FL对脐血造血细胞长期液体培养的影响*

用脐血进行千细胞移植有许多优点,但有一个主要的缺点是可获得的细胞数量有限。因此脐血干细胞的体外扩增对于其临床应用具有重要意义。考察了Flt-3配体(FL)和干细胞因子(SCF)、白介索3(IL一3)、IL-6、粒细胞集落刺激因子(G-csF)、粒细胞巨噬细胞集落刺激因子(GM—CSF)的组合对脐血细胞扩增和分化的影响。培养42d,总细胞最多扩增了385,30±163 51倍(FL+SCF+G．CSF+GM—CSF),粒细胞巨噬细胞集落形成单位(CFU-GM)在第28天达到最高,最高扩增了409．52±189．50倍(FL十SCF+IL-3+IL一6)。FL与SCF等细胞因子具有协同作用,对所有考察的细胞因子组合中,加入FL都使总细胞和CFUGM的扩增倍数增加。FL+SCF培养的总细胞扩增最小,而CFU-GM长时间保持在较高水平,表明这FL和SCF有利于保持造血干细胞的活性,防止细胞分化。在存在G-CSF和GMCSF的培养中,总细胞获得了最大的扩增,但CFU-GM达到最大后很快下降至O,表明G-CSF和GM—CSF促进了细胞的分化。结果提示,细胞因子组合对脐血造血细胞的扩增和分化具有重要的作用．FL和SCF可促进造血细胞的扩增,而G-CSF和GM—CSF等可导致细胞的过度分化。     

一个人类凋亡相关新基因TFAR15的cDNA克隆化与表达

运用cDNA RDA(cDNA Representationaldifferencesanalysis)的方法 ,已获得了在细胞因子依赖性红白血病细胞系TF 1中撤除GM CSF(Granulocytemacrophage colonystimulatingfactor)后表达增高的多个基因片段 ,其中一个经GenBank检索为新基因 .利用RACE (rapidamplificationofcDNAends)和EST (expressedsequencetags)重叠片段拼接的方法克隆了该基因的cDNA全长序列 ,命名该基因为TFAR1 5 (TF 1cellapoptosisrelatedgene 1 5 ) .TFAR1 5全长cDNA由 1 2 1 8个碱基组成 ,其分布十分广泛 .随着GM CSF的去除 ,TF 1细胞中TFAR1 5的mRNA和蛋白表达水平均有不同程度的增高 .体外活性研究发现 ,重组TFAR1 5蛋白片段可抑制人胚肾细胞 2 93的自然凋亡 .     

FDA批准了Leukine

四月份,根据一个咨询委员会所提的建议,美国食品和药物管理局(FDA)批准了Immunex Corp.(Seattle, WA)的重组粒细胞一巨噬细胞集落刺激因子(GM—CSF)译本.GM—CSF能够治疗患有急性髓细胞性自血病(AML)的成年患者。AML是一种非常普通的且能致死的急性白血病。     

人粒细胞－巨噬细胞集落刺激因子在大肠 杆菌中的克隆与表达

利用基因重组技术构建人粒细胞－巨噬细胞集落刺激因子(bGM—CSF)的高效表达菌株E．Coli HB101／pZw．GM47,经酶切电泳、DNA测序、SDS—PAGE、Western印迹及生物活性测定等分析鉴定,证明能特异性表达有生物活性的14kDaGM—CSF,表达水平达40％以上,比活性高达5×10⁷u／mg．具有良好的开发应用前景。     

大肠杆菌表达的重组人粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子的纯化

对重组人粒细胞一巨噬细胞集落刺激因子(rhGM—csF)高效表达克隆pzw．GM的表达产物进行了纯化,并对纯化的人GM—CSF进行了N端氨基酸序列分析。人GM—CSF基因表达产物在大肠杆菌中以不溶性包涵体形式存在,经过超声破菌、包涵体抽提、凝胶过滤层析、复性、离子交换一系列纯化步骤,终产物纯度达99％,按蛋白总量计算回收率达10％,比活性达1×10⁷／mg蛋白质。通过测定纯化人GM—csF的N端l 6个氨基酸序列,与由其DNA序列推导的氮基酸序列完全一致,为大批量重组人GM—CSF的生产创造了条件。     

成骨生长肽的合成及其与粒细胞集落刺激因子之间的协同作用

Fmoc法固相合成成骨生长肽 (sOGP) ,HPLC鉴定纯度大于 98.6 % ,质谱测定 ,分子量 15 2 3.5kD ,与理论分子量相符 ,N端全序列测定结果正确。Balb/c小鼠体内实验证实sOGP与临床使用的人重组粒细胞集落刺激因子 (rhG CSF)之间有明显的协同作用。实验共分两部分 :第一 ,sOGP共给予 13天 ,每天 1次 ,其中在给予sOGP 5天后开始同时给予rhG CSF ;第二 ,同时给予sOGP和rhG CSF ,每天 1次 ,连续 10天 (sOGP ,0 .5nmol/鼠 ;rhG CSF ,2 μg/鼠 )。两组都显示 ,sOGP能显著地协同rhG CSF促进外周血白细胞数和淋巴细胞数增加 ,但对外周血红细胞和血小板数无影响。骨髓有核细胞记数、骨髓涂片、胸骨切片和脾脏切片显示 ,联合给予sOGP及rhG CSF并未造成髓系和淋巴系异常增生。因此 ,sOGP是一种可以增强目前临床上广泛使用的rhG CSF功能的新的因子 ,是一种极有开发前景的新药。     

啮齿动物对北京小龙门林场辽东栎地表种子的扩散

20 0 0年 9月至 10月在小龙门林场选取两块辽东栎林样地 ,在地表分别针对无脊椎动物 (处理 1)、啮齿动物和无脊椎动物 (处理 2 )、所有扩散者 (处理 3)、所有扩散者但具隐蔽性 (处理 4 )设置 4种试验处理 :两样地 4种处理各设置 0 5m× 0 5m的地表样方 5个 ,在样方内放置饱满和虫损辽东栎种子各 2 0粒 ,每样地全部样方共布放种子 80 0粒 ;4种处理的种子累计丢失情况共调查 9次。有网罩的处理 1无种子丢失 ;两样地处理 2和处理 3之间种子丢失量均无显著差异 (P >0 0 5 ) ;处理 2、 3种子丢失量均显著多于处理 4。在两样地中 ,不仅处理 2中饱满种子与虫损种子丢失量差异均显著 (样地 1:t =2 4 0 7,P <0 0 5 ;样地 2 :t =2 6 5 ,P <0 0 5 ) ,而且处理 3中亦然 (t=3 2 0 9,P <0 0 5 ;t =3 0 92 ,P <0 0 5 ) ;两样地中被啃咬的饱满种子都显著多于虫损种子 (χ2 =14 75 ,P <0 0 5 ;χ2 =9 85 ,P <0 0 5 )。标记重捕结果显示该地区啮齿动物群落包括朝鲜姬鼠等 4种小型哺乳动物 ,其中朝鲜姬鼠占啮齿动物群落的 74 4 %。以上结果说明该地区辽东栎种子主要扩散者是啮齿动物 ,鸟类和无脊椎动物对种子扩散无明显影响 ;地表微环境可降低种子被取食的几率 ;啮齿动物优先选择饱满种子 ,对种子质量有明显选     

重组人GM—CSF／MCAF融合蛋白的变性、复性及纯化研究

医学科学院生物工程研究所 北京 100071)摘 要 人粒细胞巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)和单核细胞趋化激活因子(MCAF)融合蛋白在大肠杆菌中高效表达后,表达产物以包涵体形式存在。包涵体经分离和洗涤后,探索了rhGM—CSF／MCAF变性和复性的合适条件。复性后的样品经Sephadex G-75凝胶过滤和CM—Sepharose FF离子交换两步层析,得到了具有生物学活性的SDS—PAGE纯的rhGM-CSF／MCAF。Western blot检测表明,纯化的rhGM—CSF／MCAF能分别与GM—CSF和MCAF抗体发生特异反应。     

共表达人p53、GM-CSF和B7-1基因的重组腺病毒的构建

 为开展肿瘤的复合基因治疗 ,构建以串联方式携带人野生型p53、GM CSF和B7 1基因的重组腺病毒穿梭质粒pBB 1 0 2 .将pBB 1 0 2与腺病毒包装质粒GT40 50共转染 2 93细胞 ,通过细胞内同源重组获得重组腺病毒BB 1 0 2 .在 2 93细胞中扩增病毒 ,并通过氯化铯密度梯度超速离心纯化病毒 ,获得高滴度和高纯度的病毒 .分别经免疫组织化学分析、ELISA和流式细胞分析 ,检测BB 1 0 2介导的人野生型p53、GM CSF和B7 1基因在喉癌细胞Hep 2中的表达 .结果表明 ,BB 1 0 2能够有效地将其所携带的目的基因导入Hep 2细胞并使其在细胞中高效表达 ,表达高峰期为转染后 2～ 4d ,此后随时间递减 ,可持续 1 0d以上 .     

侵袭性肺曲霉菌患者血清半乳甘露聚糖动态变化及与CT影像学关系

目的观察侵袭性肺曲霉菌感染患者抗真菌治疗前后肺泡灌洗液及血清中半乳甘露聚糖(GM)的水平变化、CT影像学特征及血清中性粒细胞数与GM试验阳性率之间的关系,患者血清中性粒细胞值与GM试验阳性率之间的关系。方法连续性纳入60例确诊侵袭性肺曲霉菌感染患者,观察抗真菌治疗前后肺泡灌洗液和血清GM试验动态水平变化。单因素Logistic回归分析CT侵犯肺叶数、空气新月征、晕轮征、血清中性粒细胞值与GM的关系。结果抗真菌治疗前患者肺泡灌洗液GM平均值均高于血清GM平均值(0.62±0.08mg/L,60.0%;0.51±0.07mg/L,31.6%)。同抗真菌治疗前比,患者抗真菌治疗后1个月、2个月、3个月、6个月肺泡灌洗液GM值快速降低(P0.05),而血清GM数值缓慢降低,仅在第3个月、第6个月降低(P0.05)。患者CT侵犯肺叶数、晕轮征与肺泡灌洗液、血清中性粒细胞值GM试验阳性率显著相关。结论肺泡灌洗液及血清GM试验可作为IFD疾病诊断及治疗的重要辅助指标。CT影像学特征、血清中性粒细胞值与GM试验阳性率显著相关。     

具有GCSF活性的噬菌体展示肽

从NFS 6 0细胞中克隆了小鼠粒细胞集落刺激因子 (granulocytecolony stimulatingfactor,G CSF)受体的细胞因子受体同源区 (cytokinereceptorhomologous ,CRH)结构域 ,采用GST融合表达策略 ,实现了CRH结构域的表达 .以纯化的GST CRH融合蛋白为靶 ,从噬菌体随机环七肽库中筛选CRH结构域的结合肽 ,找到两组具有核心序列的噬菌体展示肽 .其中C2和C13噬菌体展示肽能刺激NFS 6 0细胞增殖 ,说明C2和C13噬菌体展示肽具有G CSF活性     

循环血中GM-CFC的性能研究

利用造血细胞体外琼脂培养技术,比较了狗的不同来源的GM—CFC增殖、分化性能和辐射敏感性。结果表明,在正常生理条件下循环血中GM—CFC集落产率约为骨髓的1/60;细胞集落开始形成时间较骨髓晚1天,细胞集落随培养时间(前3—5天)增加而增加,其增加速率约为骨髓的20%;辐射敏感性D_0值为0.34Gy,明显低于骨髓中GM—CFC的D_0值(0.82Gy)。造血干细胞动员剂动员后血中GM—CFC数量明显增加,细胞集落增加速率约为骨髓的59%,D_0值为0.72Gy。从而为循环血干细胞移植疗效提供了实验依据。     

美国农民为何垂青GM作物

AgBiotechReporter 2 0 0 2年 2月 19卷 2期第 2页报道 :美国《芝加哥论坛报》最近宣称 ,根据对 30 0余名衣阿华州农民的调查 ,认为与使用常规种子比较 ,使用转基因 (GM )种子的开支并未减少。上述结论是由美国衣阿华州立大学Leopold持续农业研究中心副主任MichaelDuffy ,根据美国农业部收集的资料作出的。Duffy发现 ,一般而论 ,种植GM耐除草剂大豆时的除草剂支出确实低于种植常规大豆。但由于GM对除草剂大豆不仅单产较低 ,而且种子的成本较高 ,所以种植GM大豆的实际开支并不低于常规大豆。又如种植GM抗虫玉米 ,虽然可取得较高的单产…     

AM菌根与不同施磷量对烤烟后期部分生理指标的影响

在盆栽试验中设置5种磷肥水平,接种2种AM真菌(Glomus mosseae;G．caledonium)研究了对烤烟后期生长的影响。结果表明,AM真菌与烤烟能形成良好的共生关系,显著影响了烤烟后期生长,接种AM真菌处理对烤烟烟叶中超氧化物歧化酶(Superoxide dismutase,SOD)活性、脂类过氧化产物丙二醛(Malondialdehyde,MDA)和可溶性蛋白含量的影响显著,与不接种相比,接种AM真菌可显著提高烟叶中SOD活性,G89增加了39．7％,GM为35．5％;在单一施磷水平上,接种除GM4外均比不接种的SOD活性高,且G89在低磷水平(每千克土施P2O5 0、0．056g)上优于GM,而GM在较高磷水平上(每千克土施P2O5 0．112、0．224g)高于G89。此外接种真菌不仅有助于叶绿素含量提高,而且可减缓叶绿素降解。不同真菌处理间作用效果存在一定差异。施磷水平对烤烟后期生长也有一定影响。     

CSF的临床试验捷报频传

集落刺激因子(CSF)初期临床试验的结果正开始收集,这些结果似乎证实了早期的结论,即CSF确可增加白细胞的数量、减轻感染,并只有很小的副作用。例如,每天以每公斤体重用3～60mg的Amgen的rDNA粒细胞CSF(G-CSF)处理5位患先天性粒细胞缺乏症的病人9～13个月时,5位患者的白细胞数都有了提高,同时,感染的发生率和严重程度都显著下降。在这项研究之前,患者们每年平均要有91天     

低能量激光对造血细胞的增殖作用

激光能刺激造血细胞增殖,促使粒-巨噬细胞集落形成单位(GM—CFUc)增多。从人脐带血中分离制备的有核细胞,加入集落刺激因子(CSF)后,形成的GM—CFUc为18.6±12.6/10~4;如果加入的CSF是经激光照射后的细胞制成的,其GM—CFUc为40.5±20.2/10~4;若先用激光照射脐带血的有核细胞,在培养时加入的是未经激光处理细胞制成的CSF,也有增殖效应,GM—CFUc为36.5±18.5/10~4;如果脐带血有核细胞和制备CSF的细胞都用低能激光照射,就可以见到GM—CFUc明显地增多,其值为57.4±41.2/10~4是未经激光处理者的三倍。表明激光照射脐带血有核细胞及制备CSF的细胞均可使GM—CFUc增殖。     

影响杏黄兜兰种子萌发的因素

通过在不同条件下杏黄兜兰 (Paphiopedilumarmeniacum)种子萌发的观察 ,对影响其萌发的诸因子报道如下 :1)果实的生长期与种子的萌发率有关。实验表明种子采自生长期为 6 0d的果实 ,发芽率为 3 5 % ,采自 12 0d的果实 ,发芽率为 4 0 % ,采自 180d的果实 ,发芽率为 18 3%。 2 )培养基也会影响到种子的萌发 ,种子在 1 5MS内培养 ,萌发率明显高于培养于MS ,RE和改良HyponexNo 1内的种子。 3)培养基 (1 5MS)掺入添加物也会影响到种子的萌发率 ,如掺入 10 %椰子水会促使种子的萌发率达到很高的水平 ,掺入马铃薯泥 (5 0g L)或胰化胨 (2g L) ,种子的萌发率会达到较高的水平 ,而掺入香蕉泥则会对种子的萌发率产生负面影响 ,掺入活性炭 (2g L)会促使种子萌发和幼苗发育。 4 )与固态培养基相比 ,种子在液体悬浮培养基内的萌发速度更快 ,幼苗更为整齐划一。     

土埋深度影响物种水平的种子质量-种子出苗关系

种子出苗对种间关系和群落组成具有重要影响。种内研究表明种子质量与种子出苗之间存在正相关关系, 但这种关系很少在物种水平进行检验, 尤其是在不同土壤埋藏深度条件下。为此, 该文开展了一个因子实验(10种植物和5种土埋深度(0、1、2、4和8 cm))以检验是否在不同土层中“种子质量-种子出苗之间的正相关关系”始终存在。该文在不同土埋深度播种50粒种子(重复5次), 连续30天观测种子出苗, 并提出了一个耐土埋性指标。结果表明: (1) 10种植物的最适出苗深度为0-2 cm土层; 6种植物的最大出苗率发生在1 cm土埋深度。(2)种子质量与耐土埋性之间存在显著的正相关关系, 种子质量越大耐土埋性越强, 适宜出苗的土层越深。(3)当土层较深(4或8 cm)时, 种子出苗率和持续出苗时间随种子质量增加而增大, 种子出苗率与持续出苗时间之间存在正相关关系; 这些关系在较浅土层(0、1或2 cm)并不存在。这些结果有助于进一步理解种子大小与出苗之间的关系, 以及种子出苗过程中的策略。     

土埋深度影响物种水平的种子质量-种子出苗关系

种子出苗对种间关系和群落组成具有重要影响。种内研究表明种子质量与种子出苗之间存在正相关关系,但这种关系很少在物种水平进行检验,尤其是在不同土壤埋藏深度条件下。为此,该文开展了一个因子实验(10种植物和5种土埋深度(0、1、2、4和8cm))以检验是否在不同土层中"种子质量-种子出苗之间的正相关关系"始终存在。该文在不同土埋深度播种50粒种子(重复5次),连续30天观测种子出苗,并提出了一个耐土埋性指标。结果表明:(1) 10种植物的最适出苗深度为0–2 cm土层; 6种植物的最大出苗率发生在1 cm土埋深度。(2)种子质量与耐土埋性之间存在显著的正相关关系,种子质量越大耐土埋性越强,适宜出苗的土层越深。(3)当土层较深(4或8 cm)时,种子出苗率和持续出苗时间随种子质量增加而增大,种子出苗率与持续出苗时间之间存在正相关关系;这些关系在较浅土层(0、1或2 cm)并不存在。这些结果有助于进一步理解种子大小与出苗之间的关系,以及种子出苗过程中的策略。     

粉防己碱拮抗豚鼠庆大霉素急性肾损伤的实验研究

目的 :探讨粉防己碱 (Tet)在庆大霉素 (GM)急性肾损伤中的拮抗作用。方法 :将豚鼠分为对照组、Tet组、GM组和Tet+GM组 ,于第 1 1d留取尿标本和肾组织 ,测定尿中NAG活性 ,观察肾组织学改变 ,用免疫组化技术测定Actin和TGF β1 在肾脏的表达。结果 :光镜和电镜显示Tet+GM组肾脏病理变化比GM组轻 ,细胞凋亡也明显少于GM组。Tet+GM组NAG活性比GM组低 (P <0 .0 1 ) ,而TGF β1 和Actin的表达在Tet +GM组高于GM组(P <0 .0 1 )。结论 :Tet能明显降低GM所致的急性肾损伤时NAG活性 ,减少Actin的破坏和细胞凋亡 ,诱导内源性TGF β1 蛋白表达水平上调 ,对GM急性肾损伤有拮抗作用