DNA芯片技术在食品病原体检测中的应用

病原体的存在,尤其是食品中的病原体,给人类健康带来了威胁。DNA芯片技术是一种非常有效的病原体检测工具,具有众多传统检测方法所不具备的优势,受到广泛关注。我们简要论述了DNA芯片在细菌病原体、寄生虫、病毒病原体、微生物耐药性等的检测中的应用,并进一步综述了DNA芯片技术在食品检测中存在的问题、解决方法及发展方向。     

低场核磁共振检测食品中总无机硫

在食品、药材的生产加工过程中,经常加入不同价态的含硫化合物进行漂白、防腐和抗氧化。过量使用这些物质会对人体产生损害。因此,应加强对这些物质的检测。本文中,笔者报道了一种基于低场核磁共振技术的检测食品中总无机硫含量的新方法。提出了一种简单的前处理方法,利用过氧化氢(H2O2)将食品样品中所有无机硫氧化至最高价态(硫酸根)。制备了一种含钡盐的水凝胶作为检测试剂。利用Ba2+和SO24-之间的相互作用改变水凝胶中的化学环境,带来质子弛豫时间的改变。在模拟实验中,应用低场核磁共振分析仪测量了凝胶体系在不同浓度Na2SO4溶液中的横向弛豫时间T2,初步得到了T2与SO24-浓度之间的关系曲线。本研究提出的方法成本低、耗时短、前处理简单,有望用于食品中无机硫的快速检测。     

新型磁性分子印迹电化学传感器对食品中敌草隆的检测

将分子印迹技术与电化学相结合,构建了能同步提取和检测敌草隆的快速新型电化学传感器。采用表面印迹法合成了对敌草隆具有特异性吸附功能的磁性分子印迹聚合物,通过磁分离快速提取食品介质中的敌草隆;进一步通过磁吸附作用,将磁性印迹材料固定在磁性玻碳电极表面,在含有KCl的铁氰化钾和亚铁氰化钾的混合溶液中,利用示差脉冲伏安法测定敌草隆含量。该方法在0. 000 4～0. 03 mmol/L敌草隆浓度范围内有良好的线性关系(R2=0. 992 9),检测限为1. 3×10-5mmol/L。在实际样品自来水、茶饮料、大白菜中的加标回收率为95%～110%,相对标准偏差0. 7%～8. 1%,能较好地应用于实际样品的检测。综上,此传感器能实现提取检测一体化,具有较好的实时检测能力,其方法灵敏度高、重现性和稳定性较好,在食品安全领域具有很好的应用前景。     

黄酮化合物色谱保留时间与其三维结构的关系研究

利用比较分子相似性指数分析（CoMSIA）方法,结合黄酮类化合物含有较多羟基、易形成较强分子内氢键的特点,建立了黄酮类化合物色谱保留时间与其三维结构的关系模型,以探讨黄酮类化合物色谱保留时间预测的新方法。模型交叉验证相关系数q2值为0．705,非交叉验证相关系数r2为0．981,表明模型具有较好的预测能力。该研究结果对进一步开展黄酮类化合物液相色谱保留参数与三维结构关系的研究提供了思路和方法。     

嗜热菌玉米黄质在不同酸碱介质中对脂质体膜的稳定性

嗜热菌玉米黄质（thermozeaxanthins,TZS)是从嗜热菌的磷脂提取物中分离得到的胡萝卜素单葡萄糖脂肪酸酯化合物,具有两亲性结构,通过检测包裹在脂质体内的荧光物质的漏出程度,来评价在不同pH缓冲液中TZS对脂质体膜的影响。脂质体由天然卵磷脂（eggPC)、大肠杆菌磷脂酰乙醇胺（E.coliPE)或不同碳链长度和饱和度的二棕榈酰磷脂酰胆碱（DPPC）、二油酰磷脂酰胆碱（DOPC）磷脂形成,结果表明：在pH5.0的缓冲液中,含0.01molTZS的脂质体比单纯由磷脂形成的脂质体要稳定,在pH8.2和9.0的环境中,其稳定作用不明显;由eggPC或E.coliPE与TZS形成的脂质体的稳定性在同样条件下要优于由DPPC或DOPC与TZS形成的脂质体。在pH6.5的缓冲液中,含有TZS的脂质体与对照脂质体的稳定性相近。TZS对脂质体的影响取决于TZS与磷脂双层膜的相互“匹配”,邓与磷脂的脂肪烃链的长度、饱和度有关。     

苯丙烯酰5-羟色胺衍生物的分布、提取及其生物活性的研究进展

本文评述了苯丙烯酰5-羟色胺化合物的基本结构和理化性质、在植物中的分布与生物合成、提取、检测方法和生物活性作用,指出了其在功能食品开发和新药创制方面的应用前景.     

饮料中合成色素赤藓红的快速检测

食品加工过程中添加的人工合成色素不仅不能提供营养物质,而且某些合成色素会危害人体健康,诱发中毒甚至癌症。赤藓红即是人工合成色素中的一种,常用于食品加工制品和饮料中,部分厂家为了改变产品外观,吸引消费者购买,滥用赤藓红色素。基于表面增强拉曼光谱(SERS)方法和便携式拉曼光谱仪,提出了一种赤藓红的现场快速筛查方法。该方法只需对疑似含有赤藓红的饮料进行简单的前处理,即可进行SERS检测。前处理和测试的总时长不超过15 min,检出限在0. 5 mg/kg水平,有效满足现场快速检测的需要。     

可视化分析在病原体核酸现场快速检测中的研究进展

核酸检测因灵敏度高、特异性强而被广泛应用于病原体筛查与检测。随着检测需求的增加和扩增技术的发展，核酸检测方法逐渐向简单、快速、低成本方向发展。作为核酸检测“金标准”的实时荧光定量PCR法依赖昂贵的荧光读取设备和专业的操作人员，并不适用于病原体的现场快速检测。可视化检测方法无需依赖激发光源或复杂的设备，将可视化检测方法与快速、高效的扩增技术结合，能够以更直观、便携的方式呈现检测结果，具有即时检测(point-of-care testing,POCT)的潜力。本文对与扩增技术、CRISPR/Cas技术结合的可视化分析在病原体核酸快速检测中的应用及优缺点展开综述，以期为基于病原体核酸的POCT策略提供参考。     

多重环介导核酸等温扩增技术检测血液中常见病原体

背景：血液安全性筛查是输血前必要检测项目。目前临床采用血清学检测技术,存在较长的检测窗口期,易产生假阴性检测结果,造成输血交叉感染。目的：建立多重环介导核酸等温扩增技术,实现在一管反应体系内同时检测四种病原体：乙肝病毒,丙肝病毒,艾滋病毒和梅毒螺旋体。方法：通过限制性酶切处理多重环介导核酸等温扩增产物,利用酶切产物的长度分析扩增产物的种类,从而分析待测样本中含有何种血液病原体。结果：检测164例临床样本,其检测结果可以通过琼脂糖电泳,聚丙烯酰胺凝胶电泳及芯片电泳分析,且均可实现对多重扩增产物的酶切片段进行区分和鉴别。结论：多重环介导核酸等温扩增技术可以同时单管检测多种待测血液病原体,可以为临床提高简单、快速、高灵敏和高特异的检测技术。     

染色体DNA指纹图法——一种用于病原微生物种、株鉴定的新方法

<正>DNA探针技术在临床微生物学诊断中有巨大潜力,它提供了快速、价廉地鉴定在合成培养基上不易生长的病原体的可能性,包括检测携带已知毒力因子和抗生素抗性基因的病原体株,同时可以直接检测临床标本和污染食品中的传染原。目前已有大量有价值的资料,详细综述了此技术在这些方面和微生物学其它方面的应用(Highfield和Dougan,1985;Edberg,1986;Goldmann,1987;Miotti,1987;Tenover,1988;Landegren等,1988)。 在微生物鉴定领域,诊断用探针已可购得,可用于检测各种菌种,包括嗜肺军团菌、结核杆菌、淋球菌、肠道致病性大肠杆菌、肺炎支原体和沙门氏菌某些血清型(Tenover,1988)。另一应用引起了流行病学家的兴趣,即利用探针检测提供的DNA指纹图对医院内和社会的疾病爆发进行研究和控制,因为这些DNA指纹图对核苷序列中较小的基     

食品中环境激素的检测方法研究进展

环境激素是一类能够扰乱生物体正常平衡激素水平的外源性物质,长期接触可能导致人体的生殖系统问题、心血管疾病、肝脏和心脏系统问题等。在生产过程中一旦生产原料的质量没有得到严格控制,就可能导致后续生产所得的日用品、食品、饮料、饮用水等中含有影响人体健康的环境激素。因此,针对食品中环境激素含量的快速灵敏检测方法亟待开发。本文中,笔者基于环境激素的结构特点和物化特性,综述了目前针对环境激素类小分子的检测方法的研究进展,对传统的色谱、质谱检测方法的原理和检测水平进行总结,并重点介绍了基于化学和生物传感器的新型传感检测方法的检测原理、研究现状及其在食品安全中的应用,以期为后续研究提供参考。     

Smart Amp快速检测技术及其应用

SmartAmp是一种新的DNA等温扩增技术,具有操作简单、快速、成本低、灵敏度高、特异性强、背景低等优点。目前已在临床基因多态性检测、感染性疾病诊断等方面初步应用,为临床快速诊断提供了帮助,在食品和环境中病原体检测领域也显示了极大的应用发展潜力。我们简要概述SmartAmp技术原理、特点及其应用前景。     

溶血磷脂对磷脂脂质体行为和结构的影响

利用差示量热扫描、荧光标记和X-射线衍射法测定了16:0溶血磷脂酰胆碱(LPC)、二棕榈酰磷脂酰胆碱(DPPC)混合脂质体的物化性质:脂双层相变温度、相变热熔、荧光偏振度、双层脂酰链的厚度,证明含有摩尔分数为14.1%和27.0%LPC的DPPC脂质体可以被LPC诱导呈交插脂双层结构,而交插的深度是LPC浓度的函数,当含量超过摩尔分数为30%LPC,混合脂质体趋向于微团化,脂双层膜结构逐渐被破坏,直至最后形成微团结构.     

土拉弗朗西斯菌胶体金免疫层析快速检测方法的建立

目的建立胶体金免疫层析技术快速定量检测土拉弗朗西斯菌。方法利用胶体金标记和双抗体夹心免疫层析技术,建立土拉弗朗西斯菌的快速检测方法,评价其特异性和敏感性,并拟合检测曲线进行定量检测。在面粉、饼干、果冻、梨汁等食品样品中添加土拉弗朗西斯菌的FopA蛋白模拟污染样品,评价该方法对固体、半固体、液体等食品样品的检测能力。结果该法可在10min内完成定性和定量检测,灵敏度为750ng／ml,线性范围750～24000ng/ml、回收率为56．7％-89．2％。结论所建立的检测土拉弗朗西斯菌的胶体金免疫层析方法,能快速、灵敏、特异、准确地检测样品中的土拉弗朗西斯菌,适用于现场快速检测。     

钙库调控的钙通道Orai1体外研究方法的建立

目的:建立钙通道Orai1的体外研究方法。方法:利用脂质体重组技术,将体外纯化的Orai1蛋白重组到脂质体膜上,利用蔗糖密度梯度离心来检测其重组效率及Orai1蛋白在脂质体膜上的结构,并利用钙染料Fura-2检测脂质体内钙离子的释放。结果:成功制备了脂质体及体外纯化了GST-Orai1融合蛋白,蔗糖密度梯度离心结果证明GST-Orai1蛋白成功重组到脂质体上,以及Orai1蛋白以多聚体的形式定位在脂质体膜上。钙离子释放实验证明脂质体内钙离子包装完好,可用于后续Orai1钙通道的功能研究。结论:利用脂质体重组技术建立了一种新的Orai1的研究方法,能够更直接有效地研究其功能及其活化机制。     

基于过氧化物模拟酶的电化学传感器的制备及其在食品检测中的应用

过氧化氢(H2O2)是一种极强的氧化剂,在食品中作为加工助剂主要起漂白、防腐作用,其残留对人体产生很大的危害,引发食品安全问题。因此,食品中的过氧化氢检测具有重要的现实意义。本研究中,笔者以水热合成法制备了3种过氧化物模拟酶,并对其活性进行了考察。将催化活性最好的Fe Co纳米复合材料修饰于金电极表面制备了H2O2电化学传感器。电化学测试结果表明:在小于1 000μmol/L的浓度下,标准曲线为i=0. 014 1c+8. 042(R2=0. 998);大于1 000μmol/L时,标准曲线为i=0. 007 4c+13. 618 (R2=0. 997),检测限(3σ/s)为4. 94μmol/L。该传感器具有快速稳定的电化学响应和较宽的线性范围,检测限低于食品安全国家标准(GB 5009. 226—2016)中的定量限3 mg/kg,即88. 2μmol/L,在食品检测中展现了良好的应用潜力。     

简化核酸提取过程在病原体核酸检测中的应用现状和发展趋势

简化核酸提取过程相较于经典的试剂盒法和全自动核酸提取技术,凭借其简便的操作步骤、便携易用的仪器设备和简单的人员培训等优势在病原体核酸检测中得到广泛应用,为实现病原体核酸的快速检测和现场检测(Point-of-care testing,POCT)奠定了良好的基础。本文比较了不同的核酸提取方法,对简化核酸提取过程的方法学进行综述,讨论其在病原体核酸检测领域中的应用现状,并展望其发展趋势。     

多烯脂肪酸对磷脂胆固醇液晶态结构影响机理

用小角Ｘ 射线散射法、３１Ｐ 核磁共振技术和扫描隧道显微镜技术,对多烯脂肪酸多相脂质体的液晶态结构进行了研究。实验结果表明：胆固醇、多烯脂肪酸、非离子表面活性剂均对ＰＥ 脂质体的液晶态结构有明显的影响。在含有高效分散剂的磷酸缓冲溶液中制成的液晶态油酸多相脂质体和亚油酸多相脂质体均由片层六角相和片层立方相组成, 而蓖麻酸多相脂质体由立方六角相组成。     

PCR增强剂在核酸体外扩增检测技术的研究进展

在各种高致病性病原体、禽流感病毒、食源性微生物等引起的疾病随时大规模流行的背景下,利用聚合酶链式反应（polymerase chain reaction,PCR）技术对第一例或第一波病例的快速实验室诊断显得尤为重要,同时发展出多种以PCR技术为基础的检测技术以便更加快速、高通量、敏感地对疾病进行诊断、预防或预测。然而,在实际病原体检测中,常常出现灵敏度低、准确性差的结果。PCR增强剂是在PCR及PCR衍生技术中添加的一类物质,其可从产率、特异性、灵敏度等方面提高核酸扩增性能,从而优化核酸检测,解决病原体检测的应用瓶颈,为第一例病原体检出节约宝贵的时间。结合以PCR为基础的核酸体外扩增检测技术对PCR增强剂在其中的应用、优缺点、作用机理进行介绍,以期为病原体核酸检测的实际应用提供一些参考。     

柠檬苦素类化合物抗病原体作用及机制研究进展

柠檬苦素类化合物是高度氧化的三萜类化合物,对动植物病原体表现出抑制作用,具有一定的抗菌活性,将其作为一种天然的抗病原体物质具有很好的研究价值和应用潜能。本文将综述柠檬苦素类物质对病原体的影响、作用机制以及柠檬苦素类物质的吸收代谢情况,以期为柠檬苦素类化合物应用于食品、医药等行业提供基础理论参考。