破伤风抗毒素渗透压的质量控制标准

目的：通过对不同厂家破伤风抗毒素产品的渗透压浓度的调查,了解国内该产品的渗透压浓度的波动范围,为生产过程中渗透压浓度质量控制提供依据。方法采用Advanced 3250型冰点渗透压仪检测破伤风抗毒素的渗透压浓度。结果不同厂家破伤风抗毒素制品的渗透压浓度均不低于240 mOsmol/L。结论破伤风抗毒素渗透压浓度波动范围均与国外同类制品基本一致,符合欧洲药典规定。     

应用双抗原ELISA夹心法检测破伤风抗毒素效力的试验

作者建立了一套适用于破伤风抗毒素效力检测的双抗原夹心ELISA法,对破伤风类毒素免疫后的豚鼠和马匹分别进行了血清效价测定,并和传统的小鼠攻毒法的效力检测进行了比较,结果表明：该检测方法与小鼠攻毒法对不同水平的破伤风抗毒素效力检测,结果是一致的,有很好的相关性;此法省时、特异、灵敏,可成为另一种检测破伤风抗毒素的有效方法。     

绿脓杆菌抗毒素精制方法与效价测定方法的研究

本文采用胃酶消化──硫酸铵盐析法对绿脓杆菌外毒素Ａ（ＰＥＡ）免疫马血浆进行了试制提纯,对该法酶处理及热变性中影响精制效果的几个主要因素进行了比较试验,同时对文中采用的４种效价测定方法进行了筛选。结果表明,胃酶消化法可用于ＰＥＡ免疫马血浆的精制;效价测定以生物学方法（细胞毒性中和试验、小鼠致死毒性中和试验）为佳。综合比较试验的结果,本文拟订了ＰＥＡ免疫马血浆精制的“修订法”并与“常规法”进行了精制比较。初步结果表明,修订法的精制效果优于常规法。     

有机溶剂/去污剂病毒灭活处理对破伤风抗毒素质量的影响

目的 探索用有机溶剂/去污剂(solvent/detergent, S/D)病毒灭活处理对破伤风抗毒素质量的影响。方法 3批破伤风抗毒素样品,每批样品取3等份,向其中2份中分别加入磷酸三丁酯(tri- n -butylphosphate, TNBP)和吐温-80(Tween 80)至终质量分数为0.3%和1%;一份放置在(25±1)℃水浴中振摇6 h后取样,另一份放置在(30±1)℃水浴中振摇4 h后取样;向第3份破伤风抗毒素原液中加入等量的生理盐水混匀后室温放置作为对照。各样品经超滤后检测其效价和蛋白质含量,同时用SDS-PAGE电泳和凝胶过滤色谱柱测定。结果 破伤风抗毒素原液样品经过S/D病毒灭活处理后,其动物效价与对照相比差异无统计学意义( P >0.05),蛋白质含量、分子大小分布无明显变化,多聚体、二聚体及F(ab′) 2含量也无明显变化。结论 S/D病毒灭活处理对破伤风抗毒素的效价,蛋白质含量,分子大小分布,多聚体、二聚体及F(ab′) 2含量均无明显影响,可以作为破伤风抗毒素病毒灭活的候选方法。     

片段抗体纯化工艺的优化

以单克隆抗体为特异性载体标记放射性核素用于肿瘤病人的导向治疗 ,已取得很好的效果。用蛋白酶水解全抗体得到的Ｆ(ａｂ′) 2 片段 ,由于去除了Ｆｃ段 ,减小了人抗鼠异种蛋白排斥反应 ,具有分子量小 ,到达肿瘤部位迅速 ,血液本底和非瘤组织的清除快等优点 ,较之全抗体有更大应用潜力。但Ｆ(ａｂ′) 2片段性质不稳定 ,制备工艺复杂 ,采用旧的纯化工艺如分子筛、离子交换、亲和色谱[1～ 3] 等很难制备出符合临床应用质量标准的片段抗体。为此 ,我们在ＦＰＬＣ上建立了疏水作用色谱法纯化Ｆ(ａｂ′) 2 片段 ,取得了理想的结果。本文报道三组不…     

低pH孵放病毒灭活处理对马破伤风免疫球蛋白F(ab')_2质量的影响

目的考察低pH孵放病毒灭活处理对马破伤风免疫球蛋白F(ab')_2质量的影响。方法取马破伤风免疫球蛋白F(ab')_24份,分别调整pH至3.8、4.1、4.4及6.5,于(25±1)℃条件下放置21 d后取样测定抗体效价、聚合物(二聚体、多聚体)及F(ab')_2含量,评估低pH孵放病毒灭活法对上述质量指标的影响;以1 mL/瓶的规格分装经低pH孵放病毒灭活处理的马破伤风免疫球蛋白F(ab')_2,于(25±1)℃条件下存放6个月,定期取样并进行抗体效价、聚合物(二聚体、多聚体)及F(ab')_2含量检测,评估其稳定性。结果马破伤风免疫球蛋白F(ab')_2经低pH孵放病毒灭活后,其抗体效价、聚合物(二聚体、多聚体)及F(ab')_2含量未发生明显变化;样品于(25±1)℃条件下存放6个月后,抗体效价和F(ab')_2含量均符合《中华人民共和国药典》2015版(三部)的要求。结论低pH孵放病毒灭活法适用于马破伤风免疫球蛋白F(ab')_2病毒的灭活。     

低pH孵放法对马破伤风免疫球蛋白F(ab′)_2病毒灭活效果的验证

目的采用低pH孵放法对马破伤风免疫球蛋白F(ab′)_2样品中辛德毕斯病毒(sindbis virus, SINV)、水疱性口炎病毒(vesicular stomatitis virus, VSV)、脑心肌炎病毒(encephalomyocarditis virus, EMCV)的灭活效果进行验证。方法以SINV、VSV、EMCV作为指示病毒,将3批马破伤风免疫球蛋白F(ab′)_2的pH调至4.1±0.1,每批12瓶(3 mL/瓶),分别加入333μL指示病毒,25℃放置21 d灭活病毒,同时设置中性对照和阳性对照,并于0 d、1 d、3 d、7 d、14 d、21 d取样测定剩余病毒滴度,验证低pH孵放法的病毒灭活效果。结果马破伤风免疫球蛋白F(ab′)_2样品经低pH孵放处理21 d后,SINV、VSV和EMCV等3种指示病毒残余病毒滴度均≤0.5 lgTCID_(50)/0.1 mL,灭活效果分别达到5.50～5.83、5.70～6.00和6.00～6.17 lgTCID_(50)/0.1 mL。结论采用低pH孵放法处理马破伤风免疫球蛋白F(ab′)_2中SINV、VSV、EMCV,病毒滴度下降值均>4 lgTCID_(50)/0.1 mL,灭活效果较好。     

精制溶栓酶治疗慢性肺心病研究

用常规方法治疗慢性肺心病１０例,另加用精制溶栓酶治疗８例作对比研究,观察临床症状改善,血气分析、及部分血粘度指标变化情况,结果发现：加用溶栓酶组能使血气及血粘度指标更好改善,分析认为与溶栓酶的抗凝、去纤、扩血管、改善肺微循环作用有关。     

CD20F(ab'''')2抗体的发酵与纯化

转化了质粒PYZcpp^3的16C9大肠杆菌可高水平地分泌表达可溶性CD20 F(ab’)2抗体;采用经优化的培养条件,在发酵罐上进行高密度培养OD550值达140;每升湿菌菌重200g;抗体的产量每升为241mg,其中F(ab’)2片段达50％,F(ab‘)2可以特异性的识别CD20^ 细胞并与CD20相结合;F(ab‘)2对Raji细胞的IC50值为22.8μg／mL;而Fab’对Raji细胞的IC50值为45．9μg／mL。