海藻糖载入血小板的研究

将不可渗透型的保护剂海藻糖有效地载入血小板内部是用冷冻干燥法保存血小板重要的第一步。研究血小板对海藻糖的载入量随外部海藻糖浓度、孵化时间、孵化温度改变的变化规律,发现在细胞外海藻糖浓度为50mmol/L、孵化温度37℃、孵化时间4h的条件下,血小板能有效地吸收海藻糖,细胞内海藻糖浓度达到15mmol/L以上。对孵化后的血小板进行形态观察、血液学分析和膜联蛋白(annexin)V结合活化分析,结果表明孵化后的血小板保持了正常血小板的形态和功能。     

海藻糖载入红细胞及其冷冻干燥的实验研究

冷冻干燥保存是长期保存人体红细胞的理想方案之一。冻干保护剂海藻糖渗入细胞内后,对细胞膜和细胞内物质有保护作用,其中的一个作用是增加细胞质的浓度,使冻干过程容易形成稳定的玻璃态。应用高渗法处理红细胞,通过考察胞内海藻糖含量、红细胞冻干后的存活率、腺苷三磷酸酶(ATPase)、超氧化物歧化酶(SOD)活力以及细胞形态变化,研究胞内海藻糖含量对红细胞冻干后活性的影响。结果显示:海藻糖对红细胞冻干具有明显的保护作用,随胞内海藻糖浓度升高,其保护性能逐渐增强;43.8mmol/L的胞内海藻糖浓度对红细胞保护最好,细胞存活率达到53.6%,形态保持良好,ATP和SOD活力均在正常的范围内。     

稀释液中添加海藻糖对山羊精子功能和膜完整性的影响

选用5只年龄为3～4岁的波尔山羊公羊研究在稀释液中添加海藻糖对山羊精子功能和膜完整性的影响。山羊精子分别用含6.6 mmol/L、13.2 mmol/L、19.8 mmol/L、26.4 mmol/L、39.6 mmol/L、52.9 mmol/L、66.1mmol/L、79.3 mmol/L的不同海藻糖的Tris-柠檬酸-葡糖糖(TCG)稀释液(卵黄:18%;甘油:6%)稀释和冷冻。结果表明:39.6 mmol/L、52.9 mmol/L、66.1 mmol/L、79.3 mmol/L组降温后的精子活率显著(P<0.05)降低;52.9 mmol/L、66.1 mmol/L、79.3 mmol/L组降温后的精子畸形率和39.6 mmol/L组降温后的膨胀精子率显著(P<0.05)提高。26.4 mmol/L组和39.6 mmol/L组冻融后的精子活率显著(P<0.05)高于对照组;66.1mmol/L和79.3 mmol/L组冻融后的精子活率、畸形率分别显著(P<0.05)低于和高于对照组。19.8 mmol/L、26.4 mmol/L、39.6 mmol/L组冻融后精子获能率显著(P<0.05)低于对照组。39.6 mmol/L组冻融后顶体完整率和膨胀精子率显著(P<0.05)高于对照组,而66.1 mmol/L组和79.3 mmol/L组显著(P<0.05)低于对照组。39.6 mmol/L组的受胎率显著(P<0.05)高于对照组,而66.1mmol/L组和79.3 mmol/L组的受胎率显著(P<0.05)低于对照组。结果表明,在含18%的卵黄(v/v)、6%甘油(v/v)的TCG稀释液中,添加适宜浓度(26.4mmol/L和39.6 mmol/L)海藻糖,可显著提高山羊精子功能和膜的完整性。     

腾冲嗜热杆菌热稳定海藻糖磷酸化酶的基因表达与酶的分子生物学性质研究

分离克隆了腾冲嗜热杆菌(Thermoanaerobacter tengcongensis)海藻糖磷酸化酶(TreP)的编码基因(treP), 该酶可催化以葡萄糖和α-1-磷酸葡萄糖为底物的海藻糖合成反应及其逆向的分解反应. 反向mRNA点杂交实验表明, 腾冲嗜热杆菌中treP基因在高盐胁迫条件下表达量增加, 而在海藻糖诱导条件下表达量降低. 将该基因导入不含TreP的大肠杆菌中进行诱导表达, SDS-PAGE表明, 异源表达的TreP分子量约为90 kD, 与预期值相同. 通过葡萄糖氧化酶法测定分解产物葡萄糖的产率表明: TreP催化海藻糖分解反应的最适温度是70℃, 最适pH值为7.0; 通过HPLC检测合成产物海藻糖的产率表明: TreP催化合成反应的最适温度为70℃, 最适pH值为6.0. 在最适反应条件下, 50 μg的TreP粗酶可催化25 mmol/L α-1-磷酸葡萄糖与葡萄糖在30 min合成11.6 mmol/L海藻糖; 而同量的酶在同样时间内仅能将250 mmol/L海藻糖分解生成1.5 mmol/L葡萄糖. 以上体内胁迫和诱导表达分析及体外酶学性质分析均证明该酶的主要功能是催化海藻糖的合成反应. 热稳定性实验表明, 该酶性质比较稳定, 在50℃下温育7 h还能保持77%以上的活性, 是一个有潜在工业用途的新的热稳定海藻糖合成酶.     

二甲双胍对人脐带间充质干细胞形态、增殖、表面标志及细胞周期的影响

目的探讨不同浓度二甲双胍（METF）对人脐带间充质干细胞（hUC-MSC）形态、增殖、表面标志及细胞周期的影响。 方法取健康足月新生儿脐带在体外分离出hUC-MSC进行传代培养,至第3代（流式细胞仪分析）对细胞进行鉴定,取第6代处于对数生长期的hUC-MSC （相对老化）,将对照组与不同浓度METF （0.1,1,5,10,20?mmol/L）干预的细胞进行比较,观察不同浓度METF干预对细胞的形态、增殖率（MTT法分别于24、48、72?h检测）、及细胞表面标志和细胞周期的影响,采用One-Way ANOVA,及LSD-t检验进行统计学分析。 结果（1）METF为0.1?mmol/L、1?mmol/L,细胞形态无显著改变,当药物浓度为5?~?20?mmol/?L时,随着药物浓度增加、培养时间延长,细胞形态改变越显著。（2）METF为0.1?mmol/L（24?h：101.28±0.98,24?h：104.06±1.76,24?h：101.51±0.67）促进hUC-MSC增殖,药物浓度为1?~ 10?mmol/L在培养初期可增加间充质干细胞的增殖率,随着培养时间的延长,细胞的增殖逐渐被抑制。METF为20?mmol/L（24?h：86.64±0.66,48?h：58.38±2.52,72?h：17.75±1.35）抑制细胞增殖,抑制作用随着时间延长而增强（P?< 0.05）。（3）当METF浓度为5,10,20?mmol/L时,随着药物浓度的增加,CD105的表达逐渐减弱（F?= 17.539,P?< 0.05）。METF未对CD44、CD90产生影响。（4）METF为0.1?mmol/L时降低G0/G1期的比例（64.16±1.20,P?< 0.05）,促进间充质干细胞的增殖,随着药物浓度的增加,细胞增殖逐渐被抑制。 结论METF浓度在0.1mmol/?L促进hUC-MSC增殖,而在浓度5 ~ 20?mmol/L时抑制人脐带间充质干细胞的增殖及表面标志CD105的表达,不同浓度的METF均未对CD44、CD90的表达产生影响。     

棉铃虫被中华卵索线虫感染后血淋巴中还原糖、海藻糖和游离脂肪酸的变化

用3, 5 -二硝基水杨酸法和气相色谱法, 分别对棉铃虫(Helicoverpa armigera) 感染中华卵索线虫(Ovomermis sinensis) 后不同时期血淋巴中还原糖、海藻糖和游离脂肪酸含量变化进行了分析。感染的1-3 d,棉铃虫血淋巴还原糖含量(mg/ ml) (分别为0. 551 ±0 .035、0 .505 ±0. 025、0. 852 ±0. 051) 显著低于对照组(分别为0. 655 ±0 .041、0 .878 ±0. 032、0 .964 ±0 .034); 4-5 d还原糖含量(分别为1. 016 ±0. 051、1. 016 ±0 .042) 显著高于对照组(分别为0. 767 ±0 .041、0. 853±0 .038), 第6 d 还原糖含量(0 .608 ±0. 031) 显著低于对照组(0. 698 ±0 .024)。感染组棉铃虫血淋巴中海藻糖的含量情况与还原糖的不同, 在感染的1-3 d, 棉铃虫血淋巴海藻糖的含量(分别为0 .349 ±0. 029、0.374 ±0. 027、0 .479 ±0. 046) 与对照组(分别为0. 383 ±0 .026、0 .374 ±0 .023、0 .483 ±0. 034) 的基本相同, 没有明显的变化; 4-6 d海藻糖含量(分别为0 .529 ±0. 045、0. 584 ±0 .041、0. 428 ±0. 041) 低于对照组(分别为0. 698 ±0 .042、0. 652 ±0 .032、0 .469 ±0 .038)。无论是感染组还是对照组, 棉铃虫血淋巴中软脂酸(16∶0)、棕榈油酸(16∶1)、硬脂酸(18∶0)、油酸(18∶1)、亚油酸(18∶2     

外源茉莉酸对UV-B胁迫下小麦抗氧化系统影响的时间和浓度效应

增强的紫外线-B(UV-B)辐射会对植物的抗氧化系统造成破坏,而很多研究已经证明茉莉酸(JA)具有缓解某些胁迫效应的作用。为了解JA对UV-B辐射胁迫下小麦抗氧化系统影响的时间和浓度效应,本研究中小麦幼苗接受增强的UV-B辐射前分别用不同浓度JA(1mmol/L,2.5mmol/L,5mmol/L,7.5mmol/L,10mmol/L)进行预处理,然后研究其在UV-B辐射3h、6h、9h、12h、15h、18h内丙二醛(MDA),过氧化物酶(POD),过氧化氢酶(CAT),脯氨酸,紫外吸收物(黄酮类及相关酚,花青素),光合色素(叶绿素a:Chla;叶绿素b:Chlb;类胡萝卜素:Car)浓度的变化。单因素方差分析表明:UV-B辐射对各个指标的影响表现出随时间变化明显的波动,并且不同浓度的外源JA显现出不同的效应。外源JA能够缓解UV-B辐射第3小时、第12小时和第18小时所造成的脂质过氧化损伤,这与适中浓度的JA(2.5mmol/L,5mmol/L,7.5mmol/L)所诱导的黄酮及相关酚类物质、花青素以及脯氨酸含量的提高有关,而与POD和CAT无关。此外,若UV-B辐射时间小于18h,JA可通过增加光合天线系统体积的方式来减轻UV-B辐射对天线系统的破坏效应,但这种调控作用随辐射时间延长而降低。     

高糖、糖基化终产物对人脐静脉内皮细胞巨噬细胞炎性蛋白-1α mRNA表达的影响

目的探讨高糖浓度和糖基化终产物(AGEs)对人脐静脉内皮细胞(HUVECs)巨噬细胞炎性蛋白-1α mRNA表达的影响.方法将HUVECs用不同浓度AGEs(100mg/L、200mg/L、400mg/L)单独培养24h;并且用22mmol/L葡萄糖和400mg/LAGEs联合培养24h.采用原位杂交法检测巨噬细胞炎性蛋白-1α mRNA的表达水平.结果对照组内皮细胞内巨噬细胞炎性蛋白-1α mRNA呈弱表达;100mg/L、200mg/L及400mg/LAGEs孵育24h后,各组内皮细胞内巨噬细胞炎性蛋白-1α mRNA表达的平均积分光密度值分别为18.76±3.17、26.58±1.61及34.23±2.25(对照组为13.83±1.24,P<0.05);22mmol/L葡萄糖和400mg/LAGEs联合培养24h后,内皮细胞内巨噬细胞炎性蛋白-1α mRNA表达的平均积分光密度值为40.56±1.97(P<0.05).结论 AGEs能刺激HUVECs MIP-1α mRNA表达增加,且与高糖具有协同作用.     

INS-1E细胞葡萄糖毒性模型的建立

目的:建立胰岛细胞系INS-1E细胞的葡萄糖毒性模型。方法:将INS-1E细胞分别在不同葡萄糖浓度(5.5 mmol/L、16.7mmol/L、25 mmol/L、30 mmol/L)的1640完全培养基中培养不同时间(48 h、72 h、96 h、120 h),分别在不同时间点取细胞进行细胞功能检测,实时荧光定量PCR法检测胰岛素m RNA的表达,ELISA检测葡萄糖刺激的胰岛素的分泌。结果:与对照组相比,高糖浓度(5.5 mmol/L、16.7 mmol/L、25 mmol/L、30 mmol/L)培养基中培养48 h后,INS-1E细胞的胰岛素合成和分泌的功能均增加(P均0.05),随着培养基中葡萄糖浓度的升高以及培养时间的延长,INS-1E细胞胰岛素合成及分泌的功能逐渐下降,当在葡萄糖浓度为30 mmol/L的培养基中培养120 h后,胰岛素m RNA合成及葡萄糖刺激的胰岛素分泌均显著降低(P均0.01)。结论:INS-1E细胞在30 m M的葡萄糖中培养120 h形成稳定的葡萄糖毒性模型。     

多酶复配合成海藻糖及其分离提取的研究

以大米淀粉为原料,多酶复配制备海藻糖。确定了实验室条件下多酶复配生产海藻糖的最佳条件:以15%(m/V)大米淀粉为底物,催化温度45℃、pH 6. 0、DE值16、α/β-CGTase加量为1. 4U/ml、催化28h后糖化处理12h,海藻糖转化率由双酶法催化的50%提高至73%。在底物浓度为25%(m/V)时,海藻糖产量最高达到182. 5g/L,随后对高浓度海藻糖进行分离提取,分别考察了活性炭脱色、离交分离、浓缩结晶等对海藻糖提取效率的响。