混合单克隆抗体在固相ELISA双夹心法中的应用研究

在进行固相ELISA双夹心法时,要选择两种配对的单克隆抗体(McAb)殊非易事。本文用不同McAb的混合物与另一种McAb进行配对夹心,获得了较好的效果。实验表明,在心肌肌球蛋白轻链(CM—LC)的固相ELISA双夹心体系中,以抗CM-LCMcAb(1G6)铺底,(2B4及2F6)混合物为后续复盖抗体,最低检出量可低达10ng/mL,其检出率较单独2B4或单独2F6作为后续复盖抗体者高5—10倍。而若反之,以(2B4及2F6)混合物铺底,1G6作为后续复盖抗体,则其最低检出量竟高至200ng/mL,还不如以其中之一铺底为佳。在人绒毛膜促性腺激素(HCG)的检测体系中,用多克隆抗体与单克隆抗体配对的研究中,也获得了类似的实验结果。     

PCR-EIA技术的研究进展及应用

聚合酶链反应-酶免疫测定(PCR-EIA)技术是将PCR技术的简捷高效性与ELISA技术的灵敏特异性结合于一体,利用微孔板进行的快速、高通量、非放射性新型核酸检测技术。与以往的基因检测方法相比,PCR-EIA技术在灵敏度、特异性、一次性检测样本量、检测时间等方面有诸多优势,具有更广泛的应用前景。我们简要介绍了其原理、分类及应用。     

快速IgM抗体捕捉ELISA的建立及其在乙脑早期诊断中的初步应用

用辣根过氧化物酶标记的抗日本脑炎病毒(JEV)种特异性单克隆抗体为结合物,建立了一种快速IgM抗体捕捉酶联免疫测定法(RMAC-ELISA),并初步用于乙脑的快速诊断,取得了良好的效果。该法通过用鞣酸预处理微板,提高反应温度,在稀释液中加入PEG并提高NaCl浓度,用鸡蛋清代替牛血清白蛋白或鸡血清,用自来水代替PBS作为洗液,用快速漱洗3次代替3×5分钟洗涤,用TMBS代替OPD底物,用酶标单克隆抗体代替多克隆结合物等措施,加快了反应速度,缩短了反应时间,简化了操作步骤,提高了敏感性,保证了特异性。从微板预处理至出结果,仅需1小时。由于该法具有简便、快速、特异、敏感等特性,不仅可以用于乙脑的早期诊断及实验室研究,还有可能推广到其它的免疫学检测方法中去。     

脱落酸的酶标免疫测定

使用国产辣根过氧化物酶(HRP)合成酶标记物,用竞争法进行了植物内源激素脱落酸(ABA)的酶标免疫测定研究。测定范围为0.0125ng—100ng,在此范围内logitB/B。与ABA浓度的对数之间呈较好的线性关系。检测的灵敏度达到5×10~(-14)克分子。比较了两种酶标记方法对于测定的影响,结果发现直接使ABA共价结合到HRP上形成ABA-HRP酶标记物比先将ABA与牛血清白蛋白(BSA)结合后,然后进一步再与HRP反应形成ABA—BSA—HRP复合物灵敏度高,非特异性吸附小,而且合成步骤较少。酶标记物的稀释度直接影响测定的灵敏度和浓度对数与logit B/B。之间的线性关系好坏;在以每毫升3—6微克免疫球蛋白包埋免疫吸附板进行测定时,用每毫升5微克酶标记物的浓度获得了最佳结果。     

ELISA测定中TMB显色体系的优化及其稳定性研究

通过对间接酶联免疫测定中显色体系的各影响因素的研究,确定了酶联免疫测定的最优显色体系为二甲基亚砜(DMSO)配制四甲基联苯胺(TMB)浓度为0.3 mg/mL的溶液为A液,pH5.5,0.2 mol/L磷酸氢二钠与0.1 mol/L柠檬酸缓冲液配制过氧化脲素浓度为0.74 mg/mL的溶液为B液,两者按一定比例混合后使用。试验结果表明,此显色体系在25-40℃内进行都可得到较为准确的结果,且A、B液混合后在室温下放置4 h仍可使用。A液及B液分别在4℃放置60 d后混合使用仍不影响测定结果。     

高亲和力抗有机磷杀虫剂单克隆抗体的制备与鉴定

制备抗有机磷杀虫剂单克隆抗体。采用人工合成带有特殊功能基团的半抗原,将其与载体蛋白偶联,以半抗原偶联物为免疫原,免疫BALBc小鼠,取免疫小鼠的脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞融合,HAT选择、有限稀释法克隆化,建立分泌抗机磷杀虫剂单克隆抗体的杂交瘤细胞系。ELISA间接法和ELISA竞争抑制法检测抗体滴度,非竞争抑制法检测抗体亲和常数。结果获得9株分泌抗机磷杀虫剂单克隆抗体的杂交瘤细胞系,其中7株为型特异性,2株为组特异性;Ig亚型均为IgG1;亲和常数为407×108±043M和127×109±024M。结论为人工人工合成的、含特殊功能基团的半抗原,与载体蛋白偶联后,做免疫原,可用于制备高滴度的抗有机磷杀虫剂单克隆抗体,这种单抗可用于机磷杀虫剂残留物的免疫化学检测 。     

玉米素核苷的酶标免疫测定法

牛血清白蛋白-玉米素核苷(BSA-ZR)的兔抗血清对玉米素核苷具有很高的亲和性,而且专一性强,除了玉米素外,对其它一些细胞分裂素如激动素(KT)的交叉反应甚微。用辣根过氧化物酶(HRP)作为标记物的酶标免疫法,由于它的灵敏度高,相当于几十毫克量的样品就可以测出细胞分裂素的含量。测定范围在0.25—50pmol之间,测定范围较广。由于该方法专一性高,植物组织的粗提取物可以直接用于测定。避免了提取分离的繁琐程序,使得测定方法较简便、快速,可成批进行,适用于一般实验室。用该方法测得风信子(Hyacinthus orientalis L.)各部分的细胞分裂含量(以玉米素核苷计)在10—60×10~(-9)克/克鲜重,即10—60ng/g F.W.。     

酶联免疫吸附(ELISA)诊断肺肿瘤方法的建立

目的:早期确诊并得到及时治疗是有效防止肺肿瘤恶化的有效途径,本文旨在探讨建立ELISA的鉴定标准,以便早期筛选肺肿瘤特异蛋白质,有助于对该病的早期诊断.方法:实验主要以酶联免疫吸附(ELISA)试验为基础,以期获得诊断肺肿瘤的ELISA方法.以CA-125作为抗原,按照常规ELISA方法进行实验,确定抗原包被浓度、一抗稀释度及一抗最佳作用时间,达到优化ELISA检测肺肿瘤条件.结果:初步建立了ELISA方法检测肺肿瘤的条件,同时确定了抗原的最佳包被浓度为5μg/mL,血清一抗的最佳稀释比为1∶800,最佳作用时间为1.5 h.结论:ELISA检测肺肿瘤方法的建立,为临床中早期检测肿瘤的发生提供了数据支持,为进一步研究与优化肺肿瘤的检测方法奠定基础.     

酶联免疫吸附检测法的应用研究进展

酶联免疫吸附检测法(ELISA)由于具有灵敏、特异、简单、快速及易于自动化操作等优点而得到了快速发展,并且被广泛应用于多个领域.本文对ELISA检测法应用现状及优缺点进行综述,为今后ELISA检测法的更为广阔的应用与发展提供参考.     

建立超敏ELISA-双酶底物循环法检测tau蛋白

利用酶联免疫吸附法(ELISA)的高特异性和双酶底物循环的高灵敏度,建立了ELISA-双酶底物循环扩增检测法.用传统ELISA测定纯化tau蛋白和阿尔茨海默病异常磷酸化tau蛋白的范围值分别为1～32 ng和0.2～10 ng,而此法的测定范围值分别为0.75～200 pg和0.5～50 pg,比传统ELISA的灵敏度分别提高1 300倍和400倍,可测定范围值亦分别扩大了8.5倍和2倍.可准确测定阿尔茨海默病患者脑脊液样品中的微量tau蛋白和异常磷酸化tau蛋白,为阿尔茨海默病的早期诊断和鉴别诊断提供了新技术.     

低水平乙型肝炎表面抗原的检测及其临床价值评估

我们采用具有世界卫生组织( WHO) 溯源性的标准血清建立浓度标准曲线, 评估微粒子酶免疫分析法(MEIA) 和酶联免疫吸附试验( ELISA) 的检测灵敏度, 并对97 例经确认为低水平乙型肝炎表面抗原( HBsAg)的阳性结果进行检测和比对分析; 同时综合评估低水平HBsAg 患者的临床各项指标, 探究低水平HBsAg 检测的临床意义。根据MEIA、ELISA 的S/CO 值分析, 2 种方法的检测灵敏度分别为0. 095 IU/ml 和0. 378 IU/ml;ELISA 对97 例低水平HBsAg 的检出率仅为45. 4% ( 44 /97) ; 在97 例低水平HBsAg 患者中, HBV DNA≥1 ×103 拷贝/ml 占17. 5% ( 17/97) , 肝功能异常率占38. 1% ( 37 /97) , 其中明确诊断为乙型肝炎相关疾病的19 例患者中, 肝硬化占57. 9% ( 11 /19) 。因此灵敏度高、特异性好的方法有助于低水平HBsAg 的检出, 有利于对这些人群的诊断和治疗。部分低水平HBsAg 患者往往伴随病毒复制及肝功能的慢性损伤, 预后不良, 应引起临床的高度重视和关注。     

PCR—ELISA检测HBV DNA的研究

目的：建立一种敏感、特异的乙型肝炎病毒（HBV）DNA检测方法。方法：应用PCR扩增技术和核酸杂交技术结合酶促显色技术（即PCR－ELISA技术）来检测血清中的HBV DNA。结果：应用PCR－ELISA技术能够检出许多PCR琼脂张胶电泳所检测不到的HBV DNA,大大地提高了检出率,而且,特异性强。结论：PCR－ELISA方法灵敏度高,行异性强,检测结果数据化,不受主观因素的影响。     

极端酶及其工业应用

无论是从极端环境中筛选天然极端酶,还是由蛋白质工程构建的突变酶,或者是交联酶晶体,都可以提高酶夺环境的抵卸能力及其稳定性,从而使酶在工业上的应用有了突破性的进展。     

双抗体夹心ELISA法测定残余汉逊酵母菌体蛋白含量的研究

目的 通过免疫白兔和小鼠获得抗汉逊酵母菌体全蛋白血清,建立测定残余宿主汉逊酵母菌体蛋白含量的双抗体夹心ELISA的方法.方法 由免疫动物得到抗血清,分别作为包被抗体和检测抗体,通过方阵滴定实验确定双抗体夹心ELISA最佳条件.结果 获得的兔、小鼠抗血清经间接ELISA检测效价均达到1:10000.作为包被抗体小鼠抗血清的最佳包被浓度为10 μg/ml,在30～500 ng/ml范围内测定呈直线关系,相关系数为0.9985.可用于测定基因工程产品中汉逊酵母菌体蛋白的残余量.     

酶联免疫吸附测定中固相化方法概述

酶联免疫吸附测定(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)是一项应用广泛的固相酶免疫测定技术。抗原或抗体等反应物的固相化在ELISA检测系统中有着十分重要的作用,可直接影响检测结果。应用稳定性好、固相化物质变性率低及固定效率高的ELISA操作体系,可显著提高检测分析的灵敏性、特异性和可靠性。现就ELISA技术中不同固相介质和固相化方法作一概述。     

ELISA方法测定血清中Hib多糖抗体含量的条件比较研究

分别以牛血清白蛋白和人血清白蛋白作为封闭液的主要成分测定7份血清中抗b型流感嗜血杆菌荚膜多糖的抗体含量,结果显示,两组数据之间没有显著性差异(P>0.05)。分别用HRP标记的羊抗人IgG和HRP标记的鼠抗人IgG测定该7份血清,结果显示两组结果无显著性差异(P>0.05)。同时,将血清反应的温度和时间由37℃1.5h改为4℃16h(过夜),结果显示两者无显著性差异(P>0.05)。从而优化了该方法。     

金抗体替代ELISA中的天然抗体用于溶菌酶检测

目的 酶联免疫吸附测定(ELISA)被广泛用于抗体或抗原的检测,并被视为临床实践中的金标准,可提供相对可靠、灵敏和特异的检测结果.ELISA的本质是抗原与相应抗体之间的特异性相互作用.然而,天然抗体固有的不稳定性是ELISA的一个难以克服的弱点,并可能导致检测结果的重现性差甚至错误的诊断结果.本课题组先前应用构象工程方...     

微生物纤溶酶的多样性及应用前景

微生物是溶栓药物的重要来源.本文综述了细菌、放线茵和真菌产生的纤溶酶的种类、性质及药理作用等进展,整理了基因工程技术在筛选产酶菌株及提高分泌物产量方面的研究近况,并对纤溶酶作为溶栓剂的应用前景进行了展望.