树突细胞联合细胞因子诱导的杀伤细胞对急性白血病细胞的体外杀伤作用

目的:研究细胞因子诱导的杀伤细胞(CIK)与同源树突状细胞(DC)共培养后CIK细胞的表型、增殖活性的变化,及抗急性白血病细胞活性.方法:正常人外周血单个核细胞诱导DC和CIK细胞,将DC与CIK共培养,以CIK细胞单独培养为对照.用台盼蓝活细胞计数计算细胞扩增倍数,MTT法测定杀伤活性,流式细胞术分析免疫表型.结果:DC-CIK细胞增殖能力明显高于CIK细胞(P＜0.05); DC、CIK细胞共培养后,CD3+ CD8+、CD3+ CD56+双阳性细胞比率较同条件下CIK细胞组显著增多(P＜0.05);在2.5∶1-20∶1的效靶比范围内,DC-CIK共培养物对AML细胞的杀伤率显著高于CIK细胞(P＜0.05),且杀伤率与效靶比呈正相关.结论:DC-CIK细胞的增殖能力、对AML细胞的杀伤活性均高于CIK细胞,为DC-CIK细胞免疫治疗提供了实验和理论依据.     

小鼠胎肝造血基质细胞对CFU—E,BFU—E生长的体外调控作用

造血基质细胞是造血微环境的重要成分,它对造血干细胞和祖细胞增殖分化的影响已引起人们重视。本室建立的小鼠胎肝造血基质细胞系(MFLSC)为研究其在调控造血中的意义提供了方便条件。 以往研究证明,MFLSC可向培养上清液中释放多种造血活性物质,将此培养上清代替外源性刺激因子加入到半固体培养体系中可支持红系、粒系或由红、粒、巨噬细胞组成的集落(CFU—EGM)生长。MFLSC本身对CFU-GM生长的调控作用已有报道。本工作观察MFLSC对小鼠骨髓红系造血祖细胞生长的影响,旨在进一步认识小鼠胎肝基质细胞在调控造血中的作用机理。     

小鼠LAK细胞对红系祖细胞及多向造血祖细胞增殖的影响

小鼠脾细胞经重组人白细胞介素-2(rhIL-2)激活后对YAC-1,LP-3和WEHI-164等肿瘤细胞均有很强的杀伤活性。在CFU-E和BFU-E培养体系中,不同浓度LAK细胞与BMC直接加入或预温育4h后再培养,均能加强CFU-E和BFU-E增殖。低浓度LAK细胞(LAK/BMC为0.5)与BMC直接加入或预温育后再加入CFU-mix培养体系中,均能增强CFU-mix增殖,而高浓度LAK细胞和BMC(LAK/BMC=8.0)直接加入培养体系则抑制CFU-mix增殖;若共温育后再培养则非常明显地抑制CFU-mix增殖,CFU-mix仅为对照的17.6％。小鼠LAK细胞对造血祖细胞体外增殖具有调节作用,这种调节可能包括分泌某些细胞因子以及细胞间直接相互作用两种方式。     

小鼠骨髓树突状细胞对白念珠菌吞噬、杀伤作用的研究

目的体外分离培养小鼠骨髓树突状细胞(Dendritic Cell,DC)并与白念珠菌共同孵育,研究不同浓度的DC对白念珠菌的吞噬、杀伤作用,并研究随着共孵育时间的延长DC表型的变化及其吞噬、杀伤白念珠菌能力的变化。方法无菌条件下分离培养C57小鼠骨髓DC;倒置显微镜下观察DC的形态;Cellometer Mini细胞计数仪测定DC生长曲线及细胞直径变化;流式细胞仪检测DC及白念珠菌刺激后DC表面标志物CD11c及其表面分子MHCⅡ、CD40、CD80及CD86的表达;光学显微镜、激光共聚焦显微镜及流式细胞仪测定DC对白念珠菌的吞噬及杀伤作用。结果体外培养10d小鼠骨髓DC,倒置显微镜观察可见典型DC形态;随着培养时间的延长,细胞逐渐增大,培养第10天时,细胞直径分布最多的为10.2μm;生长曲线显示,DC呈倍数增长,第2~9天为细胞对数生长期,第9天左右增殖曲线达到顶峰。培养第10天,未经白念珠菌刺激的DC表面CD11c分子及CD80分子高水平表达,CD40、CD86及MHCⅡ低表达;经白念珠菌刺激后,DC表面CD11c分子、CD80、CD40、CD86及MHCⅡ均高表达,呈成熟DC表型。激光共聚焦(Laser Scanning Confocal Microscope,LSCM)及流式细胞仪(Flow Cytometer,FCM)检测DC对白念珠菌吞噬作用,当DC与白念珠菌的比例为1∶1时,随着共培养时间的延长(30min~1.5h),吞噬率无明显变化(P=0.063);当DC与白念珠菌比例为2∶1、1∶2及1∶4,随着DC细胞所占比例的减小,DC细胞吞噬作用增强,当比例为1∶4时,DC吞噬作用最强,且随着共培养时间的延长(30min~1.5h),吞噬率也明显上升,差异有统计学意义(P=0.003;P=0.002;P=0.002)。显微镜检测DC对白念珠菌杀伤率,可见随着时间的延长,各实验组的杀伤率下降(P=0.000);当DC∶白念珠菌=1∶1时,较2∶1时,杀伤率明显下降,但随着白念珠菌比例在一定范围内的增高(从1∶1到1∶4),杀伤率明显增高,差异有统计学意义(P=0.000)。结论小鼠骨髓细胞体外经GM-CSF诱导可培养DC具有较高的纯度,呈未成熟细胞表型;且每只C57小鼠可获得3×107总数的细胞,可满足一些实验的DC用量。经白念珠菌刺激后DC表型成熟;在一定的比率范围内,DC对白念珠菌有较强的吞噬及杀伤作用,其吞噬作用随着DC与白念珠菌比例的减小而增强。且随着两者作用时间的延长,DC对白念珠菌的吞噬作用逐渐增强而杀伤作用逐渐减弱。     

自然杀伤细胞和自然杀伤T细胞在动脉粥样硬化形成中的作用

动脉粥样硬化发生发展与免疫细胞参与的免疫反应密切相关,其中自然杀伤细胞主要是通过释放IFN-γ、穿孔素和颗粒酶等方式发挥生物学作用,自然杀伤T细胞通过释放多种细胞因子影响动脉粥样硬化形成,但其具体机制未明。本文就自然杀伤细胞和自然杀伤T细胞对动脉粥样硬化的影响做一综述,为动脉粥样硬化及其相关疾病的防治研究提供新的思路。     

小鼠胎肝造血基质细胞系对CFU—GM生长的调控作用

利用本实验室建立的小鼠胎肝造血基质细胞系(MFLSC)研究了造血基质细胞对粒-巨噬系造血祖细胞(CFU-GM)生长的影响。实验结果表明,MFLSC对CFUGM集落的生成有双向调控作用,即既有刺激性作用,又有抑制性影响。这种调控有体液因子之中介,亦有细胞与细胞间近距离的效应。文中讨论了MFLSC双向调控CFUGM生长的意义及其机理。     

杀伤细胞对肺癌小鼠Lewis细胞增殖的抑制作用

目的:探讨杀伤细胞对人Lewis肺癌细胞增殖的抑制作用。方法:选择成年健康雄性ICR小鼠46只,随机选取10只作为正常对照组,其余36只进行模型复制,然后将造模成功的30只小鼠随机分为实验组与模型组,每组15只。实验组予以尾静脉注射杀伤细胞1×107个/0.2 m L,1次/d,模型组与对照组予尾静脉注射生理盐水。ELISA方法测定TNF-α、IL-2和IL-4的含量,采用流式细胞仪检测凋亡率,四氮唑蓝(MTT)比色法检测癌细胞抑制率。结果:1实验组小鼠右腋下瘤体重量明显低于模型组,差异有统计学意义(P0.01);2透射电镜下观察实验组人Lewis肺癌细胞出现大量凋亡,而模型组人Lewis肺癌细胞几乎未凋亡,与模型组比较,实验组细胞凋亡较多,差异具有统计学意义(P0.05);3实验组小鼠脾上清液中IL-2、TNF-α和IFN-γ含量明显高于模型组和正常对照组小鼠,差异有统计学意义(P0.01)。结论:杀伤细胞能够通过活化淋巴细胞、分泌细胞因子来抑制体内、体外人Lewis肺癌细胞的增殖和生长,对临床具有指导意义。     

转录因子与造血调控

血细胞生成是一个极其复杂的过程,转录因子在这个过程中起到了重要的调控作用。而转录因子的表达具有阶段和细胞系特异性。在造血干细胞的增殖和分化、髓系和淋巴系细胞等的成熟过程中,众多转录因子既相互作用又表现出各自的特异性。转录因子数目较多,该文仅就一些与造血细胞分化、成熟相关的转录因子近年来的研究进展作一介绍。     

重组人IL6／2融合蛋白对6.5Gy照射小鼠造血功能恢复的影响

观察了ｈＦＰＩＬ６／２对６．５Ｇｙγ线照射ＮＩＨ小鼠第１０天造血功能恢复的影响。结果表明：照射小鼠连续４ｄ给予ｈＦＰＩＬ６／２２５０μｇ·ｋｇ－１·ｄ－１,其脾重、ＣＦＵ－８、骨髓有核细胞数及ＣＭ－ＣＦＵ分别比对照组增加５９．０％、２７８．５％、５７．９％和１３８．２％,统计学处理均有显著差异;对此四项指标的改善也明显优于２５μｇ组。另外,２５０μｇ剂量组小鼠外周血象３０ｄ的动态观察结果表明,ｈＦＰＩＬ６／２不但能明显提高红细胞和血红蛋白的最低值,而且能使血小板的恢复提前。提示ｈＦＰＩＬ６／２在促进血小板生成和促进红系造血方面可能具有良好的应用前景。     

THE EFFECT OF FETUIN AND OF SPLEEN EXTRACTS ON HEMATOPOIETIC PRECURSORS AND ON DIFFERENTIATED HEMATOPOIETIC CELLS IN IRRADIATED MICE

Injection of extracts from normal mouse spleen tissue into irradiated mice enhance the rate of regeneration of colony forming units (CFU-S) in the femoral marrow. This effect was most pronounced when spleen extract was injected between 24 hr before and 24 hr after the time of irradiation, and was observed only during the first week after a single injection of extract. Another result of injecting spleen extract was an immediate and transient decrease in the marrow cellularity and particularly in the number of mature myeloid cells in the marrow. Fetuin produced comparable effects on the rate of regeneration of CFU-S and on the numbers of mature myeloid cells in the marrow. On the basis of these results it is tempting to speculate that injection of spleen extracts and of fetuin primarily cause a rapid depletion of the marrow's granulocyte reserve. This in turn releases the precursor cell compartment from the inhibitory effects of cell–cell interaction and results in an acceleration of the rate of CFU-S regeneration. It is equally plausible that factors present in spleen extract and in fetuin cause a depletion of the marrow granulocyte reserve and, by an unrelated mechanism, directly accelerate the rate of regeneration of CFU-S.     

雌激素和孕激素对雌性小鼠甲状腺C细胞的影响

探讨降钙素在老年女性骨质疏松症发病中的作用 ,观察了雌、孕激素对雌性小鼠甲状腺 C细胞的影响。去卵巢小鼠 (OVX)分别肌肉注射苯甲酸雌二醇 (FB)、己烯孕酮 (HPC)和苯甲酸雌二醇加乙烯孕酮 (EB+HPC)两个月。用药剂量根据小鼠口龄和体重的不同而不同。采用免疫组织化学方法显示降钙素 (CT)阳性细胞并对其进行细胞形态计量学分析。结果显示 :(1)去卵巢小鼠与正常对照组相比 ,甲状腺 C细胞数目剧增 ,给予 EB、HPC、EB+HPC治疗的各组小鼠甲状腺C细胞数目与正常对照组水平相近。 (2 )各组小鼠甲状腺 C细胞的大小无明显改变 ,平均直径间无显著性差异 (P>0 .0 5 )。雌、孕激素缺乏可引起雌性小鼠甲状腺 C细胞增生。 C细胞增生也可能是雌激素缺乏引起的骨质疏松的后果     

荧光显微镜观察大蒜油对腹水癌细胞的影响

用吖啶橙染色,荧光显微镜观察大蒜油对—S180,昆明小鼠,U14 C57BL/6J小鼠和L1210DBA小鼠的癌细胞作用的影响,结果表明大蒜油有直接破坏癌细胞的DNA,RNA和分裂中期染色体的作用。给药后2—6小时作用最强,12小时后癌细胞数逐渐恢复,因此给药间隔不应超过12小时。我们研究证实大蒜油有明显的抗癌作用,为临床应用提供有力的依据。     

重组含HSV-TK基因腺病毒的构建及对肿瘤细胞的杀伤作用

构建含CMV启动子和HSV-TK基因的复制缺陷型重组腺病毒载体(AdCMVTK),用PCR及Southern杂交筛选鉴定阳性空斑,证实AdCMVTK含HSV-TK基因。纯化的Ad-CMVTK滴度达10~(12)pfu/ml。GCV对经Ad-CMVTK感染(M.O.I.=100)的HeLa等3种肿瘤细胞的IC50<4μmol/L,同时观察到明显的旁杀伤效应。AdCMVTK/GCV系统的建立为肿瘤基因治疗的研究提供了新的手段。     

人参茎叶皂甙对创伤小鼠活化T细胞内磷脂酰肌醇代谢的影响

研究了人参茎叶皂甙（ＧＳＬ）对创伤小鼠活化Ｔ细胞内磷脂酰肌醇代谢的影响。结果显示,ＧＳＬ体内应用（５０ｍｇ·ｋｇ￣（－１）·ｄ￣（－１）,伤后０─３ｄ）对创伤小鼠活化Ｔ细胞内三磷酸肌醇（ＩＰ＿３）、游离Ｃａ￣（２＋）、钙调素（ＣａＭ）、ＣａＭ依赖的蛋白激酶（ＣａＭ－Ｐｋ）、蛋白激酶Ｃ（ＰＫＣ）水平的降低具有明显的逆转效应,并可明显降低创伤小鼠血清、巨噬细胞、Ｔｓ细胞对各指标的抑制活性。ＧＳＬ（１．０─１００ｍｇ／Ｌ）在体外也可明显提高创伤小鼠活化Ｔ细胞内ＩＰ＿３、Ｃａ￣（２＋）、ＣａＭ、ＣａＭ－ＰＫ及ＰＫＣ水平。上述结果表明,ＧＳＬ可逆转创伤小鼠活化Ｔ细胞内磷脂酰肌醇代谢的降低。     

电针对帕金森病模型小鼠黑质铁染色细胞和铁蛋白表达的影响

目的探讨电针防治帕金森病的作用机制。方法采用1-甲基-4-苯基1,2,3,6四氢吡啶腹腔注射建立帕金森病小鼠模型,利用组织化学技术以及免疫组织化学技术观察电针对帕金森病小鼠脑黑质铁染色细胞和铁蛋白表达的影响。结果模型组1周、2周、4周小鼠黑质铁染色阳性细胞的数量较正常组明显增多,染色强度也明显增强（P〈0．001;P〈0．01;P〈0．001）,电针在3个存活期内均可明显减少帕金森病小鼠黑质铁阳性细胞的数量和染色强度（P〈0．001;P〈0．05;P〈0．001）;模型组1周、2周黑质部位铁蛋白的表达与正常组相比都有不同程度下降（P〈0．01;P〈0．001）,而电针组2周帕金森病小鼠黑质铁蛋白的表达与模型组相比显著增加（P〈0．01）。结论电针可以通过降低脑内铁的含量,同时增加铁蛋白的表达,从而提高帕金森病模型小鼠脑抗氧化能力,达到保护黑质多巴胺能神经元的目的。     

双歧杆菌对小鼠单核吞噬细胞功能的影响

双歧杆菌是革兰氏阳性无芽胞厌氧菌,是人和动物肠道的正常菌群之一。我们研究了注射双歧杆菌对小鼠单核吞噬细胞功能的影响。注射婴儿双歧杆菌和青春双歧杆菌后小鼠腹腔巨噬细胞酸性磷酸酶含量增加、吞噬试验的吞噬率及吞噬指数明显提高,表明双歧杆菌能增加巨噬细胞吞噬消化功能,以婴儿双歧杆菌为启动剂可从DBA/2小鼠体内诱生肿瘤坏死因子,提示双歧杆菌可调节单核吞噬细胞分泌细胞因子。因此双歧杆菌能激活单核吞噬细胞,促进机体的免疫学反应。推测定居于肠道的双歧杆菌可能是通过移位到体内器官、释放免疫活性成分被肠道中Peryer氏淋巴结群内的巨噬细胞吞噬,从而作用于机体单核吞噬细胞系统。这一推测尚需进一步研究证实。     

天花粉对小鼠子宫肥大细胞超微结构的影响

本研究用雌性中国１号小鼠１２只,分实验组和对照组,实验组分别腹腔注射天花粉后处死,取子宫组织作超薄切片,电镜观察。在天花粉作用下,常见子宫肥大细胞脱颗粒,呈功能活化状态,并与子宫平滑肌细胞紧密相邻。提示肥大细胞可能通过脱颗粒释放组胺促进子宫平滑肌的收缩。同时,也见肥大细胞与子宫结缔组织中的成纤维细胞,淋巴细胞等密切接触,提示成纤维细胞和淋巴细胞与天花粉作用下子宫肥大细胞的数量增多有关。     

锌对小鼠免疫功能的影响

每天给小鼠0.2 mg 锌灌胃,连续15d,明显提高外周血 T 淋巴细胞百分率,促进 T淋巴细胞转化功能及迟发型超敏反应;对腹腔巨噬细胞吞噬功能有抑制作用、对 IgM 抗体生成及胸腺重量无明显影响。胸腺组织结构在光镜下未见明显变化,但在电镜下可见皮质淋巴细胞核形态有不规则变形。这些结果表明:一定剂量的锌对细胞免疫虽有促进作用,但对巨噬细胞吞噬功能有抑制作用,对胸腺淋巴细胞有潜在的损伤。