重组IL－6与IL－3或／和GM－CSF合用对正常BN大鼠粒单系体外造血的调控效应

本研究探讨了重组人ＩＬ－６与大鼠ＩＬ－３和／或小鼠ＧＭ－ＣＳＦ结合对正常ＢＮ大鼠粒单系体外造血的调控效应。结果表明,ＩＬ－６在１０００－４０００Ｕ／ｍｌ呈剂量依赖性刺激粒系造血祖细胞集落形成及骨髓细胞的ＤＮＡ合成,集落以ＧＭ型为主,其刺激活性低于ＩＬ－３或ＣＭ－ＣＳＦ。ｌＬ－６与ＩＬ－３和／或ＧＭ－ＣＳＦ的结合对粒单系集落形成及ＤＮＡ合成无协同或相加作用,甚至出现拮抗效应,但却显著增大集落。提示ＩＬ－６可能具有双向调控作用,促进早期造血细胞的增殖,拮抗其它因子对晚期粒单系造血的刺激作用;具有重叠生物效应的这３种细胞因子在调控造血时,它们之间的相互作用应是顺序的而不是同时的。     

小鼠胎肝基质细胞系MFLC自发分泌多种细胞因子

在无外源刺激条件征,我室所建小鼠胎肝基质细胞系ＭＦＬＣ可自发分泌多处类型细胞因子,其中ＩＬ－６及化学趋化因了水平较高,ＧＭ－ＣＳＦ较低,但示检测到ＩＬ－３及ＩＬ－７活性,引细胞上清对小鼠骨髓造血干细胞有明显的促集落形成效应。并呈现剂量依赖关系,所形成的集落以ＣＦＵ－ＧＭＭ及ＣＦＵ－ＧＭ为主,此细胞上清还促进５－Ｆｕ耐受小鼠骨髓造血干细胞的集落形成,提示上清中存在ＳＣＦ样活性成份。上述结果表明,ＭＦ     

重组人白介素6对人骨髓粒单系祖细胞集落形成的影响

重组人白介素６对人骨髓粒单系祖细胞集落形成的影响赖春宁,任蕴芳,黎燕,沈倍奋（军事医学科学院基础医学研究所北京１００８５０）白介素６（ＩＬ－６）可作用于多能造血祖细胞,使ＣＦＵ－Ｍｉｘ形成增加,并且可提高白介素３（ＩＬ－３）对小鼠造血祖细胞的增殖活性...     

粒细胞—巨噬细胞集落刺激因子／白细胞介素—3融合蛋白的表达研究

利用ＰＣＲ扩增得到粒细胞－巨噬细胞集落刺激因子（ＧＭ－ＣＳＦ）、白细胞介素－３（ＩＬ－３）完整基因片段,将其分别克隆ｐＧＥＭ－Ｔ构建成ＧＭ－ＣＳＦ／ＩＬ－３融合蛋白基因,ＤＮＡ序列与设计预期一致。将得到的融合蛋白基因克隆对７２ＲＮＡ聚合酶表达载体ｐＴ７ｚｚ,得到表达质粒ｐＦｕ,经转化至表达宿主Ｅ．ｃｏｌｉ ＢＬ２１（ＤＥ３）,在ＩＰＴＧ诱导下获得融合蛋白目的产物的直接表达。经ＳＤＳ－ＰＡＧＥ电泳鉴     

锂对小鼠高增殖潜能集落形成细胞和粒巨噬系祖细胞体外增殖的影响

本文观察了锂对ＢＡＬＢ／Ｃ小鼠骨髓高增殖潜能集落形成细胞（ＨＰＰ－ＣＦＣ）和粒巨噬系祖细胞ＣＦＵ－ＧＭ体外增殖的影响。ＨＰＰ－ＣＦＣ集落由ＩＬ－１、ＩＬ－６、ＷＥＨＩ３条件培养液（ＷＥＨＩ３－ＣＭ,含有ＩＬ－３）及Ｌ９２９条件培养液（Ｌ９２９－ＣＭ,含有Ｍ－ＣＳＦ）所支持,而ＣＦＵ－ＧＭ由ＷＥＨＩ３－ＣＭ所支持。结果显示,ＬｉＣｌ浓度在０．４－２ｍｍｏｌ／Ｌ时呈现剂量依赖性抑制ＨＰＰ－ＣＦＣ增殖;而在０．４－１ｍｍｏｌ／Ｌ的浓度范围内,则对ＣＦＵ－ＧＭ的增殖起剂量依赖性促进作用。这些结果提示ＬｉＣｌ对ＨＰＰ－ＣＦＣ和ＣＦＵ－ＧＭ的作用不同,可能锂有诱导ＨＰＰ－ＣＦＣ向成熟细胞分化的作用     

锂对小鼠高增殖潜能集落形成细胞和粒巨噬系祖细胞体外增殖…

本文观察了锂对ＢＡＬＢ／Ｃ小鼠骨髓高增殖潜能集落形成细胞和粒巨噬系祖细胞ＣＦＵ－ＧＭ体外增殖的影响。ＨＰＰ－ＣＦＣ集落由ＩＬ－１,ＩＬ－６,ＷＥＨＩ３条件培养液及Ｌ９２９条件培养液所支持,而ＣＦＵ－ＧＭ由ＷＥＨＩ３－ＣＭ所支持。结果显示,ＬｉＣｌ浓度在０．４－２ｍｍｏｌ／Ｌ时呈现剂量依赖性抑制ＨＰＰ－ＣＦＣ增殖;而在０．４－１ｍｍｏｌ／Ｌ的浓度范围内,则对ＣＦＵ－ＧＭ的增殖起剂量依赖性促进作用。     

不同冷冻条件对骨髓造血细胞的CFU－GM形成能力及DNA活性的影响

本文对不同冷冻条件下人骨髓造血细胞的粒单系集落（ＣＦＵ－ＧＭ）形成能力及ＤＮＡ活性变化进行测定。结果证明：室温下低温保护剂二甲基亚砜（ＤＭＳＯ）使骨髓造血细胞形成ＣＦＵ－ＧＭ的能力下降;程序降温至－８０℃与降至－８０℃后与在液氮内冻存７天骨髓造血细胞相比较,二者形成ＣＦＵ－ＧＭ的能力以及ＤＮＡ活性均无明显变化;在程序降温过程中,消除融合热释放组骨髓造血细胞形成ＣＦＵ－ＧＭ的能力明显高于来消除融合热释放组。     

利用IL—3／GM—CSF融合蛋白（PIXY—321）扩增脐血造血细胞方…

利用单克隆抗体免疫磁珠吸附方法脐血ＣＤ３４＋细胞,并观察了ＩＬ－３／ＧＭ－ＣＳＦ融合蛋白（ＰＩＸＹ－３２１）对脐血ＣＤ３４＋细胞的刺激作用。ＰＩＸＹ－３２１对脐血ＣＤ３４＋细胞扩增作用大于ＩＬ－３和ＧＭ－ＣＳＦ单独及联合应用,在液体培养条件下,每毫升２０ｎｇＰＩＸＹ－３２１可有效地扩增脐血造血祖细胞,适宜扩增时间为５－８天,扩增后造血细胞的数量可达扩增前的８－１０倍,从而初步建立了一种简单可行的脐     

人胎肝造血干细胞增殖刺激物的分离及鉴定

经过超滤,ＤＥＡＥ－Ｓｅｐｈａｃｅｌ,ＳｅｐｈａｃｒｙｌＳ－２００和Ｓｕｐｅｒｏｓｅ１２ＨＲ多步分离纯化,从人胎肝细胞原代培养上清中分离到一分了阳为３５ｋＤ的单一活性组分,真有造血干细胞增殖刺激活性,定义为ＦＬＳ－４,ＦＬＳ－４可能是一种新型造血干细胞增殖刺激因子,与具有这类活性的ＩＬ－３,ＩＬ－６,ＧＭ－ＣＳＦ,ＦＬＴ３配基和ＳＣＦ等在理化特性或生物学性质上均有所差异,在胎肝造血活跃时期,是启动     

FL对脐血造血细胞长期液体培养的影响

用脐血进行干细胞移植有许多优点,但有一个主要的缺点是可获得的细胞数量有限,因此脐血干细胞的体外扩增对于其临床应用具有重要意义。考察了Ｆｌｔ－３配体（ＦＬ）和干细胞因子（ＳＣＦ）,白介素３（ＩＬ－３）,ＩＬ－６,粒细胞集落刺激因子（Ｇ－ＣＳＦ）,粒细胞巨噬细胞集落刺激因子（ＧＭ－ＣＳＦ）的组合对脐血细胞扩增和分化的影响,培养４２ｄ,总细胞最多扩增了３８５．３０±１６３．５１倍（ＦＬ＋ＳＣＦ＋Ｇ－ＣＳ     

优化mRNA翻译起始区提高人粒—巨噬细胞集落刺激因子在E.coli…

人粒－巨噬细胞集落刺激因子（ｈＧＭ－ＣＳＦ）是一种重要的造血生长因子。利用基因重组技术构建两个ｈＧＭ－ＣＳＦ的Ｅ．ｃｏｌｉ表达菌株,一个为在不改变氨基酸顺序的前提下,对ｍＲＮＡ翻译起始区核苷酸顺序进行优化突变（ｈＧＭ－ＣＳＦ（Ｍ））,另一个为未突变的对照（ｈＧＭ－ＣＳＦ（Ｎ））。经酶切电泳、ＤＮＡ测序、ＳＤＳ－ＰＡＧＥ和Ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔ等未突变的对照（ｈＧＭ－ＣＳＦ（Ｎ））。经酶切电泳、Ｄ     

人胎肝造血干细胞增殖刺激物的分离及鉴定

经过超滤、ＤＥＡＥ－Ｓｅｐｈａｃｅｌ、ＳｅｐｈａｃｒｙｌＳ－２００和Ｓｕｐｅｒｏｓｅ１２ＨＲ多步分离纯化,从人胎肝细胞原代培养上清中分离到一分子量为３５ｋＤ的单一活性组分,具有造血干细胞增殖刺激活性,定义为ＦＬＳ－４。ＦＬＳ－４可能是一种新型造血干细胞增殖刺激因子,与具有这类活性的ＩＬ－３、ＩＬ－６、ＧＭ－ＣＳＦ、ＦＬＴ３配基和ＳＣＦ等在理化特性或生物学性质上均有所差异,在胎肝造血活跃时期,是启动早期造血干细胞从Ｇ＿０期进入Ｓ期的主要候选活性物质。     

造血生长因子结构与功能的相关性研究

概述了多系（ｍｕｌｔｉ）－集落刺激因子（ＣＳＦ）中性粒系－巨噬系（ＧＭ）－ＣＳＦ,Ｇ－ＣＳＦ,Ｍ－ＣＳＦ,红细胞生成素,白介素－１、２、５、６等９种造血生长因子结构－功能相关性研究的主要进展。     

rhGM—CSF对人骨髓粒单祖细胞集落形成及U937细胞分化的影响

本文应用造血祖细胞体外培养技术研究了重组人粒细胞－巨噬细胞集落刺激因子（ｒｈＧＭ—ＣＳＦ）对正常人骨髓粒单祖细胞集落（ＣＦＵ—ＧＭ）形成的影响,结果表明ｒｈＧＭ—ＣＳＦ在体外能促进细胞集落的形成,此种效应在一定范围内呈剂量依赖关系,与ＬＥＵＣＯＭＡＸ各剂量组相比无显著性差异。采用ＮＢＴ还原试验和ＡＰＡＡＰ法观察了ｒｈＧＭ—ＣＳＦ对Ｕ９３７细胞分化的影响,结果显示ｒｈＧＭ—ＣＳＦ能抑制Ｕ９３７细胞的增殖,促进其分化,部分细胞具有ＮＢＴ还原能力,ＣＤ１１６阳性细胞数增加。     

重组GM—CSF／IL—3融合蛋白的纯化

重组粒细胞－巨噬细胞集落刺激因子／白细胞介素３（ＧＭ－ＣＳＦ／ＩＬ－３）融合蛋白是一种很有发展潜力与应用前景的重组药物,它在大肠杆菌中是以饱含体形式表达的,针对这一重组蛋白饱含体的洗涤、变性、复性以及最终的纯化过程,进行了深入地研究,重点分析和比较了不同条件及因素对于重组蛋白包含体变性及复性过程听影响。实验结果表明,８ｍｏｌ／Ｌ尿素及１０ｍｍｏｌ／Ｌ的ＤＴＴ可以使包含体充分溶解。在复性过程中,采用     

脐带血清在骨髓造血祖细胞培养中的效应

目的：探讨人脐带清（ＣＢＳ）在骨髓造血祖细胞培养中的效应。方法：用人骨髓细胞进行ＣＦＵ、ＧＭ、ＶＦＵ－Ｅ、ＢＦＵ－Ｅ、ＣＦＵ－ＧＥＭＭ培养。结果：ＣＢＳ能直接刺激骨髓细胞ＣＥＵ－ＧＭ的形成。与血型相同害无关。四人份以上的混合ＣＢＳ（ＭＣＢＳ）,刺激活性高且稳定。１０％ＭＣＢＳ相当于６５．６μｇ／Ｌ ＧＭ－ＣＳＦ、０．２３、０．３、０。．４６ｋＵ／Ｌ ＥｐＯ对ＣＦＵ－ＧＭ、ＣＦＵ－Ｅ、ＢＦＵ－Ｅ、Ｃ     

1,25—二羟维生素D3的免疫调节作用

１,２５（ＯＨ）２Ｄ３是维生素Ｄ３的形式,其生物效应是由１,２５（ＯＨ）２Ｄ３受体（ＶＤＲ）介导的。单核细胞、激活的淋巴细胞等免疫系统细胞均有ＶＤＲ的表达,１,２５（ＯＨ）２Ｄ３对免疫系统功能有重要调节作用,主要表现于：在分子水平上抑制白细胞介素２（ＩＬ－２）、γ－干扰素（ＩＮＦ－γ）及粒单系集落刺激因子（ＧＭ－ＣＳＦ）等细胞因子的表达;细胞水平上调节免疫系统细胞的增殖分化及其免疫功能;在整体水平     

人重组GM—CSF／HSA—D3嵌合蛋白（GM—HSA）在大肠杆菌中的表达及其产…

将人粒细胞－巨噬细胞集落刺激因子（ＧＭ－ＣＳＦ）和人血清白蛋白第三功能区（ＨＳＡ－Ｄ３）的基因串联后,在Ｅ．ｃｏｌｉ中获高效表达,表达量占菌体蛋白的３２．６％。利用ＴＦ－１体外细胞活性测定表明,ＧＭ－ＨＳＡ的活性单位为１．０４×１０＾６Ｕ／ｍｇ,虽然其比活性低于ＧＭ－ＣＳＦ,但比后者具有更高的体外热稳定性和储藏稳定性。     

GM—CSF和IL—3对脐带血CD34＋细胞植入骨髓基质的促进作用

利用抗ＣＤ３４单克隆抗体吸附磁性微球的方法分离纯化脐带血ＣＤ３４＾＋细胞,将其种入照射后的成年骨髓基质。比较ｒｈＧＭ－ＣＳＦ、ＩＬ－３及两者的联合对植入效率的促进作用。结果表明：经２ｈ铺展贴壁后,对照组只有３６％的ＣＤ３４＾＋细胞植入基质,而生长因子预处理组则有６８－８９．６％的ＣＤ３４＾＋细胞植入基质。在长期液体培养体系中则显示了植入ＣＤ３４＾＋细胞多的处理组造血重建快速而持久。表明ＧＭ－ＣＳＦ     

优化mRNA翻译起始区提高人粒－巨噬细胞集落刺激因子在E．coli中的表达

人粒－巨噬细胞集落刺激因子（ｈＧＭ－ＣＳＦ）是一种重要的造血生长因子．利用基因重组技术构建两个ｈＧＭ－ＣＳＦ的Ｅ．ｃｏｌｉ表达菌株,一个为在不改变氨基酸顺序的前提下,对ｍＲＮＡ翻译起始区核苷酸顺序进行优化突变（ｈＧＭ－ＣＳＦ（Ｍ））,另一个为未突变的对照（ｈＧＭ－ＣＳＦ（Ｎ））．经酶切电泳、ＤＮＡ测序、ＳＤＳ－ＰＡＧＥ和Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ等分析鉴定,证明两者均能表达特异性的１４．６ｋＤｈＧＭ－ＣＳＦ,但ｈＧＭ－ＣＳＦ（Ｍ）的表达水平较ｈＧＭ－ＣＳＦ（Ｎ）提高了１．２６倍,占菌体总蛋白的１６．９％．ｍＲＮＡ翻译起始区二级结构预测分析表明,优化突变后生成自由能ΔＧ从原来的－１０．２提高至－９．４Ｋｃａｌ,ＡＵＧ从部分配对状态变为非配对状态．