Ⅰ(N74C),apoA-Ⅰ(L107C),apoA-Ⅰ(K129C),apoA-ⅠMilano和apoA-Ⅰ(L195C)的α螺旋含量分别为54±4%,49±4%,50±2%,51±6%,56±4%,52±3%,和54±1%,各种蛋白的α螺旋含量无显著性差异(P>0.05).野生型apoA-Ⅰ的变性标准自由能(ΔG0D)为10.5kJ/mol;apoA-Ⅰ(S52C)和apoA-ⅠMilano的ΔG0D比野生型低2.1kJ/mol;而apoA-Ⅰ(K129C)的ΔG0D比野生型apoA-Ⅰ高1.6kJ/mol.与野生型apoA-Ⅰ相比,apoA-Ⅰ(K129C)和apoA-Ⅰ(L195C)两个突变体与脂质结合能力明显下降(P<0.05),而其它半胱氨酸突变体(包括apoA-ⅠMilano)在脂质结合动力学方面与野生型apoA-Ⅰ无明显差异.以上结果提示,不同位点发生的半胱氨酸突变对apoA-Ⅰ单体蛋白的α螺旋含量无明显影响,但对蛋白的二级结构稳定性和脂质结合能力影响不尽相同.     

水分胁迫对露花叶片中PEP羧化酶活性及其调节特性的影响

水分胁迫期间露花叶片中PEP羧化酶的活力随胁迫时间的延长明显增加,复水后PEPC同工酶的活力下降。从露花叶片中分离到3个具有不同动力学和物理学特性的PEPC同工酶(PCⅠ,PCⅡ,PCⅢ),其中同工酶PCⅠ只存在于水分胁迫下露花叶片中,复水后消失。 这3个同工酶的K_m(PEP)值不相同;PCⅠ的K_m(PEP)值介于PCⅡ与PCⅢ之间,它在PAGE上的相对迁移率(Rm)比PCⅡ和PCⅢ大,对效应剂G—6—P及Mal的反应不敏感,分子量为PCⅡ之半;PCⅡ被G—6—P激活和被Mal抑制的程度介于PCⅠ与PCⅢ之间,它在PAGE上的相对迁移率和分子量与PCⅢ极相近。     

水合溶菌酶的H-D交换与分子活动性

应用红外吸收光谱研究不同含水量的溶菌酶膜的H-D交换动力学,以期阐明水合对溶菌酶分子活动性的影响。 酰胺Ⅱ带与酰胺Ⅰ带峰高之比A_Ⅱ/A_Ⅰ随交换时间延长成指数下降,它反映处于不同状态的质子交换速率。在一定水合范围内交换速率与水合溶菌酶水含量有关。分别在交换10分钟及5小时后的A_Ⅱ/A_Ⅰ测量表明,在R<0.2范围内,交换的质子数随水含量同步增大。R≥0.2交换质子数不再进一步增大。最初10分钟内交换的反应速度常数K_f随水含量的改变亦遵循定律。R≈0.2为一临界水含量,是溶菌酶分子维持其晶体和溶液中的空间结构及表现其活性所必需。低于此值时,溶菌酶分子的活动性随水含量而改变。     

改良颅窝减压术在Chiari畸形Ⅰ型患者中的应用及对其脑脊液动力学的影响

目的:分析改良颅窝减压术在Chiari畸形Ⅰ型患者中的应用及其对脑脊液动力学的影响。方法:收集我院2013年3月至2015年3月诊治的82例Chiari畸形Ⅰ型患者,按照抽签法分为对照组和观察组,各41例,对照组予以传统颅窝减压术,观察组予以改良颅窝减压术,比较两组临床疗效、并发症、脑脊液动力学[包含脑导管层面、脑桥腹侧平面、C3腹侧平面头端最大峰值流速(VDmax)、尾端最大峰值流速(VUmax)、每博出量(SV)]以及颅脊角变化。结果:观察组疾病控制率(95.12%)显著高于对照组(80.49%)(P0.05),并发症发生率(4.88%)低于对照组(19.51%)(P0.05)。术后,观察组脑导管层面、脑桥腹和C3腹侧平面VDmax、VUmax、SV和颅脊角、枕骨大孔径值均明显优于对照组(P0.05)。结论:改良颅窝减压术在Chiari畸形Ⅰ型患者中的临床效果值得肯定,能够改善患者的脑脊液动力学。     

铀在小麦幼苗中的积累分布及其对叶片光系统活性的影响

分别采用不同浓度的铀[0、5、20、50、100mg.L-1 UO2(NO3)2.6H2O]对五叶期的‘西科麦3号’小麦幼苗于水培条件下处理7d,分析小麦对铀的吸收积累情况,并通过快速叶绿素荧光诱导动力学OJIP曲线及820nm光吸收曲线,分析铀对叶片光系统Ⅱ(PSⅡ)和光系统Ⅰ(PSⅠ)活性的影响。结果表明:(1)小麦对铀的富集系数和转移系数较小,吸收的铀主要集中在根部。(2)铀胁迫显著降低了小麦叶片捕光色素叶绿素b的含量,并显著影响小麦叶片两个光系统的活性;铀显著抑制PSⅡ反应中心的活性,但是对PSⅡ的电子供体侧和受体侧电子传递活性及PSⅠ的活性则表现为促进作用。(3)低浓度的铀处理会影响小麦叶片中两个光合系统之间的平衡,对PSⅠ性能的促进作用显著大于PSⅡ。     

正常及白血病小鼠白细胞染色质和DNA的酶切分析

 本文应用的核酸酶为DNaseⅡ、微球菌核酸酶与限制性内切核酸酶BstNI、EcoRⅡ、HpaⅡ和MspⅠ,将它们作用于正常小鼠615和可移植性白血病小鼠L7712脾脏白细胞染包质及其DNA,根据酶切电泳谱及水解动力学分析表明:1.白血病小鼠染色质相对正常小鼠染色质易被DNaseⅡ微球菌核酸酶水解;2.白血病小鼠染色质比正常小鼠者易被MspⅠ水解,但其DNA的MspⅠ酶切电泳谱无明显差别;3.白血病小鼠染色质及其DNA较正常小鼠染色质及其DNA易被EcoRⅡ水解。这些观察说明,白血病小鼠脾脏白细胞染色质有较活跃的构象状态;其染色质DNA的CCATGC区段内有较低的甲基化程度。     

Topotecan对癌细胞系SUD4和DOHH2的拓扑异构酶(Ⅰ,Ⅱ)的毒性作用

Ｔｏｐｏｔｅｃａｎ（ＴＰＴ）是类似天然抗癌药物喜树碱的半合成新药．为了阐明ＴＰＴ对拓扑异构酶的毒性作用,将癌细胞系ＳＵＤ４及ＤＯＨＨ２培养在不同浓度ＴＰＴ的培养基中,分别在培养８ｈ、１８ｈ后取样进行测试．结果表明：ＴＰＴ不仅作用于拓扑酶Ⅰ,也作用于拓扑酶Ⅱ,尽管对酶Ⅱ的影响非常小．应用新的流体细胞测量仪（ＦＡＣＳ－Ｖａｎｔａｇｅ）及免疫分析法对细胞培养时间、ＴＰＴ的浓度与拓扑酶中毒程度的动力学关系进行了研究．上述研究显示ＴＰＴ能影响拓扑异构酶Ⅱ（新观点）,同时强调在抗癌化学治疗中应结合使用酶Ⅰ及酶Ⅱ抑制剂．     

LC-MS/MS法同时测定大鼠血浆中地榆皂苷Ⅰ和地榆皂苷Ⅱ的血药浓度及其药代动力学

采用液相色谱-串联质谱法(LC-MS/MS)同时测定大鼠血浆中的地榆皂苷Ⅰ和地榆皂苷Ⅱ,并在此基础上研究这两种活性物质在大鼠体内的药代动力学。样品前处理采用沉淀蛋白法,选用Ultimate XB-C8色谱柱(100 mm×2.1 mm,3μm,Welch,USA),采用Sciex 4000 Q-TRAP型三重四级杆串联质谱,电喷雾(ESI)源,多级反应监测(MRM)负离子模式。血浆中地榆皂苷Ⅰ和地榆皂苷Ⅱ的标准曲线线性范围均为1～2 000 ng/mL(相关系数R0.995),本方法灵敏、快速且稳定。大鼠口服给予地榆标准品后,吸收较快,绝对生物利用度(F_(abs))较小。所建立的方法可准确、快速、灵敏地检测大鼠血浆中地榆皂苷Ⅰ和地榆皂苷Ⅱ的血药浓度,适用于临床前的药代动力学研究。