钙调神经磷酸酶B亚基及钙调素的EPR研究

根据顺磁离子Mn~(2+)的取代特性,用EPR方法研究了钙调神经磷酸酶B亚基与其4个Ca~(2+)的结合位点,以及它们亲和力的细微差别。并同时进行了钙调素的对比研究。实验和Scatchard作图表明,B亚基有4个Ca~(2+)结合位点,2个高亲和力结合位点,其解离常数为4×10~(-6)mol/L;2个低亲和力结合位点,解离常数为9×10~(-5)mol/L。钙调素也有2个Ca~(2+)高亲和力结合位点,其解离常数为8×10~(-6)mol/L,2个低亲和力结合位点,解离常数为7×10~(-5)mol/L。钙调神经磷酸酶B亚基和钙调素Mn~(2+)结合位点的EPR研究对B亚基和钙调素在共同调节钙调神经磷酸酶中的作用提供了有用的信息。     

钙调神经磷酸酶

钙调神经磷酸酶是70年代末80年代初发现的一种直接依赖于钙和钙调素的磷蛋白磷酸酶。它大量存在于脑内,分子量80k,由催化亚基A和调节亚基B1:1组成。钙调神经磷酸酶是个多底物的磷蛋白磷酸酶,它的活性还受Mn²⁺,Ni²⁺等多种金属离子的调节。     

钙调神经磷酸酶的研究进展

钙调神经磷酸酶(CaN)是一种受Ca²⁺/钙调素调节的丝/苏氨酸蛋白磷酸酶,广泛存在于哺乳动物的组织细胞中,作为Ca²⁺信号下游的一种效应分子,参与多种细胞功能的调节.在T细胞活化的信号传导中起到调节枢纽的作用;在神经递质的释放、突触可塑性方面亦有重要的调节作用.新近的研究表明,CaN在心肌肥厚的发生发展中起到中心作用.对CaN的分子结构、酶学特性、组织分布、信号传导及生物学功能方面的研究进展进行了介绍.     

钙调神经磷酸酶及其研究进展

钙调神经磷酸酶是蛋白磷酸酶家族中的一个成员，是细胞信号传递中的效应酶和调节酶，尤其在Ｃａ＾２＋信号传递系统中起着举足轻重的作用。同时，ＣａＮ又是典型的Ｃａ＾２＋／ＣａＭ结合酶、调节酶。ＣａＮ参与了多种重要的细胞过程，包括它和学习记忆及老年性痴呆的关系，以及它在Ｔ细胞活化过程中的关键作用和在细胞死亡中的重要作用等。     

一种同时纯化钙谓神经磷酸酶和钙调素的有效方法

本文报导了一种能同时纯化钙调神经磷酸酶和钙调素的有效方法。牛脑粗提液经DE-52纤维素层析分段洗脱:0.5mol/L NaCl缓冲液洗脱峰经phenyl-sepharose亲和柱和G75 sephadex制得电泳纯钙调素。0.18mol/L KCl缓冲液洗脱峰经Affigel-Blue层析,硫酸铵盐析,钙调素亲和层析,G-200 Sephadex凝胶过滤制得电泳纯钙调神经磷酸酶。     

钙调神经磷酸酶调节因子RCANs的研究进展

钙调神经磷酸酶(calcineurin,CN)作为机体中的一种丝/苏氨酸磷酸酶,在关键的生物学过程中发挥着重要作用．RCANs (regulators of calcineurin) 是CN的一类内源调节因子,其家族成员在细胞中能够通过与CN在结构上的相互结合,起到调节CN活性的作用．而近来研究发现,该调节因子还可参与到CN-NFAT信号通路中发挥功能,从而与CN依赖的生理和病理过程的调控密切相关．因此,有必要对RCAN基因、RCANs蛋白与CN的相互作用以及该家族成员在病理条件下的重要功能作一个较为全面的综述,这些基础研究工作的进展将有助于为寻找新的疾病治疗方法和药物开辟新的途径．     

钙调神经磷酸酶及其二亚基免疫性质和功能的研究

<正> 钙调神经磷酸酶(Calcineurin, CaN)是目前所知唯一活性受钙、钙调素调控的磷蛋白磷酸酶。其含量占脑内蛋白总量的1％,必定有其重要的生理意义,但至今为止,它的生理功能仍很不清楚。本文试图用免疫学方法,对CaN的生理功能进行初步探索。     

大鼠出生后脑内钙调神经磷酸酶的研究

本文用BA-ELISA.immunoblotting及酶活力测定等方法,研究了大鼠脑中钙调神经磷酸酶在大鼠出生后的变化情况。结果表明,钙调神经磷酸酶的含量在大鼠出生后第二周和第三周显著增加,其活力也在出生后第二周达到顶峰。钙调神经磷酸酶这种有规律的变化与脑中突触形成在时间上是一致的,暗示钙调神经磷酸酶可能参与突触功能的调节。     

大鼠突触体钙调神经磷酸酶内源底物的研究

大鼠突触体钙调神经磷酸酶内源底物的研究阎力君魏群（北京师范大学分子生物学及生物化学研究室,北京１００８７５）关键词钙调神经磷酸酶;内源底物;突触体;电泳图谱的扫描和分析收稿日期：１９９６－１１－１１;接受日期：１９９６－１２－２４。＊国家自然科学基金...     

不同免疫抑制剂对钙调神经磷酸酶及其突变体的影响

利用定点突变技术构建并纯化了钙调神经磷酸酶A 亚基Loop7区及其附近的几个突变体, 进行了磷酸酶比活性及溶液构象的研究, 并通过它们与野生型的比较, 研究CN和免疫抑制药物的相互作用. 结果表明:删除Loop7中心区1个或几个氨基酸的突变体, 其磷酸酶比活性均高于野生型, 远紫外CD谱显示各突变体溶液构象均发生了改变. 免疫抑制剂复合物CsA-CyP明显抑制野生型CN的酶活, 而对Loop7区各突变体影响不大, 说明Loop7区定点突变改变了CsA-CyP和CN之间的相互作用. 对从传统中药中提取的成分进行检测发现, 中药成分ZIP1能对CN野生型和突变体都起直接的抑制作用, 而不需要体内结合物的存在. 提示CN的Loop7区是CsA-CyP起抑制作用的关键部位, 中药成分ZIP1对CN的抑制作用很值得深入研究.     

钙调神经磷酸酶和金属钒复合物的顺磁共振(ESR)研究

钙调神经磷酸酶是新近发现的一种磷蛋白磷酸酶。它由两个不同种亚基1:1组成。大亚基A(分子量为61K)和小亚基B(分子量为19K)。B亚基的一级结构和钙调素,肌钙蛋白C非常相似。     

钙调神经磷酸酶信号通路参与钙激动剂介导的心肌细胞肥大

目的在于探讨不同来源的细胞内游离钙(［Ca2+］i）对钙调神经磷酸酶（calcineurin,CaN）依赖信号通路和心肌细胞肥大的影响。方法以原代培养的乳鼠心肌细胞为模型,血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）、雷尼丁（RY）和三磷酸肌醇（IP3）（浓度均为10-7mol／L）激活心肌细胞［Ca2+］i,应用钙荧光指剂Fura-2／AM动态观测心肌细胞［Ca2+］i浓度,同时检测心肌细胞CaN活性及蛋白表达。用氚-亮氨酸（3H-Leu）掺入量测定心肌细胞蛋白质合成速率。结果发现AngⅡ、RY和IP3明显增加心肌细胞［Ca2+］i浓度、CaN活性及蛋白表达并提高3H-Leu的掺入量,与对照组心肌细胞相比差异显著（P＜0．01）。结论激活心肌细胞［Ca2+］i可明显提高心肌细胞蛋白合成速率,心肌细胞CaN活性及蛋白表达似与细胞［Ca2+］i变化有明显关系而与其来源无关,表明CaN信号通路在心肌细胞生长中发挥重要作用。     

钙调神经磷酸酶信号通路相关抑制因子研究进展

钙调神经磷酸酶(calcineurin,CaN)信号通路是介导心肌肥厚的一条重要通路,随着研究的不断深入, 其相关抑制因子的研究也受到了更多关注.综述了Ca2+CaN-NFAT信号通路上、下游及CaN本身的部分抑制因子在抗心肌肥大过程中的作用,这些因子的研究开发对心肌肥厚的治疗具有重要意义.     

大鼠大脑皮层中钙调神经磷酸酶活力的时空变化

以ＰＮＰＰ为底物测定了超离心制备的大鼠出生后早期和成年大脑皮层亚细胞各组分中钙调神经磷酸酶的活力。实验结果表明：（ｌ）钙调神经磷酸酶活力广泛地存在于胞液和突触部分,并且各亚细胞组分有明显差异。成年大鼠大脑皮层中ＣａＮ活力相对最高水平是在突触体,突触质,胞液,重的和轻的突触膜部分。（２）大鼠大脑皮层突触体中ＣａＮ活力在出生后第２周和第３周出现高峰的平台期,这与突触发生的高峰期是一致的。在胞液和重的突触膜中ＣａＮ活力最高水平是在出生后的第７ｄ,而在突触质和轻的突触膜中是在第２０ｄ。总之,这些发现证实,在脑发育期间,ＣａＮ活力是依照区域和时间性控制的,提示ＣａＮ可能参与了突触功能作用。     

大鼠大脑皮层中钙调神经磷酸酶活力的时空变化

以ＰＮＰＰ为底物测定了超离心制备的大鼠出生后早期和成年大脑皮层亚细胞各组分中钙调神经磷酸酶的活力,实验结果表明：（１）钙调神经磷酸酶活力广泛地存在于胞液和突触部分,并且各亚细胞组分有明显差异,成年大鼠大脑皮层中ＣａＮ活力相对最高水平是在突触体,突触质,胞液,重的和轻的突触膜部分。（２）大鼠大脑皮层突触体中ＣａＮ活力在出生后第２周和第３周出现高峰的平台期,这与突触发生的高峰期是一致的,在胞液和重的突     

生物素标记钙调素用于植物钙调素结合蛋白的检测

用生物素标了己了花椰菜ＣａＭ。生物素标记的ＣａＭ具有与天然ＣａＭ相似的Ｃａ２＋依赖电泳特性,可激活ＣａＭ依赖性磷酸二酯酶,能够检测出５０ｎｇ的磷酸二酯酶。利用它建立了检测植物ＣａＭ结合蛋白的生物素－覆盖法（Ｂｉｏｔｉｎ－ｏｖｅｒｌａｙ）并证实酶标亲和素可与胡萝卜愈伤组织内６４ｋＤ蛋白质非特异结合,因此将此法运用于植物材料时必需设置酶标亲和素处理的对照。用生物素－覆盖法检测胡萝卜愈伤组织形成过程中的ＣａＭ结合蛋白时可检出２,４－Ｄ诱导的ＣａＭ结合蛋白。     

生物素标记钙调素用于植物钙调素结合蛋白的检测

用生物素标记了花椰菜ＣａＭ。生物素标记的ＣａＭ具有与天然ＣａＭ相似的Ｃａ＾２＋依赖电泳特性,可激活ＣａＭ依赖性磷酸二酯酶,能够检测出５０ｎｇ的磷酸二酯酶。利用它建立了检测植物ＣａＭ结合蛋白的生物素－覆盖法并证实酶标亲和素可与胡萝卜愈伤组织内６４ｋＤ蛋白质非特异结合,因此将此法运用于植物材料时必要设置酶标亲和素处理的对照。用生物素－覆盖法检测胡萝卜愈伤组织形态过程中的ＣａＭ结合蛋白时可检出２,４－Ｄ