Viili乳制品中干酪乳杆菌的分离鉴定

从引进Viili乳制品中筛选、鉴定出3种优良乳酸菌。采用平板分离法从Viili乳制品中分离3株乳酸菌,通过表型1、6S rRNA的PCR扩增、克隆、测序鉴定。3株乳酸菌的表型鉴定结果符合伯杰细菌鉴定手册中乳杆菌属的干酪乳杆菌,16S rRNA序列同源性分析结果表明3株分离菌与干酪乳杆菌的同源性分别为99.93%、100.00%9、9.78%,从Viili乳制品分离到3株干酪乳杆菌。     

应用PMA-qPCR方法快速准确检测发酵乳制品中副干酪乳杆菌活菌的研究

目的 建立快速、准确检测发酵乳制品中副干酪乳杆菌活菌的方法.方法 发酵乳制品中副干酪乳杆菌先经PMA处理后,采用沸水浴的方法提取副干酪乳杆菌基因组,然后通过qPCR方法检测发酵乳制品中的活菌.结果 副干酪乳杆菌经90℃处理6 min,即为膜损伤菌:PMA能够抑制107 CFU/mL死菌DNA的扩增,而不影响活菌DNA的扩增;PMA-qPCR能够准确检测到样品中活菌.结论 建立了一种快速、准确的方法检测发酵乳制品中的副干酪乳杆菌活菌.     

嗜热链球菌S-3对发酵乳品质的影响

本文从传统乳制品中筛选出一株产粘能力强的嗜热链球菌S-3,其发酵的酸奶粘度和保水性优于不产粘菌株及添加食品添加剂的发酵乳。该菌株与保加利亚乳杆菌协同发酵具有优势互补的效果,可以在较短的时间内获得粘度高的酸奶。     

阴道中益生特性乳杆菌的分离与功能评价

目的 分离健康女性阴道中的乳杆菌并鉴定其益生特性,为开发治疗妇科疾病的复方益生菌制剂提供新型菌株。方法 采集健康女性阴道分泌物并分离筛选乳杆菌,通过16S rDNA序列分析鉴定乳杆菌分离株,并对其产酸性能、产H2O2能力、抑菌能力、产生物膜能力进行检测。结果 从50名健康女性阴道内共分离出179株乳杆菌,其中卷曲乳杆菌101株、詹氏乳杆菌42株、格氏乳杆菌26株、植物乳杆菌5株、唾液乳杆菌3株以及干酪乳杆菌2株。179株乳杆菌中有146株具有产酸能力,发酵液pH值的最低的5株菌分别为卷曲乳杆菌J3、卷曲乳杆菌J8、詹氏乳杆菌J87,植物乳杆菌J75以及格氏乳杆菌J35,其pH分别为4.20、4.23、4.24、4.26及4.36;产H2O2弱阳性菌株有87株、阳性有37株、强阳性有9株,这9株菌分别为卷曲乳杆菌J3、卷曲乳杆菌J8、卷曲乳杆菌J20、詹氏乳杆菌J87,詹氏乳杆菌J90、詹氏乳杆菌J15、格氏乳杆菌J11、植物乳杆菌J75、植物乳杆菌J69以及植物乳杆菌J40;能拮抗大肠埃希菌的菌株有115株、拮抗金黄色葡萄球菌的有84株、拮抗白假丝酵母的有52株;经统计,对三者同时有拮抗作用且作用最强的只有6株,分别为卷曲乳杆菌J3、卷曲乳杆菌J50、卷曲乳杆菌J62、詹氏乳杆菌J87、詹氏乳杆菌J16和格氏乳杆菌J66;不同乳杆菌产生物膜能力数值范围在1.0~5.4,卷曲乳杆菌、詹氏乳杆菌、干酪乳杆菌的生物被膜形成能力显著高于其他三种菌（P<0.05）。在全部179株菌中,卷曲乳杆菌J3和詹氏乳杆菌J87既具有强的产酸能力和产过氧化氢能力,又有较强抑菌活性,同时产生物膜能力也最强。结论 卷曲乳杆菌J3和詹氏乳杆菌J87具有优良的生物学特性,有望成为用于治疗妇科疾病微生态制剂的备选菌株。     

瑞士乳杆菌水解乳清蛋白发酵条件的研究

利用益生菌发酵制备具有生物学功能特性的发酵乳制品,特别是在构建功能性食品方面,对人类的健康及人体内共生菌群的开发具有重大意义。以瑞士乳杆菌(Lactobacillushelveticus)为研究菌种,对瑞士乳杆菌利用乳清粉的发酵条件进行了系统的研究,并对发酵条件进行了优化。实验结果表明,瑞士乳杆菌在33℃,发酵液的初始pH为5.5,接种量为1.5%时蛋白酶活力最强,发酵液中游离氨基酸含量为3.004μg/ml活菌数达到108cfu/ml。通过对瑞士乳杆菌的发酵动力学的研究,确定了该菌生长特性,以及乳清蛋白水解进程曲线和产酸情况。     

藏北地区传统发酵乳中乳杆菌的多样性分析

摘要：【目的】针对藏北地区的乳杆菌来源及种属,对其多态性进行研究。【方法】采用ERIC-PCR技术和NTSYS-pc2.1软件对从藏北地区牧民家庭制作的发酵乳制品中分离出的77株乳杆菌进行多样性分析。【结果】ERIC-PCR扩增出的条带清晰,重复性好,多态性高。聚类分析表明,在0.73的水平上,77株乳杆菌共分为4大类群：干酪乳杆菌群A1、发酵乳杆菌群A2,瑞士乳杆菌群A3和植物乳杆菌群A4。其中,干酪乳杆菌群A1和发酵乳杆菌群A2分别占供试乳杆菌的35.06%和61.04%,为优势菌群。进一步对优势菌群     

一株短乳杆菌所产细菌素的部分特性

为了研究分离自内蒙古传统发酵乳制品——"焦克"的短乳杆菌KLDS1.0373所产细菌素的部分生物学特性(抑菌谱,对酶、pH和温度的敏感性,作用方式)。短乳杆菌KLDS1.0373发酵液经硫酸铵沉淀和葡聚糖凝胶纯化后,测定其部分生物学特性,并采用Tricine-SDS-PAGE方法确定细菌素的分子量范围。结果表明:短乳杆菌KLDS1.0373所产细菌素的抑菌活性对热和pH不敏感,在100°C或121°C处理30 min后抑菌活力略有增强,可被多种蛋白酶失活,但对α-淀粉酶不敏感。该细菌素分子量约为3.8 kD,对多种革兰氏阳性和阴性菌有抑制作用,作用方式为杀菌。     

不同人群阴道乳杆菌分离比较的研究

目的比较细菌性阴道病患者、抗生素治疗后BV患者和健康妇女阴道内乳杆菌的分布差异。方法对124例(包括40例细菌性阴道病患者和23例抗生素治疗后细菌性阴道病患者)年龄为19~65岁的妇女阴道分泌物进行乳杆菌及产H2O2乳杆菌的分离和半定量计数。结果健康妇女阴道内乳杆菌检出率和活菌数量明显高于细菌性阴道病患者和抗生素治疗后细菌性阴道病患者(P<0.01);产H2O2乳杆菌是健康妇女阴道内优势菌,其检出率明显高于细菌性阴道病患者。结论阴道内乳杆菌特别是产H2O2乳杆菌是健康妇女阴道乳杆菌的重要成员,在防治细菌性阴道病发生中起重要作用,且对多种抗生素敏感。     

乳扇制品中乳酸杆菌的分离鉴定及16S rRNA序列同源性分析

目的乳扇是云南大理白族的一种传统乳制品,明确大理乳扇制品中乳杆菌的多样性及优势种群分布,为科学利用奠定基础。方法采用表型鉴定及16S r RNA鉴定方法,对10个家庭作坊的大理乳扇制品中的乳杆菌进行了分离鉴定。结果共分离到50株乳杆菌,通过表型鉴定为8个种,包括植物乳杆菌10株、德氏乳杆菌7株、发酵乳杆菌6株、干酪乳杆菌6株、棒状乳杆菌4株、鼠乳杆菌2株、弯曲乳杆菌3株和食果糖乳杆菌2株;06422和06430两株表型鉴定未能定种,进一步通过16S r RNA鉴定为植物乳杆菌和马酒乳杆菌,06422株与植物乳杆菌L.arizonensin、L.pentosus和L.plantarum P158的同源性分别是100%、100%和99.9%,与乳杆菌属其它种的同源性为83.4%(L.gallinarum)至93.5%(L.brevis),06430株与L.kefiranofaciens.subsp.Kefirgranum的16S r RNA同源性是99.9%,与乳杆菌属其它种的同源性为83.7%(L.plantarum P158)至96.3%(L.acidophilus)。结论大理乳扇制品中有9种乳杆菌,其优势种群为植物乳杆菌、德氏乳杆菌、发酵乳杆菌和干酪乳杆菌等四种。     

杭州地区发酵乳制品中乳酸菌发生耐药传播的安全性研究

目的对杭州地区市售发酵乳制品中分离鉴定的乳酸菌进行耐药传播的安全性分析,旨在揭示发酵乳制品中是否存在可传递耐药基因的超级耐药菌。方法自行分离鉴定的耐药乳酸菌,提取质粒并电泳分析是否存在质粒;以耐受叠氮化钠的大肠埃希菌J53作为受体菌进行质粒接合试验;若乳酸菌存在耐药现象,发现存在耐药质粒,且耐药性可通过质粒传播,评定为3级。乳酸菌存在耐药现象,发现存在耐药质粒,但接合试验未能证明耐药性可通过质粒传播,评定为2级。乳酸菌存在耐药现象,但未检测出耐药质粒,评定为1级。结果美丽健产品中分离的双歧杆菌（MLJ-G-2）和乳杆菌（MLJ-G-1）检测出含有质粒,但不会发生耐药转移,三种菌耐药危害等级分别为2、2、1。伊利产品中分离的双歧杆菌（YL-G-3）、乳杆菌（YL-G-1）、嗜热链球菌（YL-Q）检测出含有质粒,但不会发生耐药转移,四种菌耐药危害等级分别为2、2、1、2。味全产品中分离的双歧杆菌（WQ-G-3）、乳杆菌（WQ-G-1）、乳杆菌（WQ-G-2）、嗜热链球菌（WQ-Q）均检测出含有质粒,其中乳杆菌（WQ-G-1）、乳杆菌（WQ-G-2）会发生耐药转移,四种菌耐药危害等级分别为2、3、3、2。光明产品中分离的乳杆菌（GM-G-2）、乳杆菌（GM-G-3）、嗜热链球菌（GMQ）检测出含有质粒,乳杆菌（GM-G-2）会发生耐药转移,四种菌耐药危害等级分别为2、1、3、2。蒙牛产品中只分离的嗜热链球菌（MN-Q）检测出含有质粒,不会发生耐药转移,耐药危害等级为2。结论发酵乳制品中分离所得的乳酸菌81.2%的菌能检测出质粒,耐药性可能与质粒相关,存在潜在的生物安全威胁;18.8%的菌的耐药性可通过质粒接合发生传播,存在直接的生物安全威胁。     

乳酸菌产品中乳杆菌的检验方法初探

介绍了采用MRS肉汤与菌落总数测试片的结合使用计数法,来检测乳酸菌发酵的乳制品中所含乳杆菌的数量,并与国标法及其结果进行了对比,证明此改进法具有判断清晰、结果准确、所需培养空间小等优点,是一种比较有实际应用价值的乳杆菌计数方法。     

对阴道炎主要致病菌有抑菌活性乳杆菌的筛选及特性

目的 从实验室保藏的乳杆菌中筛选出对阴道炎主要致病菌有抑菌活性的乳杆菌,研究其生物学特性从而作为防治阴道炎的潜在益生菌株。 方法 采用琼脂扩散法检测乳杆菌对大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌和阴道加德纳菌的抑菌效果。采用共培养法探究乳杆菌在不同时间对白假丝酵母生长的抑制效果。检测乳杆菌产过氧化氢和产酸能力、对低pH环境的耐受性以及对家兔阴道黏膜的刺激性。 结果 植物乳杆菌LP45和鼠李糖乳杆菌LR519对大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌和阴道加德纳菌的抑菌效果最佳。经24 h共培养后,LP45和LR519对白假丝酵母的抑制率分别为95.27%和98.85%。LP45和LR519产过氧化氢量分别为11.28 μg/mL和15.15 μg/mL,能耐受pH 4.5酸环境。LP45和LR519复合菌在37 ℃培养48 h可持续产乳酸,且对家兔阴道黏膜无刺激性。 结论 植物乳杆菌LP45和鼠李糖乳杆菌LR519具有优良的生物学特性,可作为阴道微生态制剂的候选菌株来预防和缓解由菌群紊乱而引起的阴道炎症。     

短乳杆菌与植物乳杆菌的发酵特性

【背景】目前对于酸菜发酵的研究主要关注点是植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum),有关短乳杆菌(Lactobacillus brevis)在酸菜方面的研究报道很少。【目的】为了挖掘短乳杆菌的发酵性能并开发酸菜发酵剂,将2株短乳杆菌分别与1株植物乳杆菌进行组合并发酵酸菜,分析短乳杆菌对酸菜发酵品质的影响。【方法】分别测定短乳杆菌与植物乳杆菌的单菌株生长产酸性能、耐酸性及亚硝酸盐降解力,并将两菌种组合后发酵酸菜,分析1-7d内酸度、乳酸菌活菌数、亚硝酸盐含量及酸菜质构特性的变化趋势。【结果】相较于短乳杆菌Lb-9-2,短乳杆菌Lb-5-3的生长和产酸速率较慢、酸耐受力较弱,但其亚硝酸盐降解力较强。两株短乳杆菌分别与植物乳杆菌Lp-9-1组合后产酸力显著增强,并在3 d时达到最低pH值(约3.10);植物乳杆菌Lp-9-1的添加使酸菜中总体乳酸菌生长延迟,在5 d时达到最高活菌数;组合菌种的样品中亚硝酸盐含量在1-7 d内变化较为平缓,前5天内两个组合之间差异不显著;接种乳酸菌会降低酸菜硬度和弹性,发酵3d时Lb-5-3/Lp-9-1组合的硬度最大,感官评价得分最高。【...     

工业化生产格瓦斯的研究

选用保加利亚乳杆菌、乳酸乳球菌及产脱假丝酵母同于工业化格瓦斯生产。采用麦芽与焦香麦芽为原料,经保加利亚乳杆菌、乳酸乳球菌和产肮假丝酵母发酵生产格瓦斯,该产品香气浓郁,味道醇厚。     

滴虫性阴道炎患者阴道乳杆菌功能的改变与重建

探讨滴虫性阴道炎(TV)患者阴道乳杆菌的功能状态及口服甲硝唑治疗后阴道乳杆菌功能的重建情况, 为TV的乳杆菌补充治疗提供依据。

选择TV患者及健康非孕女性各30例, 采用前后对照、标准对照的方法, 检测患者治疗前后阴道乳杆菌功能(定植密度、乳杆菌分级、产酸能力、产H₂O₂能力、体外增殖能力), 研究TV患者阴道乳杆菌功能的变化和重建情况。

TV患者阴道乳杆菌定植密度为(16.90±7.51)个/HP, 乳杆菌分级正常率为26.67%, H₂O₂阳性率为60.00%, 体外培养24 h pH值为4.71, 24 h菌液浊度为42.9 MCF。TV患者治愈后阴道乳杆菌定植密度为(32.09±8.79)个/HP, 乳杆菌分级正常率为39.13%, H₂O₂阳性率为60.87%, 体外培养24 h pH值为4.62, 24 h菌液浊度为45.6 MCF。TV患者治疗前阴道乳杆菌定植密度显著减少, 乳杆菌分级异常, 产H₂O₂能力、产酸能力、体外增殖能力显著减弱(均P < 0.05)。患者治愈后阴道乳杆菌定植密度显著增加(P < 0.05), 但未恢复正常, 乳杆菌分级、产H₂O₂能力增加不明显, 产酸能力、体外增殖能力较治疗前增强, 但均未恢复正常。

TV患者阴道乳杆菌功能减退, 治愈后未能完全重建, 需帮助恢复阴道乳杆菌功能。

     

高效降解草酸乳酸菌的筛选

尿路结石70%~80%主要由草酸钙结晶构成。人体内的草酸一般通过肠道内微生物降解,经由粪便排出或在泌尿道吸收由尿液排出。本研究对市场上商品化的发酵乳制品、饮料和药品中的乳酸菌进行分离,得到37株菌,包括嗜热链球菌、保加利亚乳杆菌、干酪乳杆菌、鼠李糖乳杆菌、植物乳杆菌、嗜酸乳杆菌、动物双歧杆菌、长双歧杆菌、粪肠球菌、屎肠球菌和乳球菌,并检测这些菌株降解草酸的能力。结果提示,乳酸菌在体外能够有效的降低培养物中的草酸浓度,并筛选出了具有高效降解草酸能力的乳酸菌菌株。有望成为尿石症预防的新措施。     

新疆传统发酵乳品中乳酸菌与酵母菌的益生特性

目的 观察新疆传统发酵乳品中分离的14种菌株的生长特点及产酸能力,筛选出具有较强耐胆盐能力,并能在人工胃肠液中存活的菌株。方法 对10株乳酸菌和4株酵母菌进行生长曲线、pH、耐胆盐能力和耐人工胃肠液检测。结果 10株乳酸菌和4株酵母菌具有良好的生长曲线和产酸能力;马乳酒样乳杆菌具有较强的耐胆盐能力;希氏乳杆菌、马乳酒样乳杆菌、乙醇假丝酵母和东方伊萨酵母具有较强的耐人工胃液能力;乳酸乳球菌、哈尔滨乳杆菌、瑞士乳杆菌、马乳酒样乳杆菌、乙醇假丝酵母和东方伊萨酵母具有较强的耐人工肠液能力。结论 10株乳酸菌和4株酵母菌具有优良的益生特性,有望成为益生菌制剂的备用菌株。     

一株高ACE抑制活性乳杆菌的筛选鉴定、培养条件优化及其基因组分析

【背景】乳杆菌是人体肠道益生菌,其发酵乳中可检测到血管紧张素转换酶(Angiotensin converting enzyme,ACE)抑制肽。海洋蕴藏着丰富的微生物种质资源,分布着大量的乳杆菌。【目的】从高通量测序结果中发现渤海沉积物中分布着乳杆菌资源。为了进一步开发具有ACE抑制活性的海洋乳杆菌资源,提高乳杆菌发酵乳的ACE抑制活性,筛选瑞士乳杆菌(Lactobacillus helveticus)并对其特性进行研究。【方法】采用高通量测序技术从渤海沉积物中检测乳杆菌,并对其进行富集分离,对筛选出的乳杆菌进行16S rRNA基因鉴定和全基因组测序分析,测定该菌发酵乳的ACE抑制活性,并采用正交实验优化发酵条件。【结果】渤海沉积物中含有乳杆菌并成功筛选出一株瑞士乳杆菌GY-3,其发酵乳具有较高的ACE抑制活性。该菌在发酵温度37°C,接种量3%,且在脱脂乳培养基中添加1.0%葡萄糖,0.6%大豆蛋白胨,1.0%酵母浸粉,0.04%MnSO_4·4H_2O时,抑制活性最高,可达79.52%。通过对该菌基因组进行测序研究,发现其产ACE抑制肽涉及蛋白酶系统、多肽转运系统和肽酶系统。【结论】为扩大海洋源产ACE抑制肽的乳杆菌种质资源、开发高产ACE抑制活性的发酵菌株奠定了基础,进一步研究了如何提高乳杆菌产ACE抑制肽的水平,并对其基因组进行了研究,为今后生物学特性和ACE抑制活性机理的研究奠定了基础,并对降血压相关产品的开发具有重要意义。     

罗伊乳杆菌对致龋变形链球菌拮抗作用的研究

目的研究罗伊乳杆菌对变形链球菌的拮抗作用,初步了解产生拮抗作用的原因。方法利用罗伊乳杆菌无菌上清液,应用双层平板打孔法测定其抑菌效果,再通过滤纸片抑菌法对罗伊乳杆菌发酵的酸乳制品与普通酸乳制品对变形链球菌的抑菌作用进行比较,用饱和硫酸铵沉淀法分析产生拮抗作用的原因。结果罗伊乳杆菌有显著抑菌活性（P〈0.05）,仅罗伊乳杆菌的发酵乳样品对变性链球菌产生直径为6.3mm抑菌圈,80%饱和硫酸铵沉淀的细菌素抑菌活力最强,蛋白酶K处理后无明显抑菌圈。结论本研究证明了罗伊乳杆菌的代谢产物以及罗伊乳杆菌发酵的酸奶制品对致龋菌变形链球菌有着明显的拮抗作用。     

不同分离源植物乳杆菌的群体基因组分析

【背景】植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)广泛存在于植物、乳制品、肉制品、哺乳动物和昆虫的肠道等多种生态环境中。【目的】探究不同分离源L. plantarum基因组与其所在环境是否存在潜在的联系。【方法】利用比较基因组学对126株分离自植物、乳制品、肉制品、果蝇及哺乳动物肠道和口腔等部位的L. plantarum菌株基因组进行系统发育分析和功能基因组分析,解析不同分离源菌株间的亲缘关系和进化历程。【结果】果蝇分离株的基因组大小显著高于植物、哺乳动物肠道、肉制品和乳制品分离株(P0.05),植物和哺乳动物肠道、口腔等部位与肉制品分离株的基因组大小和编码基因数量无显著差异(P0.05)。基于单拷贝基因串联和核心基因系统发育树分析均发现,果蝇分离株和乳制品分离株分别集中聚集分布在某一分支中,其余分离源均匀分布在各个分支中。附属基因分析结果与系统发育树分析结果一致。功能基因注释结果发现,果蝇分离株的环境特异性基因参与低聚果糖和几丁质代谢,乳制品分离株的环境特异性基因参与mazEF毒素-抗毒素系统和CRISPR系统。【结论】植物乳杆菌分离株为适应较为独特的果蝇和乳制品生境而发生了适应性进化。本研究为植物乳杆菌适应性进化提供了新见解,同时为解析菌株的进化历程提供了理论基础。