YY1抑制效应的破坏可促进人乳头瘤病毒16型癌基因的转录

人乳头瘤病毒１６型（ＨＰＶ１６）癌基因的表达受病毒早期启动子Ｐ９７的控制。位于ＬＣＲ上ＹＹ１蛋白结合位点的破坏可明显提高Ｐ９７的活性。为了观测ＹＹ１位点破坏在全基因组范围内对病毒ｅ６／ｅ７基因转录的影响,将构建的带有ＬＣＲ特异性突变的重组ＨＰＶ１６全基因组ＤＮＡ和ＨＰＶ１６野毒株ＤＮＡ转染至培养细胞,同时组建ＨＰＶ１６Ｅ６反向序列ＲＮＡ体外转录质粒。ＲＮａｓｅ保护试验证实,突变ＨＰＶ１６ＤＮＡ在短     

构建来自宫颈癌并带有突变及缺失LCR的HPV16重组体

为研究ＨＰＶ１６转录调节蛋白ＹＹ１结合位点改变对病毒致癌性的影响,以ＨＰＶ１６野毒株质粒ｐ１２０３为基础,经多次克隆,将来自宫颈癌组织并带有缺损突变的ＬＣＲ重组到地ＨＰＶ１６基因组中。核酸序列分析证实,质粒ｐＤＶ３９０在第２个ＹＹ１位点上有一Ｇ→Ａ点穷变,质粒ｐＤＶ３２６和ｐＤＶ４０１分别带有１１５ｂｐ和１４３ｂｐ的缺失突变,从而涉及２和４个ＹＹ１结合位点,重组质粒其它核苷酸序列与ＨＰＶ１６标准序列一致。这些重组质粒的组建为进一步研究ＹＹ１蛋白对ＨＰＶ１６致癌基因表达的调控及ＨＰＶ１６致癌作用的影响打下基础。     

用转基因动物宫颈癌中人乳头瘤病毒的癌基因

人乳头瘤病毒（ＨＰＶ）是一类环状ｄｓ ＤＮＡ病毒，它们感染皮肤及粘膜，引起疣、上皮良性增生及癌变等疾病。已发现的ＨＰＶ有６０多个型别，其中ＨＰＶ１６、１８、３１、３３与９０％以上的宫颈癌有关，被称为高危ＨＰＶ；而ＨＰＶ６、１１则与上皮良性增生有关，被称为低危ＨＰＶ。本文就近年研究ＨＰＶ基因在人宫颈癌发展中的作用及用转基因动物研究ＨＰＶ基因特点的进展综述如下。     

人乳头瘤病毒16碧蓝晚期基因L1在大肠杆菌中的表达

人乳头瘤病毒（ＨＰＶ）感染与宫颈癌的发生关系密切。其晚期蛋白Ｌ１是主要结构蛋白,可以刺激机体产生中和抗体,对病毒攻击可以起到保护作用。本研究将ＨＰＶ１６型中国分离株的Ｌ１基因定向克隆到原核表达载体ｐＥＴ－２１ｃ质粒中,建立ＨＰＶ１６ Ｌ１在大肠杆菌中的高效表达系统ｐＥＴ２１ｃ－ＨＰＶ１６ Ｌ１,该系统在ＩＰＴＧ的诱导下可表达６０ｋｕ的Ｌ１蛋白,表达效率为２３％,此蛋白通过Ｗｅｓｔｅｒｎ－ｂｌｏｔ得     

人乳头瘤病毒16型预防性疫苗的相关研究进展

人类乳头瘤病毒１６型（ＨＰＶ１６）在宫颈癌患者中检出率高达９０％。近年来通过基因工程方法对ＨＰＶ的晚期基因（Ｌ１和Ｌ２基因）编码的外壳蛋白产物的研究很多,发现主要壳蛋白（Ｌ１）可自我组装成病毒样颗粒（ｖｉｒｕｓ－ｌｉｋｅｐａｒｔｉｃｌｅｓ,ＶＬＰ）,并可用作预防性疫苗;基于次要壳蛋白（Ｌ２）的预防性疫苗和核酸水平的预防性疫苗也很有前途。本文着重从近几年国际上ＨＰＶ１６预防性疫苗的基础性工作进展及预防性疫苗研究现状等方面及趋势作一综述。     

人乳头瘤病毒16型E7基因的体外扩增及其克隆和序列分析

人乳头瘤病毒１６型Ｅ７基因是转化基因。作者设计了一对ＰＣＲ引物,在引物的５′端分别引入ＥｃｏＲＩ和ＨｉｎｄⅢ酶切序列,以ＨＰＶ１６ＤＮＡ为模板成功地扩增出Ｅ７基因。通过ＥｃｏＲＩ和ＨｉｎｄⅢ双酶切位点将Ｅ７基因定向克隆入ｐＵＣ１８载体,经过ＰＣＲ、酶切分析和Ｓｏｕｔｈｅｒｎ印迹杂交鉴定得到Ｅ７重组克隆ｐＨＳＥ７、ＤＮＡ序列分析表明所克隆的Ｅ７基因与已发表的ＨＰＶ１６Ｅ７基因序列完全一致且读框正确。     

宫颈癌病变组织人乳头瘤病毒感染率的免疫细胞化学与DNA杂交的比较观察

近年来人乳头瘤病毒（ＨＰＶ）被认为与宫颈癌的发生有密切关系。该实验报道了用分子杂交技术（在严格条件下）检测了宫颈活检组织：慢性宫颈炎、宫颈上皮内瘤（ＣＩＮ）、宫颈癌和宫颈正常组织中１６型乳头瘤病毒（ＨＰＶ－１６）ＤＮＡ的阳性率,并将其与用免疫细胞化学方法（ＰＡＰ）所得结果进行了比较。结果显示１３％（２／１５）的慢性宫颈炎、１７％（２／１２）的ＣＩＮ、５６％（５１／９１）的宫颈癌含有ＨＰＶ－１６ＤＮＡ,而正常组织为阴性;ＨＰＶ属抗原仅见于３５％（６／１７）的ＣＩＮ,其他受检组织均为阴性。结果提示用ＰＡＰ法检查ＨＰＶ－１６的抗原,所得阳性率不及ＤＮＡ杂交所得阳性率高;但它作为一种简便、快速的方法用于福尔马林固定、石腊切片材料,显示ＨＰＶ属抗原,借以筛选多种不同型的ＨＰＶ对ＣＩＮ或其他组织中ＨＰＶ的增殖性感染有一定的价值。     

人乳头瘤病毒基因检测方法的进展

人乳头瘤病毒（ＨＰＶ）的部分型别与某些性病和宫颈病变有关,特别是宫颈癌的发生发展的重要因素,因而ＨＰＶ的检测显得更为重要。本文综述几年来国内、外关于ＨＰＶ基因检测方法的进展及评价,特别是多聚酶链反应（ＰＣＲ）方法的应用。     

多聚酶链反应检测宫颈HPV感染及分型的研究

本文应用ＰＣＲ技术检测２ｌ２例临床宫颈标本的ＨＰＶ－６、ｌｌ、１６、１８型特异性核酸序列。结果发现ＨＰＶ－ＤＮＡ的阳性率：宫颈癌组为６２．５％（２５／４０）．慢性宫颈炎为５７％（８１／１４２）,正常宫颈对照组为２０％（６／３０）,Ｐ＜０．００１,提示ＨＰＶ的感染与宫颈炎、宫颈癌有关。同时分型结果显示：ＨＰＶ－６、１６、１８型与宫颈炎相关,１６型与宫颈癌密切相关,且ＨＰＶ不同型别的混合感染在宫颈中普遍存在（３１．３％）。成年女性各年龄组间ＨＰＶ的感染率并无明显差异（Ｐ＞０．０５）。     

湖北地区宫颈癌组织中人乳头瘤病毒16型E7基因的分离,克隆和序…

采用加端聚合链反应技术,从湖北地区一宫颈癌患者癌组织ＤＮＡ中分离出人乳头瘤病毒１６型（ＨＰＶ１６）Ｅ７基因,并在ｐＵＣ１８载体中克隆,经限生核酸内切酶分析和ＤＮＡ序列分析,确认了含ＨＰＶ１６Ｅ７重组克隆质粒,命名ｐｆＨＰＶ１６Ｅ７－ＨＢ。ＤＮＡ序列分析表明,ＨＰＶ１６Ｅ７－ＨＢ基因全长２９４ｂｐ（与报道的标准基因长度相同）但其核苷酸顺序中的两处发生了Ｃ－（Ｔ）突变,即第４３位密码子ＣＡＡ变为ＴＡＡ     

肛门生殖器区肿瘤组织中HPV的快速检测和分型

迄今已发现的人乳头瘤病毒（ＨＰＶ）型已超过７７型,其中至少有３０个型与泌尿生殖道肿瘤有关。所以ＨＰＶ的检测与分型对于泌尿生殖道肿瘤的病因和预后将是非常重要的。ＨＰＶ有很大的异质性,故用常规的诊断技术来测定未知标本中的ＨＰＶ基因型有一定困难。为此,我们应用了反向点杂交法（ＲＯＢ）来检测ＨＰＶ分型。即用７种序列特异性寡核苷酸探针分别对应７型ＨＰＶ（ＨＰＶ６Ｂ、１１、１６、１８、３１、３３、３５）,这些     

人乳头瘤病毒16型长控制区上YY1结合位点的破坏可增强病毒诱导细胞？…

细胞转当因子ＹＹ１可抑制人乳头瘤病毒１６型癌基因启动子Ｐ９７的活性,ＹＹ１位点的突变和缺失不仅可诱导Ｐ９７活性增强而且可在全基因组内增强Ｅ６癌基因转录,同时使病毒对啮齿类动物纤维细胞的转化能力增强。为了观测人乳头瘤病毒１６型长控制区序列上ＹＹ１蛋白特异性结合位点破坏在完整基因组范围内对人原代包皮角源细胞永生化能力的影响,将ＨＰＶ１６ ＹＹ１位点突变体和野毒株转染至人原代包皮角源细胞。     

人乳头瘤病毒外壳蛋白研究进展

人乳头瘤病毒（ＨＰＶ）的晚期转录区（Ｌ区）编码病毒的两个外壳蛋白;主要外壳蛋白（Ｌ１）和次要外壳蛋白（Ｌ２）,外壳蛋白具有组装功能,有抗原表位,在宿主细胞表面有蛋白受体。本就ＨＰＶ外壳蛋白的分子特性,组装功能,表达,抗原表位及血清学,受体,病毒外壳蛋白的组织等研究进展作一综述。     

湖北地区宫颈癌组织中人乳头瘤病毒16型E7基因的分离、克隆和序列分析

采用加端聚合酶链反应技术,从湖北地区一宫颈癌患者癌组织ＤＮＡ中分离出人乳头瘤病毒１６型（ＨＰＶ１６）Ｅ７基因,并在ｐＵＣ１８载体中克隆。经限制性核酸内切酶分析和ＤＮＡ序列分析,确认了含ＨＰＶ１６Ｅ７重组克隆质粒,命名ｐＨＰＶ１６Ｅ７─ＨＢ。ＤＮＡ序列分析表明,ＨＰＶ１６Ｅ７─ＨＢ基因全长２９４ｂｐ（与报道的标准株基因长度相同）,但其核苷酸顺序中有两处发生了Ｃ→Ｔ突变,即第４３位密码子ＣＡＡ变为ＴＡＡ,第７６位ＣＧＴ变为ＴＧＴ;前者使谷氨酰胺密码子变为终止密码,即无义奕变（ｎｏｎｓｅｎｓｅｍｕｔａｔｉｏｎ）。这种突变发生在２９４个碱基的ＤＮＡ扩增产物之中,不像是ＰＣＲ本身的错配,而很可能是湖北株与标准株之间的结构差异。     

用质量控制狭缝式杂交法（Coslot）检测妇女宫颈上皮中人乳头瘤病毒（HPV）DNA

本文报道一种能对ＨＰＶ进行较为准确分型的刚Ａ杂交程序和方法。它具有如下特点：１．由于简化了实验程序,标本消耗减少。因此该方法尤其适用于小组织活检标本（１－２ｍｇ）中ＤＮＡ同源序列检测;２．敏感性高。由于标本消耗减少,使ＨＰＶ检出率大为提高,与斑点杂交技术相比,敏感性提高１．６倍;３．型别特异性强。由于改变了实验条件及在实验过程中实行严格的质量控制,明显减少了不同ＨＰＶ型别的交叉反应,甚至在部分出现交叉反应的标本中,仍可通过强度对比来最后判定ＨＰＶ感染型别。应用该技术对１４３份宫颈炎标本、１７份宫颈不典型增生标本及２５份宫颈癌标本进行了ＨＰＶ１６型检测,阳性率分别为５０．０５％（７３／１４３）、５７％（２７／４７）及７６％（１９／２５）,并与Ｄｏｔｂｌｏｔ方法进行了比较。该方法在ＨＰＶ感染与宫颈癌关系的分子流行病学研究中具有重要意义和广阔的应用前景。     

人乳头瘤病毒HPV16 E7蛋白基因在沙门氏菌疫苗菌株X4072中的表达

采用ＰＣＲ方法,从ＨＰＶ１６型质粒中分离出ＨＰＶ１６Ｅ７基因片段,用ＥｃｏＲＩ和Ｓａｌｌ双酶解后,定向插入到表达质粒ｐＹＡ３３３２（ａｓｄ＋）的Ｐｔｒｃ启动子下游,构建成ｐＹＡ３３３２－ＨＰＶ１６－Ｅ７重组表达质粒。在大肠杆菌Ｘ６２１２上筛选出重组质粒后,通过中间菌株Ｘ３７３０的转化过渡,将重组质粒导入鼠伤寒沙门氏减毒疫苗菌株Ｘ４０７２（ａｓｄ－）,构建成宿主和载体之间具有平衡致死结构的ＨＰＶ１６     

人乳头瘤病毒的流行病学研究进展

人乳头瘤病毒（ＨＰＶ）感染十分普遍,应用分子生物学最新技术对ＨＰＶ的检测及流行病调查对该病毒的进一步研究提供了许多新思路。本文从宏观上对ＨＰＶ的流行病学研究进展进行了综述。     

人乳头瘤病毒感染的血清学诊断方法研究进展

人乳头瘤病毒（ＨＰＶ）感染十分普遍,某些型别的ＨＰＶ感染与恶性肿瘤的发生关系密切。ＨＰＶ感染的传统诊断方法是从病理标本中检测ＨＰＶ ＤＮＡ或病毒蛋白的存在,而血清学诊断方法研究较少。今就近年来有关ＨＰＶ感染的血清学诊断方法的研究进展作一综述。     

人乳头瘤病毒16型湖北株E7基因的克隆和高效表达

利用基因克隆技术,将ＨＰＶ１６湖北株完整的Ｅ７基因克隆到含乳糖操纵子的表达载体ｐＷＲ５９０１上,经限制性酶切分析获得重组质粒ｐＷＨＢＥ７。ｐＷＨＢＥ７转化大肠杆菌后表达产生分子量为７０ｋＤ的融合蛋白ｌａｃＥ７,该蛋白在免疫印迹实验中可被标准Ｅ７单抗识别。经ＩＰＴＧ诱导后,Ｅ７融合蛋白产量可达细菌总蛋白含量的３０％以上。利用ｌａｃＥ７蛋白在细菌胞浆中形成包含体的性质,简便地提取并纯化了该蛋白质。结果为从免疫学角度探讨ＨＰＶ１６与宫颈癌的关系以及ＨＰＶ疫苗的研制打下基础。     

人乳头瘤病毒及其疫苗的研究

人乳头瘤病毒（ＨＰＶ）是一种致瘤病毒，在人类广泛传播，能在人的皮肤或粘膜引起良性肿瘤，并与人类多种癌症有关。已发现ＨＰＶ有６０个以上的型别，均以人为单一宿主。近几年的研究对病毒基因组与基因编码产物有了深入了解，对病毒的可能致癌机理作了深入探讨。由于ＨＰＶ不能在体内外增殖，无法以培养法获得大量病毒及制备疫苗，又由于病毒的ＤＮＡ性质，疫苗不能以完整病毒颗粒制备，ＨＰＶ疫苗的研究存在一定的难度，但已设计了一些高科技的ＨＰＶ疫苗。本文对近几年来ＨＰＶ及其疫苗的研究作一简要综述。