红豆杉种质资源遗传多样性的AFLP分析

目的：通过对5份红豆杉种质资源的AFLP分析,探求各种质间的遗传多样性。方法：采用扩增片段长度多态性（AFLP）标记,在DNA水平上进行遗传多样性研究,筛选了32对选择性扩增引物,将扩增出的条带作为原始矩阵,用NTSYS-PC软件计算并分析了红豆杉种质间的相似度,构建了遗传系统进化树。结果：（1）SDS法提取的红豆杉基因组DNA质量较佳,能够满足AFLP分析的要求;（2）从32对选择性扩增引物中,筛选出10对多态性较强、带型较好、分辨率较高的组合;（3）构建了红豆杉AFLP指纹图谱,将5个红豆杉种质全部区分开来;（4）通过构建进化树,把5个种质分成3类。结论：红豆杉种质资源有丰富的遗传多样性。     

AFLP标记在玉米种质资源鉴定中的应用

利用AFLP分子标记技术对55份玉米(Z ea m ay s L.)种质材料进行了研究.结果表明,20对AFLP引物检测到清晰可见的带656条,其中多态性带487条.平均每个引物组合可以检测到24.4条多态性带.将55份玉米材料聚为6组,与材料来源基本一致.结果显示AFLP有利于玉米遗传多样性分析.对来源美国先锋的P ioneer系列与瑞得种群和BSSS种群的关系进行了初步探讨,认为P ioneer系列中有很多材料与瑞得种群有亲缘关系.     

野生鸭茅种质遗传多样性的AFLP分析

本文应用扩增片段长度多态性（AFLP）技术,从64个引物对中筛选出9个,分别对37份鸭茅种质进行扩增,共得到400条清晰条带。其中多态性带336条,平均多态位点水平为84.0%,表现出较高的多态性。利用NTSYS-pc软件计算种质间的遗传距离,变化范围为0.0692～0.4214。用UPGMA方法进行聚类分析,在遗传相似系数为0.81水平上37份鸭茅种质可分为8个类群。用EIGEN方法进行主坐标分析,建立种质间相互关系的二维图。各种质在二维图中的分布与UPGMA聚类基本吻合。从分子水平分析,鸭茅遗传变异与染色体倍性和地理分布密切相关。     

利用AFLP分子标记探讨蜡梅种质资源的遗传多样性

利用AFLP分子标记技术,对中国蜡梅种质资源7个野生种群的遗传多样性进行了研究。利用筛选出的3对引物,共扩增出253条谱带,其中218条多态带,多态位点占86.17% ;种群间的基因分化系数为0.2906,说明蜡梅基因多样性主要存在于种群内;种群总的Nei s基因多样性指数为0.2933,Shannon信息多态性指数为0.4487,蜡梅总的遗传多样性水平较高。蜡梅不同种群遗传多样性水平差异较大,种群多态位点百分率在65.44% ～87.16%之间,Nei s基因多样性指数为0.1653 ～0.4012,Shannon信息多态性指数为0.3132 ～0.5603。神农架种群(SN)和保康种群(BK)的遗传多样性水平较高。用NTSYS2.01版软件对样品进行UPGMA聚类分析,结果7个种群并没有按地理距离进行聚类。最后提出要对各蜡梅野生群体采取相应的迁地和就地保护措施。     

利用AFLP标记鉴定小豆种质遗传多样性

利用11对AFLP引物对106份小豆种质的基因组DNA进行扩增,共扩增出603条清晰可辨的带型,其中208条具有多态性,比例为34．5％,平均每对引物扩增出18．9条多态性带。基于AFLP标记,把106份小豆种质聚类划分为4个组群,该组群的划分与小豆的生态地域性存在一定的相关性。     

AFLP技术及其在茶树种质资源研究中的应用(综述)

AFLP分子标记技术具有快速、方便、分辨率高、重复性好等优点,在茶树种质资源研究中应用潜力很大。本文简要介绍AFLP分析技术的原理、特点与进展,并综述近年来AFLP标记技术在茶树种质资源研究中的应用。     

广西毛竹种质资源AFLP分析

采用扩增片段长度多态性分子标记方法,对收集于广西的11个种源33份毛竹种质进行了分析.结果表明：5对引物组合用于选择性扩增,共得到198条扩增带,其中多态性带47条(23．74％);11个毛竹种源间的亲缘关系较近,但仍存在着一定的遗传变异,它们之间的遗传距离 D 在0．0006~0．1369之间;UPGMA 聚类分析,可将供试的11个毛竹种源分为4大类,其中昭平种源和南丹种源各为一类,与其它两类较易区分. PCA 分析结果与聚类分析结果相一致;Mantel 检验结果表明毛竹各种源遗传距离与地理距离间相关性显著(r ＝0．5558,P ＝0．0160).说明 AFLP 分子标记能将 11个种源33份毛竹种质区分开,是毛竹种质资源鉴别的有效手段和方法.     

RAPD标记在紫菜遗传多样性检测和种质鉴定中的应用

用ＲＡＰＤ技术对４类紫菜（Ｐｏｒｐｈｙｒａ ｙｅｚｏｅｎｓｉｓ,Ｐ．ｈａｉｔａｎｅｎｓｉｓ,Ｐ．ｋａｔａｄｎｉ ｖａｒ．ｈｅｍｉｐｈｙｌｌａ和Ｐ．ｏｌｉｇｏｓｐｅｒｍａｔａｎｇｉａ）的１５个无性系丝状体进行了遗传多样履分析,从５０个ＯＰＥＲＯＮ引物中经过初筛,其中６个引物可以扩增出稳定的可重复的图谱。这６个引物共扩增出了６０条带,多态性比例达９７．１％。根据ＲＡＰＤ结果将这１５个无性了紫菜的ＤＮＡ     

倍性分析和AFLP标记相结合鉴定金柑新种质

采用倍性分析和AFLP标记相结合,对滑皮金桔和变异单株金柑Ⅱ进行遗传鉴定分析。结果表明:滑皮金桔是2倍体,金柑Ⅱ是4倍体;选用12对AFLP引物组合,就8份金柑资源进行遗传多样性分析及分类研究,共获得清晰可见的标记341,其中多态性标记95,占27.8%,供试材料相似系数在0.867~0.985之间,能将8个品种区分开,滑皮金桔与普通金柑相似性系数为96.8%,金柑Ⅱ与普通金柑相似性系数为95.8%,滑皮金桔与金柑Ⅱ相似性系数为95.7%。表明滑皮金桔和金柑Ⅱ是不同于普通金柑的变异新种质,可以直接作为品种资源加以利用。     

111份大薯种质资源遗传多样性的AFLP分析

采用AFLP分子标记方法对收集于6省不同地区的111份大薯种质资源进行遗传多样性分析。筛选到的8个AFLP引物组合扩增到1291个位点,其中1286个是多态性位点。利用多态性信息含量(PIC)、标记指数(MI)和解析强度(RP)分析不同引物组合的标记效率,获得引物的PIC平均值为0.22,MI平均值为35.67,RP平均值为50.50,表明引物扩增位点的高多态性和对大薯种质资源具有强辨别能力,其中引物E-AAC/CAG-M(PIC 0.24、MI 38.56、RP 56.35)具有较高的标记效率。111份大薯种质的遗传相似系数(GS)在0.30~0.82之间,平均为0.58,表明大薯种质资源的遗传相似性较低。采用UPGMA对大薯种质进行聚类分析,遗传相似系数在0.54时,111份材料被划分为4个类群和3个单独的分支,不同地区来源的大薯材料在聚类图中没有明显界限。     

AFLP Fingerprinting Analysis of Elite Hevea brasiliensis Germplasm

There are more than 6 000 clones of Hevea brasiliensis Mull. Ary germplasm in the germplasm garden of Chinese National Key Biotechnology Laboratory for Tropical Crops and some of them are elite germplasm demonstrated by production and previous studies. AFLP (amplified fragment length polymorphism) fingerprinting analysis was performed on 25 clones (15 of Wickham clones and 10 of Amazon wild clones which possess phenotypes with high-yielding/low-yielding, cold-tolerance/cold-sensitivity, oidium-resistance/oidium-sensitivity, tapping panel dryness (TPD)/healthy) respectively through a 377 DNA sequencer (P. E. Corp.) and PAGE electrophoresis results were analyzed by using GeneScanTMand GenotypeTM Analysis software (P.E.Corp.). The fragment profiles of different clones were obtained. Five hundred and eighteen fragments were generated by two primer combinations screened from 64 primer combinations and 511 fragments appeared to be polymorphic (98.6%). Genetic distance ranged from 0.25 to 0.81 between clones and ranged from 0.07 to 0.17 within RRIM600 clone. A specific 320 bp fragment of the oidium-resistant clones was found through genotype analysis. These results showed that AFLP fingerprints were highly reproducible and powerful and can be widely used in germplasm identification and genetic diversity analysis of Hevea brasiliensis. In addition, based on the AFLP data, cluster analysis was performed. Cluster results showed that all the clones studied were almost clustered into a group one by one.      

云南保存橡胶树魏克汉种质资源亲子系谱分析

对“农业部景洪橡胶树种质资源圃”（云南景洪）保存的290份魏克汉种质资源进行了亲子系谱分析。结果表明,无性系GT1、PR107、PB86、RRIM600、云研277-5、PB5/51、IAN873的后代为210份,占72.41%。从表型看,魏克汉种质资源群体变异丰富,实际上遗传基础很窄。本文以GT1、PR107、PB86、RRIM600、云研277-5、PB5/51、IAN873为主线建立了亲子系谱图,并对部分种质资源的性状进行了分析,获得一些性状的传递遗传规律,供育种工作者参考。     

橡胶树魏克汉种质群体结构分析

群体结构是引起关联分析假阳性的最主要因素。本研究基于25个EST-SSRs位点,分析了283份橡胶树魏克汉种质群体的哈迪-温伯格平衡和群体分层情况。结果表明,在被检查的25个位点中13个位点偏离哈迪-温伯格平衡;在共祖系数为50%、60%、70%和80%时,283份种质中具有明确亚群归属的分别只有155份、110份、61份和22份,分别占总种质的54.78%、38.87%、21.55%和7.78%。同时,25个多态位点共形成了300个位点组合,20个位点组合(6.67%)呈显著的连锁不平衡状态,其中5个位点组合(1.67%)达到极显著连锁不平衡。由上可知283份橡胶树魏克汉种质所构成的群体具有一定的群体分层,但分化程度较小,可用于关联分析。     

橡胶树魏克汉种质资源生长与形质性状变异分析

于2009-2016年每年12月中旬,对2008年定植保存在"农业部景洪橡胶树种质资源圃"内来自4个国家的364份橡胶树魏克汉种质资源1740株林木的年度径围生长量进行了跟踪观测,2016年12月底对其枝下高、主干通直度、主干分杈、侧枝分枝轮、侧枝粗细、侧枝分枝角、侧枝伸展等指标进行了观测,统计分析了年度径围生长规律及变异情况;以364份种质资源的调查数据对8个指标的遗传多样性指数进行了分析,并分别以基因型和国家为单位进行了多指标综合聚类,旨在为揭示橡胶树魏克汉种质资源遗传多样性及合理保护和利用提供理论依据。研究结果表明,可以根据林木的茎粗生长量将保存的364份魏克汉种质资源划分成3个类群,依次为缓慢型(径围50 cm)、中间型(径围在50~60 cm)、速生型(径围60 cm),其中,8年生时径围总生长量平均为52.88 cm,变幅为41.50~64.00 cm;缓慢型均值为47.49 cm,变幅为40.50~49.75 cm;中间型均值为54.02 cm,变幅为50.00~59.75 cm;速生型均值为61.07 cm,变幅为60.00~64.00 cm;速生型与缓慢型之间均值相差13.58 cm。从变异程度来看,总体、缓慢型、中间型、速生型等年度间变异系数变幅依次为10.87%~25.81%、10.20%~26.89%、9.32%~25.62%、8.64%~20.78%。随着林龄的增加,3类群体连年生长量与年平均生长量均呈现出先增大后降低的趋势,且两者在8年间只出现了1次相交,相交时间在3~4年生之间,速生型相交时间较晚一些。年度间径围生长量相关性分析表明,缓慢型和中间型群体相关性均达到极显著正相关(除中间型1年生与8年生间相关性不显著外),速生型群体3年生后各年度间相关性达到极显著正相关。8个指标的遗传多样性指数从大到小排序依次为:枝下高(1.835)径围生长量(1.713)侧枝分枝轮(1.222)侧枝粗细(1.192)侧枝分枝角(1.079)主干通直度(1.032)主干分杈数(0.991)侧枝伸展(0.579),多数指标遗传多样性指数偏小。聚类结果表明,来自同一国家的种质大部分聚在一组或几组;4个国家种质关系最为密切的是印度尼西亚和马来西亚,其次是印度尼西亚和中国,距离较远的是斯里兰卡。综上可知,国内保存的橡胶树魏克汉种质资源8个性状变异程度不大,遗传多样性丰度低。建议在进行早期选择时,以较小的林龄(如2年生)进行淘汰选择,以较大的林龄(如4年生)进行速生资源选择,其中7份速生型种质资源可直接用来培育胶木兼优无性系或作为亲本材料进行杂交育种。     

橡胶树AFLP银染体系的建立和优化

目的:扩增片段长度多态性(AFLP)为遗传图谱的构建及育种的辅助选择提供了有力的工具。建立一套适合橡胶树的AFLP技术优化体系。方法:以197个GT1×IAN873橡胶树杂交群体为材料,通过对影响AFLP的多种关键因素如模板DNA质量、酶切连接体系、酶切连接反应时间、预扩增体系、选择性体系的分析进行研究。结果与结论:找出一套适于热带植物基因组DNA提取及橡胶树AFLP技术。用改进的CTAB法,经多次抽提纯化,用细玻璃棒挑出DNA得到高质量的模板DNA;酶切连接时DNA模板为250ng,反应体系采用各3U的EcoRⅠ/MseⅡ/T4连接酶,反应时间为9h;预扩增模板为稀释1/2的酶切连接产物,用量为1μL;选择性扩增要用稀释至1/20的预扩增产物。     

云南保存橡胶树部分种质资源干形及分枝变异分析

对保存于"农业部景洪橡胶树种质资源圃"的1904份橡胶树81’IRRDB种质资源的主干通直度、主干分杈、侧枝分枝轮、侧枝粗细、侧枝分枝角、侧枝伸展等6个表型性状进行调查和分析。结果表明,云南保存橡胶树种质资源具有丰富的遗传多样性(0.2604~1.6731),多样性指数最高的是主干通直度,达1.6731,其次是主干分杈、侧枝粗细、侧枝分枝轮和侧枝分枝角,最低的是侧枝伸展。6个表型性状的相对分布频率最小值为2.92%~8.05%,最大值为41.26%~93.37%。用UPGMA法聚类,当欧式距离为1.05时,1904份样本被聚为5组,其中最大1组包括98.42%的样本,表明同一性状在每份种质资源间具有很大程度的相似性;用Furthest Neighbor法聚类,在欧式距离为1.45时,1904份样本被聚为7组。2种聚类方法都能将每份种质明显区分出来,表明各性状变异极其丰富。     

巴西橡胶树HbCMT的克隆与表达分析

通过PCR和RACE技术克隆了巴西橡胶树中一个染色质甲基化酶(Chromomethylase, CMT)基因（HbCMT）。HbCMT长2697 bp,含有2556 bp的阅读框,编码851个氨基酸。推测HbCMT分子量为95.67 KD,等电点为5.38,氨基酸序列与可可、葡萄、黄瓜、鹰嘴豆、番茄、拟南芥CMT家族成员的同源性分别为77％、74％、72%、67%、64%和52%。定量PCR分析表明HbCMT在巴西橡胶树的根、树皮、叶、胶乳中均有表达,其中在胶乳中表达量最低,此外HbCMT在橡胶树自根幼态无性系的胶乳中表达比老态无性系胶乳中的表达低。     

Seasonal Changes of Cambial Activity and Phloem Development in Hevea brasiliensis

There is definitely seasonal activity in cambial growth in the trunk of Hevea brasi- liensis planted on Hainan Island and the cambial growth ceases during leaf-fail and leaf-absent period simultaneously with lower temperature and dries. The sieve elements founction for one-half year to two years. The variation in conducting-phloem thicknesses in a year is not significant and the conducting-phloem retains in about the same thickness during leaf-fall and leaf-absent period as that during the other periods in a year.     

巴西橡胶树转基因研究现状与展望

由于存在遗传背景狭窄、高度杂合化、育种周期长等特点,巴西橡胶树育种进展非常缓慢。转基因技术为拓展其的遗传范围、加速育种进程提供了契机。在过去20年里,橡胶树转基因研究取得了很大进展：成功应用的转化技术包括基因枪法和农杆菌介导法,受体材料包括花药和内珠被愈伤,育种目标涉及到提高胶乳产量、抗死皮和作为生物反应器等。但同时也存在组培程序不够成熟、转化技术和外植体比较单一、转化效率低下等问题。最后,对以后转化体系的优化、转基因育种方向进行了分析和展望。     

巴西橡胶树的脂酰辅酶A还原酶cDNA克隆及其序列分析

从巴西橡胶树差减cDNA文库中筛选到一个与脂酰辅酶A还原酶同源性较高的基因片段,根据该基因片段序列信息,设计特异引物,采用RACE进行差异片段的5’和3’端的扩增,获得长度为1365bp的cDNA克隆R28（GenBank登陆号：AY461413）。序列分析表明,该基因包含1149bp的开放阅读框,5＇-UTR为96bp,3＇-UTR为128bp,编码382个氨基酸,推测其蛋白质的分子量为43．5kDa,等电点为8．97,有一个跨膜螺旋N（187至215位氨基酸）和1个由17个氨基酸组成的信号肽（1至17位氨基酸）。R28含有脂酰辅酶A还原酶的保守（NADP结合蛋白保守区）,推测该基因是一个脂酰辅酶A还原酶基因。