用塑料薄膜悬浮培养鸡胚

用塑料薄膜进行鸡胚的无壳悬浮培养是最简便、最经济的方法。这一方法最早由Dunn(1974)发明,本文作者曾将这一方法改进后在课堂上使用多年,用来研究胚胎发育。实验材料在这里采用的培养室是改进了Dunn等(1981)的方法。培养室由四部分组成(如图1所示):一根直径和长度为7.62厘米的塑料排水管,作为托座,托住一张塑料薄膜。用一个开     

鸡胚细胞的微载体培养

国外有许多利用微载体培养各种贴壁细胞的报道。鸡胚细胞(CEF cells)是最早用于体外培养的细胞之一,用它可生产多种鸡的疫苗,如法氏囊、新城疫、马立克疫苗等。我国生产上多采用滚瓶法,近年来才有微载体法培养的探索。要进行细胞的大规模培养,转瓶是有效的模拟,可以模拟生物反应器培养的一些条件,为放大作准备。本文模拟生物反应器的培养条件,用500ml转瓶（装液200ml）研究了鸡胚细胞在徽栽体上巾壁和生长的规律,为放大培养作了准备。     

用细胞与鸡胚二步法培养眼-泌尿生殖道衣原体的研究

将眼－泌尿生殖道衣原体在ＭｃＣｏｙ细胞中扩大培养至５０％以上细胞形成包涵体以后,用细胞培养物接种７日龄鸡胚卵黄囊,使其在鸡胚卵黄囊中生长。用此二步法联合制备衣原体抗原,克服了单独用细胞法和卵黄囊法的不足,可在短时间里获得较多的抗原。     

鸡胚卵巢源类ES细胞的培养和鉴定

<正>来源于原始生殖细胞(Primordial germ cells,PGCs)的胚胎生殖细胞(Embryonic germ cells,EGCs),与来自内细胞群的细胞一起统称为胚胎干细胞(Embryonic stem cells,ESCs),具有增殖能力强和可分化为机体所有细胞和组织的能力,在基础研究和转     

鸡胚三类组织体外培养细胞的生物学特性分析

采用组织培养的方法获取鸡胚不同组织细胞,利用M199培养基进行原代、传代培养,经形态学观察、生长曲线绘制、分裂指数测定等进行生物学特性分析。实验表明,鸡胚不同组织细胞具有不同的生物学特性,从形态结构到生长周期都有明显差异。获得的躯体来源细胞、心来源细胞为成纤维型,肺来源细胞为上皮型;其中,躯体来源细胞生长能力最强,心来源细胞次之,肺来源细胞最慢,躯体来源细胞倍增时间最短;核型分析表明,该实验体外培养的鸡胚细胞染色体数目为78条。上述结果可为今后鸡胚不同组织细胞的深入研究提供实验材料和依据。     

聚赖氨酸与胶原对培养的鸡胚大脑皮层细胞的影响

将8天鸡胚大脑皮层制成单细胞悬液,进行静止培养。若接种于鼠尾胶原上,并于第5天加用药物以抑制有丝分裂,可见仍有大量胶质细胞生长。神经细胞在总细胞数中不足70％,三周后开始退化。若接种于聚赖氨酸处理过的玻片上,则胶质细胞很少出现,神经细胞占总细胞数的80％以上,但两周后开始退化。因后一方法可以基本上排除胶质细胞的干扰,故适用于单独观察神经细胞的研究工作。     

鸡胚壳外培养的探讨

鸡胚是胚胎学、发育生物学教学及科研的良好材料.鸡的种蛋作为生物学的实验材料,其历史已经相当悠久.鸡的种蛋取材方便,不受季节限制,只要有适当的温度(37.5°-38℃)、湿度(55-70%)、空气就能孵化,继续它的胚胎发育,供教学、科研使用.以前用鸡胚做研究,一般是鸡胚发育不脱离蛋壳,这就需要在蛋壳上开天窗进行手术和观察,不太方便,观察也有局限.如果能在壳外培养,那将提供很大方便.这     

鸡胚细胞的传代培养和麻疹病毒的增殖

为了建立原代鸡胚细胞的传代培养工艺,探究传代鸡胚细胞对麻疹病毒的敏感性和适应性,本研究将原代鸡胚细胞进行传代培养,分别采用原代鸡胚细胞和传代鸡胚细胞培养麻疹病毒沪-191(Shanghai-191,S-191)株毒种,并对病毒收获液进行滴度检测和基因序列测定。结果显示,原代鸡胚细胞可稳定传代培养至第10代,各代次细胞生长趋势相似;第5代鸡胚细胞染色体检查为正常染色体核型;第8代鸡胚细胞成瘤性检查未见成瘤;采用第3、5代鸡胚细胞制备的麻疹病毒滴度水平高于原代鸡胚细胞,但无显著性差异(n=3,P>0.05),编码病毒核蛋白(nucleoprotein,N)和血凝素蛋白(hemagglutinin,H)的基因序列与S-191株完全一致,未发生变异。本研究证实,原代鸡胚细胞可进行传代培养,各代次鸡胚细胞对麻疹病毒的敏感性不变,产毒水平无显著差异,可用于培养麻疹病毒。     

C-H_3加强神经生长因子对培养的鸡胚背根神经节细胞的作用

在培养的鸡胚背根神经节上观察了 C-H_3(GhineseH_3)、神经生长因子(NGF)以及 C-H_3和 NGF 的混合剂对神经细胞的影响。主要结果如下:1.C-H_3处理的标本和对照组没有差别。培养3d 的节神经细胞数平均约420个;6d 时,部分细胞衰退,降到200个。2.NGF 能促进节神经纤维外长,增加神经母细胞向神经元的转变。培养3d 的节神经细胞数平均约700个;6d 时720个。NGF 维持神经元的存活,延缓神经元的衰退。3.C-H_3和NGF 的混合剂不仅增进节神经纤维的长出,而且还延缓了长出纤维的消退,消失时程比NGF 组延长一倍。培养3d 的节神经细胞数平均约1000个,是2.4倍于对照,1.4倍于 NGF组;培养6d 时1120个,为对照组的5倍,NGF 组的1.5倍。混合剂的效果比 NGF 更好。结果表明,C-H_3增强 NGF 对培养的节神经细胞存活的效应。     

鸡胚壳外培养破壳方法的改进

近年来,鸡胚壳外培养越来越受到重视,因为它能直接观察到胚胎发育的过程,是胚胎学、发育生物学的教学和科研的好材料. 在无壳培养中,常遇到的第一个问题是破壳难,即易使卵黄膜破裂而失败.最早人们使用直接破壳法,成功率低.后来改用挫刀挫壳及胶布粘连、拉开方法,虽说成功率有所提高,但仍不理想,操作也不便.我们在多次试验的     

去细胞外钙对培养鸡胚肌管磷脂酰肌醇水解的影响

本工作研究了去细胞外钙对取自９天来亨鸡胚的培养肌管磷脂酰肌醇水解的影响,８０ｍｍｏｌ／ＬＫ＾＋暴露可以显著和蔼同磷脂酰肌醇的水解。在暴露于无钙任氏液的肌管中,磷脂酰肌醇的水解随时间延长而呈指数递减。时间常数约为２６分钟。在胞外无钙时,８０ｍｍｏｌ／ＬＫ引起的磷胆酰肌醇水解与对照相比略有下降,结果表明,高钾暴露能够增强培养肌管的磷脂酰醇的水解;但与成熟的肌纤维不同,细胞外钙是必须的。     

用器官培养法研究抗连接蛋白单克隆抗体对鸡胚水晶体发育的影响

用器官培养技术研究了抗连接蛋白单克隆抗体NC6对鸡胚水晶体发育的影响,同时进行了原位眼内注射NC6的实验。水晶体大小的统计分析结果指出,离体器官培养结果与原位眼内注射结果完全一致:实验组水晶体均明显地大于对照组;这种差异显著性又与培养时间正相关。但正常水晶体左右侧之间无显著的大小差异。这些结果表明,NC6确有促使水晶体增大的作用。以前的工作已经证明,NC6能阻断间隙连接的形成。因此,作者推测,可能是NC6阻断了水晶体纤维细胞中的间隙连接形成,造成了细胞分裂的失控,从而导致水晶体的增大。本文结果进一步证实了间隙连接在生长控制中起重要作用。     

麦胚无细胞蛋白合成体系的改进

麦胚无细胞蛋白合成体系的特点是内源信息含量低,对外源RNA 反应灵敏,故在检测外源mRNA 和tRNA 的功能和蛋白质合成机制的研究中起着重要的作用。按Marcus 等的方法,制备无tRNA 的麦胚无细胞蛋白合成体系S_(100-)     

开发心肌细胞的无血清培养基为用培养细胞代替动物实验作准备

日本山形市的生物技术风险企业生物技术科学研究所领先开发了心肌细胞的无血清培养基(BSL-MSFM)。为了通过极东制药公司出售此产品,现在正在进行交涉.同时,该所还开发了血管平滑细胞的增殖培养基(BSL-SGM),也打算最近出售。除此之外,该研究所正在开发表皮细胞、血管内皮细胞、肝实质细胞等的培养法.评价毒性和刺激性的法需要使用兔眼,该所打算开发这种试管内的培养细胞系列,以便将来能够代替、在美国,一些主要的化妆品企业为爱护动物出发,正在废除使用动物进行安全性试验。早晚会波及到日本,所以利用细胞代替实验动物成了当务之急.     

转基因DT40细胞导入早期鸡胚后的分布及绿色荧光蛋白表达的研究

目的为了研究经过基因修饰的体细胞导入到禽类胚胎以后,供体细胞及外源基因是否能在受体胚胎中成活并且外源基因是否可以长期表达。方法筛选得到稳定整合绿色荧光蛋白基因的鸡DT40细胞作为外源蛋白的运载工具,通过血管微注射的方法将其导入到于38.5℃温度条件下孵化65～70 h的鸡胚中,并将操作后的鸡胚在原孵化条件下继续孵化。在孵化的不同时期取移植了DT40细胞的嵌合体胚胎在荧光显微镜下观察荧光细胞的存活与分布情况。并通过PCR以及免疫组织化学方法检测供体细胞在受体中的位置以及绿色荧光蛋白的表达情况。结果荧光标记的DT40细胞可以存活于受体不同的组织器官中,包括：脑、心脏、肝脏等。导入胚胎的整合外源基因的DT40细胞可以存活到胚胎出雏之前,并且外源基因能够正常表达。结论可以通过此方法将外源基因导入到受体中,并使目的蛋白在受体胚胎中持续表达,为胚胎期导入外源蛋白诱导免疫耐受的研究以及将转基因细胞移植到动物体内生产目的蛋白的研究提供科学依据和技术平台。     

鸡胚早期发育过程中细胞迁移的基因调控

鸡胚是发育生物学研究的经典动物模型,通过基因导入技术调节胚胎发育的基因功能,研究鸡胚早期发育过程中的细胞迁移,有助于更好地诠释相关先天性疾病的发生发展过程。在早期胚胎发育的过程中,原肠胚期三胚层的形成、心管的发生及神经嵴的发育都伴随着显著的细胞迁移过程。该文将结合近年来国内外对该过程的研究进展,介绍这三个不同时期细胞的迁移及相关基因调控。     

鸡胚睾丸支持细胞的分离、纯化与鉴定

以18天鸡胚睾丸为实验材料,经胶原酶和胰蛋白酶两步酶消化法得到生精上皮细胞悬液.在原代培养过程中经差异贴壁和低渗处理后,获得了纯度约为90%的单层支持细胞.对纯化的培养物染色鉴定,结果显示支持细胞为碱性磷酸酶(AKP)阴性,而混杂在其中的另一种体细胞管周细胞为AKP阳性;油红O染色显示,支持细胞胞质内含有大量的脂肪滴,核内见双极小体;吖啶橙染色证实支持细胞富含RNA;罗丹明123染色显示支持细胞富含线粒体;Hoechst 33342染色显示支持细胞细胞核呈长卵圆形,核的长轴与细胞长轴平行;免疫荧光染色显示支持细胞胞质中表达波形蛋白.建立了一套简单、易行的鸡胚睾丸支持细胞分离纯化与鉴定方法.     

鸡胚早期神经系统发育中凋亡细胞的分布研究

研究鸡胚18S（Stage）神经系统发育中凋亡细胞的分布及其生物学意义。采用HNK－1和TUNEL免疫组化双染及改变切片方向的方法观察了神经管和神经嵴的凋亡细胞,结果显示：凋亡的细胞在间隔10张横向切片上呈非均匀分布,但在矢状切面凋亡细胞有节段性分布趋势。体节处连续神经嵴没有发现凋亡细胞,而体节与体节之间神经嵴迁离神经管呈游离状并有凋亡细胞,神经管腹侧面体节处间充质细胞呈现细胞凋亡节段性分布。结果表明：鸡胚早期神经系统发育中选择性发生细胞凋亡作用。     

鸡胚背根神经节培养法测定神经生长因子活性的条件优化

鸡胚背根神经节培养法是测定神经生长因子(NGF)和神经营养因子活性的重要方法。我们通过考察培养基、鸡血浆和鸡胚浸液的比例、背根神经节部位、培养时间等条件对NGF刺激神经节生长的影响,从而建立了一套检测NGF活性的优化条件。在含20％鸡血浆和15％鸡胚浸液的DMEM的培养基中,利用伊莎褐鸡胚腰部的背根神经节,在终浓度为30ng/ml的蛇毒NGF的刺激下,培养36h可以得到理想的实验结果。该条件重复性好、分辨率高、简单实用。