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《生物技术通讯》2016,(1)
目的:构建酵母单杂交文库,筛选出与钠碘同向转运体上游增强子(NUE)特异性结合的蛋白质分子,进一步研究其与NUE相互作用的分子机制。方法:应用酵母单杂交系统,以NUE为酵母单杂交的"诱饵",对甲状腺癌K1细胞的c DNA文库进行初步筛选,采用DNA测序技术及生物信息学技术对筛选的克隆进行进一步功能分析。结果:对文库中的阳性克隆测序,获得53条可读序列,Blast X比对分析及基因功能注释发现其中11条具有DNA结合功能,包括Rho GTP酶激活蛋白35(ARHGAP35)、锌指蛋白394(ZNF394)、上游刺激因子2(USF2)、SOX9等。结论:应用酵母单杂交技术初步筛选出与甲状腺癌K1细胞NUE相互作用的候选蛋白,并对这些蛋白质进行了初步的功能分析。 相似文献
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《植物遗传资源学报》2019,(5)
植物中Trihelix转录因子的共同特征是DNA结合域含有3个连续的α-螺旋。该家族最早被发现能与光应答元件GT元件特异性结合,所以该家族也被称为GT因子家族。最新研究表明Trihelix转录因子家族不仅参与光反应应答,还广泛地参与植物对生物和非生物胁迫的应答。本研究主要介绍了植物Trihelix转录因子结构特征、家族分类,以特殊耐盐种质资源甜菜M14品系中Trihelix转录因子GT-1亚家族响应盐胁迫基因表达模式的分析为例,结合最新的研究进展,重点阐述了Trihelix转录因子与环境相互作用的功能。为今后深入探索Trihelix转录因子参与植物光响应、生物及非生物胁迫等方面的分子机理奠定良好的基础。 相似文献
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结合最近几年对真核转录调节因子和DNA的结构与机能研究,概述了蛋白质-蛋白质及蛋白质-DNA相互作用方式以及介导相互作用的分子结构基础,论述了转录因于之间、转录因子与DNA之间相互作用过程中的协同与拮抗作用、发生机制及其在真核基因转录调节中的普遍性和重要意义. 相似文献
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《生物技术通报》2018,(12)
MYB转录因子是植物中最大的转录因子家族成员之一,主要参与植物次生代谢调控、激素和环境因子的应答,在植物的生长发育中起着至关重要的作用。已有研究发现,E-box的核心序列为CANNTG(N:A/G/C/T),是一类与光响应和苯丙氨酸生物合成途径相关的元件。在前期研究中,先构建顺式作用元件库,然后以转录因子为中心的酵母单杂交技术筛选发现,白桦的BplMYB46转录因子能够与核心序列为CAAATG的E-box顺式作用元件结合。但是,是否能与E-box的其他核心序列结合还不清楚。本研究将每一种E-box顺式作用元件的核心序列分别进行双链DNA的复性并连接到pHIS2载体上,然后通过酵母单杂交技术筛选与BplMYB46转录因子能够特异结合的E-box顺式作用元件。结果显示,当E-box的核心序列第3个碱基为A/T/C、第四个碱基为A/G/C时,酵母单菌落能在三缺培养基TDO/3AT上生长,表明与BplMYB46转录因子结合的E-box顺式作用元件的特异性序列为CA(A/T/C)(A/G/C)TG。为后续通过BplMYB46转录因子与E-box顺式作用元件的结合来分析BplMYB46转录因子对下游基因的调控,以及为筛选优良下游基因改良白桦的遗传性状奠定数据基础。 相似文献
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一种新的与渗调蛋白基因启动子结合的蛋白基因的分离 总被引:1,自引:0,他引:1
渗调蛋白基因可受多种外界环境因子的诱导表达 ,并与植物细胞的渗透调节、抗逆境及植物抗病性等重要的生理过程有着密切关系 ,通过寻找与渗调蛋白基因启动子中FA区域DNA结合的蛋白 ,克隆参与该基因表达调控的反式作用因子 ,有利于明确渗调蛋白基因在转录水平上的调控机制 ,揭示外界环境因子通过信号传导系统诱导渗调蛋白基因表达的过程 .利用近年来发展起的酵母单杂交系统 ,从适盐的烟草悬浮细胞的cDNA文库中分离到 1个可与渗调蛋基因启动子中FA片段结合的蛋白因子的基因OPBP1.核酸序列分析表明OPBP1包含有一个完整的阅读框架 ,可编码 2 77个氨基酸 ,氨基酸序列的比较分析表明该蛋白与近年来发现的一类新的DNA结合蛋白如EREBP ,AP ,ANT等具有相同的保守区 ,其中一些氨基酸完全相同 ,OPBP1与EREBP3最接近 ,同属该类新的DNA结合蛋白的第 1组 ,仅有 1个保守区 . 相似文献
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人体胚胎型ε-珠蛋白基因5‘旁侧一个沉默子(-392--177bp)对关闭该基因在胎儿期的表达起重要作用。DNaseⅠ足谠法分析已表明在沉默子区内存在着一个明显的蛋白质因子结合位点(-278--235bp)。为了筛选与沉默子DNA特异结合的蛋白质因子,将该保护区域的DNA序列作为靶序列,采用酵母单杂交系统对人胎儿肝cDNA表达文库进行筛选,并对获得的克隆进行序列分析。初步的结果表明,已分离到了人核糖体大亚基蛋白3(ribosomal protein L3,RPL3)的全长cDNA克隆。体外凝胶电泳阻抑分析及竞争实验亦证明该蛋白质与沉默子DNA存在相互作用。提示RPL3可能通过与沉默子DNA的结合参与调节ε-珠蛋白基因的关闭。 相似文献
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Glyoxalase system in yeasts: structure, function, and physiology 总被引:1,自引:0,他引:1
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