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一氧化氮抑制血管紧张素Ⅱ和内皮素—1诱导的心肌细胞原癌基因c—fo … 总被引:3,自引:0,他引:3
在原代培养的新生大鼠心肌细胞上,探讨一氧化氮(NO)对血管紧张素Ⅱ(AⅡ)和内皮素-1(ET-1)诱导的心肌细胞肥大和原癌基因c-fos表达的影响。用Bradford法测定心肌细胞总蛋白含量(作为心肌细胞肥大的指标);用基因特异性引物和SuperScript一步法进行逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR),检测大鼠心肌细胞原癌基因c-fos的表达(以GAPDH为内标)。结果显示,AⅡ和ET-1分别作 相似文献
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蛋白激酶C在血管紧张素Ⅱ抑制心肌细胞一氧化氮合成中的作用 总被引:1,自引:0,他引:1
实验用硝酸还原酶法测定培养新生大鼠心肌细胞亚硝酸盐 (NO 2 )和硝酸盐 (NO 3)总量 (NO 2 /NO 3) ,反映心肌细胞一氧化氮 (NO)生成情况 ,观察血管紧张素Ⅱ (AngⅡ )对心肌细胞NO生成的影响及其蛋白激酶C (PKC)在该效应中的作用。结果显示 :AngⅡ可减少心肌细胞NO的含量 ,并具有明显的剂量 效应关系 ;AngⅡ受体拮抗剂saralasin可明显抑制AngⅡ对NO生成的影响 ;L 精氨酸 (L Arg)明显增加心肌细胞NO的浓度 ,此效应可被一氧化氮合酶 (NOS)抑制剂L NAME所抑制 ,L Arg未能消除AngⅡ抑制NO的作用 ;用佛波酯 (PMA)处理心肌细胞 ,其NO的生成明显减少 ,L NAME可加强此抑制效应 ;PKC抑制剂staurosporine (Stau)可明显削弱AngⅡ抑制心肌细胞NO生成的效应。结果提示 :AngⅡ具有抑制心肌细胞NO生成的作用 ,此作用可能是通过抑制心肌细胞NOS的活性而实现的 ;AngⅡ受体介导AngⅡ抑制心肌细胞NO生成的作用 ;激活PKC可使新生大鼠心肌细胞NO生成减少 ,NOS参与此抑制效应 ,新生大鼠心肌细胞NO生成过程的信号转导通路可能与PKC有关 ;PKC参与AngⅡ抑制心肌细胞NO的生成。 相似文献
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蛋白激酶C在血管紧张素Ⅱ抑制心肌细胞——氧化氮合成中的作用 总被引:3,自引:0,他引:3
实验用硝酸还原酶法测定培养新生大鼠内肌细胞亚硝酸盐(NO2)和硝酸盐(NO3)总量(NO2/NO3),反映心肌细胞一氧化氮(NO)生成情况,观察血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)对凡肌细胞NO生成的及其蛋白激酶C(PKC)在该效应中的作用。结果显示:AngⅡ可减少心肌细胞NO的含量,并具有明显的剂量-效应关系;AngⅡ受体拮抗剂saralasin可明显抵制AngⅡ对NO生成的影响;L-精氨酸(L-Arg)明 相似文献
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一氧化氮在血管紧张素Ⅱ激活蛋白激酶C中的作用 总被引:7,自引:0,他引:7
实验在培养新生大鼠心肌细胞中检测NO前体L-精氨酸(L-Arg)和NO供体硝普钠(SNP)对血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)激活蛋白激酶C(PKC)的作用,以探讨心肌细胞PKC水平的信号转导途径,实验结果如下:(1)无血清DMEM培养心肌细胞24h后加入AngⅡ,PKC活性呈剂量依赖性增高;(2)培养基中加入L-Arg,PKC活性呈剂量依赖性降低;(3)用L-Arg100μmol/L进行预处理,30min后分别加入AngⅡ0.1μmol/L或PMA10μmol/L,PKC活性均明显降低,与单纯AngⅡ组和单纯PMA组相比均有显著性差异;用NOS抑制剂L-NAME预处理后,再加入L-Arg,可明显阻断L-Arg对上述两个效应的影响;(4)培养液中加入NO供体SNP,PKC活性呈剂量依赖性地降低;(5)用SNP10μmol/L预处理心肌细胞,5min后分别加入AngⅡ或PMA,PKC活性分别与单纯AngⅡ和单纯PMA组相比均明显降低。以上结果表明,AngⅡ能剂量依赖性激活PKC,而NO可剂量依赖性抑制PKC活性;NOS参与L-Arg抑制AngⅡ或PMA激活PKC的作用。这些观察提示,NO抑制AngⅡ对心肌细胞的作用可能是通过抑制PKC活性实现的,PKC可能是NO和AngⅡ在心肌细胞内信号转导的交汇点(cross talk)。 相似文献
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目的通过体外细胞实验研究,探讨血管紧张素受体1在血管紧张素Ⅱ诱导人星形胶质细胞活性氧产生和细胞老化中的作用。方法人星形胶质细胞随机分为三组:血管紧张素Ⅱ+Cand(坎地沙坦)组和血管紧张素Ⅱ+tempol组。血管紧张素Ⅱ组是用100nM血管紧张素Ⅱ刺激人星形胶质细胞3天,血管紧张素Ⅱ+Cand组和血管紧张素Ⅱ+tempol组先用血管紧张素受体1阻滞剂坎地沙坦(100nM)和氧自由基清除剂tempol(3mM)预处理,再用100nM血管紧张素II刺激人星形胶质细胞3天,利用β半乳糖苷酶染色评估细胞老化。不同剂量(0、1nM、10nM、100nM、1000nM和1000nM+坎地沙坦)的血管紧张素Ⅱ刺激人星形胶质细胞30min,DHE染色评估细胞内活性氧产生。结果血管紧张素Ⅱ引起人星形胶质细胞DHE染色表达增多和β半乳糖苷酶染色细胞增多。利用血管紧张素受体1阻滞剂坎地沙坦和氧自由基清除剂tempol预处理逆转了血管紧张素Ⅱ引起的星形胶质细胞老化。结论血紧张素Ⅱ是通过血管紧张素受体1和超氧阴离子产生引起星形胶质细胞的老化。 相似文献
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AngⅡ和PKC对心肌细胞AngⅡ 1型受体的转录调节 总被引:3,自引:0,他引:3
利用体外培养的心肌细胞,观察血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)和蛋白激酶C(PKC)在诱导AngⅡ1型受体(AT1)基因表达及蛋白质代谢中的作用.研究结果表明:AngⅡ可诱导AT1mRNA水平一过性下调,呈时间及剂量依赖性,10nmol/LAngⅡ刺激细胞6h,引起AT1mRNA水平降低幅度最大,降至对照的51.6%±9.5%,然后逐渐回升,24h恢复至对照水平.30μmol/LH-7(PKC抑制剂)能阻断AngⅡ诱导的AT1mRNA水平的下调.0.3μmol/L的PMA(PKC激活剂)单独应用可诱导AT1mRNA水平下调达对照的43%±8%,加入AT1拮抗剂DMP811及Dup753均可阻断AngⅡ诱导的AT1mRNA水平的下调.10nmol/L的AngⅡ刺激心肌细胞96h可使蛋白含量降低至对照的73.4%±5.6%,而加药持续刺激144h可使蛋白含量较对照增加33.8%±6.3%,H-7不能阻断AngⅡ诱导的蛋白含量降低,但可有效地抑制蛋白含量的增加.以上结果提示:AngⅡ对心肌细胞AT1基因的转录和细胞的蛋白代谢有调节作用,而PKC则参与了AngⅡ的这种调节作用 相似文献
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内皮素-1对培养新生大鼠心肌细胞原癌基因c-fos表达的诱导 总被引:8,自引:1,他引:8
本实验用无血清的培养新生大鼠心肌细胞,探讨内皮素1(ET1)对原癌基因cfos表达的作用。结果显示:ET1可显著诱导cfos的表达,其表达的高峰在30min,2h恢复到正常水平,并呈剂量依赖性反应和被ETA的特异性受体拮抗剂BQ123所阻断;蛋白激酶C(PKC)激动剂PMA可诱导cfos表达,而PKC抑制剂Staurosporine则可阻断ET1诱导的cfos表达;钙通道阻断剂硝苯吡啶预处理心肌细胞对ET1诱导的心肌细胞的cfos表达无明显的作用。这些结果提示,ET1诱导cfos表达是通过ETA受体介导的,PKC在此过程中起重要作用。 相似文献
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血管紧张素-(1-7)对大鼠血管平滑肌细胞PKC和ERK1/2的抑制作用 总被引:5,自引:1,他引:5
采用Westernblot、氚 胸腺嘧啶 ( 3H TdR)和氚 亮氨酸 ( 3H Leu )掺入等技术和方法 ,用血管紧张素Ⅱ(AngⅡ )和血管紧张素 ( 1 7) [Ang ( 1 7) ]刺激大鼠血管平滑肌细胞 (VSMCs) ,观察和分析Ang ( 1 7)对VSMCs增殖及蛋白激酶C (PKC)和胞外调节蛋白激酶 (ERK)表达的影响。Ang ( 1 7)能明显抑制基础和AngⅡ刺激下的VSMCsPKC ζ和ERK1/ 2蛋白表达 (P <0 0 1或P <0 0 5 ) ,减少3H TdR和3H Leu掺入量 (P <0 0 1或P <0 0 5 )。结果提示 ,Ang ( 1 7)对VSMCs增殖有抑制作用 ,这可能与影响PKC ζ和ERK1/ 2蛋白表达有关。 相似文献
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内皮素对心血管系统内血管紧张素Ⅱ释放的影响 总被引:36,自引:0,他引:36
采用放免测定及免疫组化技术证明大鼠心血管系统内有血管紧张素Ⅱ免疫活性物质的存在,其心房、主动脉组织及培养的主动脉平滑肌细胞内的含量分别为:7.2±2.7pg/mg 蛋白、152±59.2pg/mg 蛋白和3.5±0.8pg/2×10~5细胞。内皮素是由内皮细胞产生的一个具有强大缩血管功能的多肽,可显著增强培养的鼠主动脉及鼠主动脉细胞释放血管紧张素Ⅱ。这一结果表明,很可能存在一个区域化的内皮素——血管紧张素相互作用,这个相互作用可能参与局部血流及血管紧张度的调节,也还可能参与心肌肥厚,血管肥厚等疾病过程。 相似文献
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活性氧介导内皮素-1诱导的培养新生大鼠心肌细胞肥大 总被引:4,自引:0,他引:4
实验在原代培养的新生大鼠心肌细胞中进行,检测内皮素-1(endothelin-1,ET-1)及其他药物对心肌细胞活性氧(reactiveoxygen species,ROS)产生和心肌细胞肥大的作用,以探讨ROS在ET-1诱导的心肌细胞肥大信号通路中的作用及ROS与蛋白激酶C(protein kinase C,PKC)活化的关系。细胞内ROS水平用ROS敏感的荧光探针2,7-dichlorofluorescin dictate(DCF-DA)反映,心肌细胞肥大通过细胞内RNA含量、细胞内蛋白质含量、细胞表面积大小来确定。实验结果如下:单独使用ET-1后,心肌细胞内反应ROS含量的DCF-DA荧光值比对照组增加77%,反应心肌肥大的PI荧光值、细胞内蛋白质含量、细胞表面积也分别比对照组增加128%、87%和151%。ET-1合用内皮素受体A亚型(ET_A)受体拮抗剂ABT-627、PKC抑制剂CC或过氧化氢酶后,DCF-DA的增加分别减弱62%、60%和51%,同时心肌细胞肥大也被抑制,单独使用PKC激动剂佛波醇脂(PMA)也能使DCF-DA的产生比对照组增加74%。因此,在ET-1诱导心肌细胞肥大的过程中,ET-1能够使心肌细胞产生ROS和诱导ROS依赖的心肌细胞肥大,这一作用依赖于ET_A受体的激活和PKC的活化,·ROS在ET-1诱导心肌细胞肥大中起信号传递的作用。 相似文献
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研究血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导培养的成年大鼠心肌细胞(adult rat ventricular myocytes,ARVMs)凋亡.酶灌流消化法分离培养ARVMs,不同处理后,光镜观察形态改变,琼脂糖凝胶电泳定性分析DNA降解程度.结果发现培养的ARVMs经AngⅡ10μmol/L处理48 h后,大部分细胞变圆,胞浆浓缩;电泳显示核酸断裂片段"梯形"结构,上述改变在72 h更为明显.上述作用可被氯沙坦、维拉帕米和staurosporine所取消.这表明AngⅡ由AT1受体介导诱导培养的ARVMs凋亡,细胞内钙升高和PKC激活起重要作用. 相似文献
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血管紧张素Ⅱ诱导左心室原癌基因c—fos和c—myc的表达 总被引:2,自引:2,他引:2
本实验用Langendorff心脏灌流装置,探讨血管紧张素Ⅱ对左心室原癌基因c-fos和c-myc表达的作用。观察到血管紧张素Ⅱ能诱导左心室c-fos和c-myc的表达,c-fos表达早于c-myc表达,并呈量-效关系。这种作用可被血管紧张素Ⅱ受体抗剂saralasin所阻断。这些结果提示血管紧张素Ⅱ诱导的c-fos和c-myc的表达是受体介导的。TTS完全阻断血管紧张素Ⅱ诱导的c-fos表达。 相似文献
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血管紧张素Ⅱ诱导左心室原癌基因c-fos和c-myc的表达 总被引:2,自引:0,他引:2
本实验用Lanyendorff心脏灌流装置,探讨血管紧张素Ⅱ对左心室原癌基因c-fos和c-myc表达的作用。观察到血管紧张素Ⅱ能诱导左心室c-fos和c-myc的表达,c-fos表达早于c-myc表达,并呈量-效关系。这种作用可被血管紧张素Ⅱ受体拮抗剂saralasin所阻断。这些结果提示血管紧张素Ⅱ诱导的c-fos和c-myc的表达是受体介导的。TTX完全阻断血管紧张素Ⅱ诱导的c-fos表达。TTX对c-myc的表达无明显影响。 相似文献
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肾素-血管紧张素-醛固酮系统起初被认为是较简单的神经体液调节机制之一。但是,这一想法随着RAAS阻滞剂:肾素阻滞剂、血管紧张素转换酶抑制剂(ACEI)、AT1受体拮抗剂及盐皮质激素受体拮抗剂的深入研究而受到挑战。因此,RAAS的组成、以上药物发挥作用的具体通路及副作用均得到重新定义。在RAAS阻滞剂的应用过程中,机体肾素水平升高,并刺激肾素原受体(即无活性的肾素前体,PRR),进而对机体造成不良影响。同理,在AT1受体拮抗剂的应用过程中,血浆血管紧张素II的水平升高,并与2型血管紧张素II(AT2)受体结合,进而对机体产生有利作用。此外,随着ACEI及ARB的应用,血管紧张素1-7水平升高,其与Mas受体结合,发挥心脏及肾脏保护的作用,还可通过刺激干细胞发挥组织修复作用。 相似文献
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血管紧张素Ⅱ对培养心肌细胞蛋白质和DNA合成的影响 总被引:10,自引:0,他引:10
本文利用体外细胞培养技术,观察了血管紧张素Ⅱ对Wistar乳鼠的心肌细胞和心肌组织中非心肌细胞的促生长作用。结果表明:随AngⅡ浓度的升高,心肌细胞直径、总蛋白含量及^3H-Leu掺入率均呈剂量依赖性增加,而各组间^3H-TdR掺入率及心肌细胞数目则无明显变化。相反,AngⅡ在引起心肌组织中非心肌细胞(主要是成纤维细胞)的^3H-Leu掺入率增加的同时,也引起其^3H-TdR掺入率及细胞数目的增加 相似文献
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一氧化氮抑制AngⅡ介导的心肌肥大反应的信号机制 总被引:12,自引:0,他引:12
本文主要利用培养的新生大鼠心肌细胞,从细胞学及分子生物学角度研究一氧化氮(NO)信号系统在AngⅡ介导的心肌肥大反应中的作用及机制。实验以心肌细胞蛋白合成速率、心房钠尿肽(ANP)的表达作为心肌肥大反应的指标,以硝酸盐及亚硝酸盐含量反映心肌细胞NO水平,以免疫印迹法测定MKP-1蛋白表达,以RT-PCR测定eNOS mRNA水平。结果发现:(1)L-精氨酸(L-Arg)10,100μmol/L分别增加心肌细胞NO水平16%及31%,L-Arg(100μmol/L)还可增加心肌细胞eNOS mRNA表达,其作用可被NOS抑制剂L-NAME所抑制;(2)L-Arg(100μmol/L)可降低AngⅡ(0.1μmol/L)诱导的心肌细胞ANP mRNA表达水平和蛋白合成速率,而在L-Arg处理之前用针对MKP-1的反义寡核苷酸转染心肌细胞,蛋白合成速率明显增加,可取消L-Arg的抑制作用,甚至超过AngⅡ组;(3)L-Arg(100μmol/L)明显增加MKP-1蛋白表达,比对照组增加225%,NOS抑制剂L-NAME及蛋白激酶G(PKG)抑制剂KT-5823皆可抑制L-Arg诱导的MKP-1蛋白表达,分别抑制88%、83%,而AngⅡ能增加L-Arg诱导的MKP-1的表达,较对照组增加365%,增强了L-Arg的作用。以上结果表明,NO抑制AngⅡ介导心肌肥大反应的机制可能是通过激活PKG,促进MKP-1的表达,从而增加MAPK去磷酸化实现的。 相似文献