羊松果体细胞原代培养及其生物学特性的研究

体外培养山羊及绵羊的松果体细胞,观察其增殖情况和功能状态的变化.结果显示:山羊、绵羊的松果体细胞体外形态及生长情况相似.细胞多呈圆形或多角形,细胞体积有增大趋势.采用MTT法检测细胞生长状态,发现细胞有明显的增殖现象,大约于11d达到高峰.用免疫组织化学对培养细胞进行染色,发现5-HT阳性细胞数量随细胞的增殖而增加.表明山羊和绵羊松果体细胞在体外均增殖旺盛,并能保持体内的分泌功能.     

中脑神经前体细胞的体外分离、培养和特性

为了解中脑神经前体细胞的体外培养特性和建立中脑神经前体细胞的体外分化调控机制提供细胞模型。本实验采用含有丝分裂源表皮生长因子(EGF)的无血清培养基培养来源于大鼠胚胎E14.5天的中脑神经前体细胞,应用免疫细胞化学方法了解其前体细胞特性。结果发现中脑神经前体细胞呈神经前体细胞特征性标记Nestin免疫染色阳性,无分化细胞标记;细胞克隆实验证实中脑神经前体细 胞有自我更新能力;在EGF刺激下增殖迅速;当撤去EGF后置于含胎牛血清的培养基和被覆多聚赖氨酸(PLL)的培养皿内,中脑神经前体细胞可分化成神经元和星形胶质细胞。本试验证明我们培养的中脑神经前体细胞具有增殖、自我更新能力和多向分化潜能特性。     

胚胎体外共培养：影响因素及作用机理

综述了近年来关于哺乳动物早期胚胎与体细胞共培养的研究进展。重点讨论了早期胚胎与不同类型体细胞共培养,血清、发情周期和体细胞传代次数对胚胎共培养效果的影响,以及胚胎体外共培养的作用机理。体细胞共培养体系可以改善早期胚胎体外培养的条件,促进胚胎发育,提高着床率和妊娠率,在发育生殖研究领域有着广泛的应用前景。然而,对其影响因素和作用机理尚欠系统深入研究,许多问题还亟待解决。     

脂肪干细胞的共培养及其分化应用概述

干细胞在体外特定培养条件下可以被诱导分化成具有不同体细胞表型的细胞。除了通过不同培养条件进行体外诱导分化的方法外,用成熟体细胞与干细胞共培养同样可以诱导干细胞定向分化。以下首先简述了脂肪干细胞 (Adipose-derived stem cells,ADSCs) 的来源及其标志,然后重点就ADSCs的不同培养方法、诱导分化及最新的临床应用进行阐述,包括药物及化学诱导培养、体细胞与ADSCs二维、三维共培养等,最后提出ADSCs的问题所在并对此技术进行展望。     

原代培养大鼠松果体细胞的增殖与分化——免疫组织化学研究

目的：探讨体外培养大鼠松果体细胞的生长、增殖及分化。方法：采用MTT测定法BrdU及5－HT免疫组织化学方法。结果：相差显微镜观察可见培养的松果体细胞呈小圆形或不规则形,初期聚集成巢,以后逐渐散贴壁,有强折光性,细胞体随培养时间的延长而增大,MTT检测证实。培养的松果林体细胞增生较活跃,细胞倍增时间在培养第9天,第11天左右高峰。BrdU免疫组化法对松果体细胞分裂与增殖的观察及统计结果与MTT检验结果相符。5－HT阳性细胞占培养细胞总数的80％以上,结论：体外培养能获得生长增殖旺盛,具有一定生理功能的松果体细胞。     

Leptin对陕北白绒山羊体细胞核移植的影响

Leptin的功能较为复杂,主要调控机体能量代谢。有研究表明Leptin在卵母细胞成熟及胚胎发育过程中也具有重要作用。本研究在卵母细胞体外成熟基础培养液中添加了不同浓度的Leptin,其中未添加Leptin的设为Ⅰ组,添加10ng/mL和50ng/mL Leptin的分别设为Ⅱ组和Ⅲ组。以陕北白绒山羊皮肤成纤维细胞为供体细胞,三组体外培养成熟的卵母细胞作为受体,利用显微操作方法对成熟卵母细胞进行去核操作,然后将供体细胞注射到卵周隙内,经电融合后形成体细胞克隆胚。根据卵母细胞体外成熟率、核移植效率以及克隆胚囊胚发育率分析Leptin在山羊核移植中的作用。结果表明Ⅰ组山羊卵母细胞体外成熟率和核移植效率显著高于其他两组(P<0.05),三组克隆囊胚发育率无显著差异(P>0.05)。Leptin降低了山羊卵母细胞体外成熟和核移植效率,对克隆胚发育能力无影响。     

介绍几个哺乳动物细胞株的培养方法及其应用

T.T.Puck 成功地分离出单个体细胞在体外进行培养,使长成一个无性繁殖系,这已成为体细胞遗传学研究中的一个重要工具。生物特性的遗传学分析,特别是高等生物一人的特性的遗传学分析,过去通常必须用性细胞通过有性生殖米研究,现在则可用体细胞在实验室中进行。体细胞遗传学研究还引进了诱发和分离微生物营养缺陷型的方法,分离出单个变异细胞的无性繁殖系,建立了一系列营养突变缺陷     

整合人lactoferrin基因的山羊体细胞支持核移植克隆胚的体外发育

克隆了人lactoferrin基因和山羊[[beta]]-casein基因5′端调控区, 构建了人lactoferrin的乳腺表达载体, 并将该载体利用脂质体介导转染了奶山羊胎儿成纤维细胞, 获得了稳定整合人lactoferrin基因的转基因体细胞克隆17个, 其中PCR和Southern Blot检测阳性的细胞克隆14个, 阳性率82.4%。以转基因体细胞为供体细胞进行了核移植, 获得了能够体外发育的山羊转基因克隆胚胎, 体内成熟卵母细胞来源的核移植囊胚率为64.8%, 体外成熟卵母细胞来源的核移植囊胚率为51.7%, 证明了山羊转基因体细胞能够支持克隆胚的进一步发育。     

香果树体细胞胚胎发生过程中4种同工酶的研究

用非变性聚丙烯凝胶电泳技术对香果树体细胞胚胎发生及形态建成过程中过氧化物酶(POD)、酯酶(EST)、淀粉酶(AMY)和超氧化物歧化酶(SOD)4种同工酶进行分析.结果表明:香果树体细胞胚胎发生及形态建成过程中,POD、EST、AMY和SOD活性变化与胚性愈伤组织的诱导及体细胞胚的发生发育密切相关.非胚性愈伤组织和胚性愈伤组织酶谱差异明显,胚性愈伤组织中EST和AMY同工酶酶带多且活性高,非胚性愈伤组织中缺乏EST和AMY同工酶表达,AMY同工酶可作为胚性细胞分化和发育的重要标志.香果树体细胞胚形态建成过程中,球形胚时期的AMY、POD、EST同_T酶活性最强,表明这一时期生理代谢旺盛,是体细胞胚形态建成的关键时期;POD、AMY和SOD 3种同工酶的酶谱及表达强弱在形态建成的不同时期呈现有规律的变化,可作为香果树体细胞胚发生发育特定时期的参考标记. 与胚性愈伤组织的诱导及体细胞胚的发生发育密切相关.非胚性愈伤组织和胚性愈伤组织酶谱差异明显,胚性愈伤组织中EST和AMY同工酶酶带多且活性高,非胚性愈伤组织中缺乏EST和AMY同工酶表达,AMY同工酶町作为胚性细胞分化和发育的重要标志.香果树体细胞胚形态建成过程 ,球形胚时期的AMY、POD、EST同_T酶活性最强,表明这一时期生理代谢旺盛,是体细胞胚形态建成的关键时期;POD、AMY和SOD 3种同工酶的酶谱及表达强弱在形态建成的不同时期呈现有规律的变化,可作为香果树体细胞胚发生发育特定时期的参考标记. 与胚性愈伤组织的诱导及体细胞胚的发生发育密切相关.非胚性愈伤组织和胚性愈伤组织     

对比研究胎儿和成年来源的胰岛前体细胞体外增殖和分化潜能

对比研究胎儿和成年胰岛来源的前体细胞(hIPCs)体外增殖和分化,探讨胎儿和成年hIPCs的体外增殖和分化潜能,为细胞移植治疗糖尿病提供实验数据。体外分离培养胎儿和成体hIPCs,诱导分化,通过免疫组织化学、分子生物学方法,检测hIPCs体外增殖潜能和分化效率。与成年hIPCs相比较,胎儿hIPCs在体外具有更强的增殖潜能,BrdU掺入率明显高于成年胰岛来源的hIPCs(P0.05)。体外诱导hIPCs分化成具有分泌胰岛素功能的胰岛样细胞团(ICCs),免疫荧光染色显示ICCs表达Insulin、Glucagon和Somatostatin,定量检测Insulin、PDX-1和ISL-1基因的相对表达量,胎儿来源的ICCs明显高于成年ICCs(P0.05),分别是成年ICCs的1.69倍、1.51倍和1.81倍。提示胎儿来源的胰岛前体细胞具有较强的增殖和分化能力。     

c—erbB2对大鼠黄体细胞hCG诱导的孕酮分泌的影响

采用离体细胞体外孵育法,研究反义ｃ－ｅｒｂＢ２寡脱氧核苷酸（ａｎｔｉｓｅｎｓｅ ｃ－ｅｒｂＢ２ ＯＤＮ）对大鼠黄体细胞ｈＣＧ诱导的孕酮分泌的影响,及其与外源性ｃＡＭＰ和Ｃａ＾２＋以及蛋白抑制剂放线菌酮（ＣＹＸ）之间的关系。结果表明,反义ｃ－ｅｒｂＢ２以剂量相关方式抑制黄体细胞ｈＣＧ诱导的孕酮的产生,同时使ｃ－ｅｒｂＢ２蛋白染色阳性的黄体细胞百分数下降,无义ｔａｔ ＯＤＮ没有相应的作用。１０＾－４     

2，4-D诱导的花生体细胞胚发生的组织学研究

花生成熟胚胚叶在MS附加 2 0mg/L 2 ,4_D的培养基上诱导 2 0d后 ,转移至无激素培养基MS0 继续培养 ,可获高频体细胞胚发生。组织学观察表明 ,体细胞胚起源于胚叶上表皮及表皮下数层细胞 ,这些细胞脱分化形成细胞质浓厚、细胞核大的胚性细胞团 ,胚性细胞团继续分裂形成体细胞胚。体细胞胚的发育过程经历球形胚、心形胚、鱼雷胚、子叶胚四个时期     

2,4-D诱导的花生体细胞胚发生的组织学研究

花生成熟胚胚叶在佃附加20mg/L 2,4-D的培养基上诱导20d后,转移至无激素培养基MS0继续培养,可获高频体细胞胚发生。组织学观察表明,体细胞胚起源于胚叶上表皮及表皮下数层细胞,这些细胞脱分化形成细胞质浓厚、细胞核大的胚性细胞团,胚性细胞团继续分裂形成体细胞胚。体细胞胚的发育过程经历球形胚、心形胚、鱼雷胚、子叶胚四个时期。     

c-erbB_2对大鼠黄体细胞hCG诱导的孕酮分泌的影响

采用离体细胞体外孵育法 ,研究反义c erbB2 寡脱氧核苷酸 (antisensec erbB2 ODN)对大鼠黄体细胞hCG诱导的孕酮分泌的影响 ,及其与外源性cAMP和Ca2 以及蛋白抑制剂放线菌酮 (CYX)之间的关系。结果表明 ,反义c erbB2 以剂量相关方式抑制黄体细胞hCG诱导的孕酮的产生 ,同时使c erbB2 蛋白染色阳性的黄体细胞百分数下降 ,无义tatODN没有相应的作用。10 -4 mol/L的二丁酰cAMP能明显反转反义c erbB2 ODN对孕酮产生和c erbB2 表达的抑制作用 ,钙离子通道阻断剂维拉帕米和蛋白抑制剂CYX对此抑制作用有协同效应。该实验说明c erbB2 参于hCG诱导黄体细胞生孕酮作用     

研发动态

中科院广州健康研究院破解体细胞"变身"多能干细胞的分子障碍诱导干细胞是指在外源因子诱导下,体细胞在体外"变身"为与胚胎干细胞具有同样特征的多能干细胞。这在组织器官移植、基因治疗中具有重要意义,在新药开发筛选、新基因发掘、毒性     

TDZ诱导花生幼叶的不定芽和体细胞胚发生的组织学观察

花生实生苗幼叶接种于MS TDZ 0.2mg/L NAA0.4mg/L诱导培养基上经诱导培养,继而转移到无激素培养基MS可获得不定芽和体细胞胚。组织学观察表明,花生不定芽和体细胞胚均起源于愈伤组织表层,不定芽为多细胞起源,而体细胞胚起源于单个胚性原始细胞。体细胞胚的发育经历多细胞原胚、球形胚、心形胚、鱼雷胚和子叶胚等时期发育成小植株。     

酵母单杂交系统分离胡萝卜生长素应答元件结合因子

高等植物胚根发育过程中, 生长素是植物细胞进行分裂、延伸和分化的信号, 对根的形成等起着不可缺少的促进作用. 生长素应答元件(AuxRE)存在于很多生长素诱导基因的启动子中, 并具有对生长素作用的应答活性. 本研究构建了特定发育时期的胡萝卜体细胞胚cDNA-AD融合表达文库, 同时构建了含有生长素应答元件的重组报告质粒. 以生长素应答元件为诱饵, 通过酵母单杂交系统筛选获得1个阳性克隆, 该阳性克隆在酵母中表达的AxRF1蛋白能够在体外结合实验中与生长素应答元件结合, 对AxRF1是否有可能参与胡萝卜体细胞胚中生长素诱导基因的表达调控进行了讨论.     

白Qian体细胞胚胎发生的细胞组织学和淀粉积累动态的研究

以白Ｑｉａｎ的成熟种胚为外植体,诱导体细胞胚胎发生。整体染色封片和组织切片的观察结果表明,白Ｑｉａｎ体细胞胚起源于胚性愈伤组织的单个细胞。胚性细胞经过一次不均等分裂产生两个细胞,即胚细胞和胚柄细胞。然后依次经过胚性胚柄团、球形胚、心形胚及鱼雷形胚阶段,最后发育成具有子叶的成熟胚。通过ＰＡＳ反应研究后发现,在体细胞胚发育过程中,淀粉粒在胚性胚柄团时期开始积累,至心形胚时期达到积累高峰,且淀粉粒的分布     

影响大豆体细胞胚诱导因素的研究

体细胞胚的诱导是大豆体外再生的关键。基因型,诱导光周期,外植体的英位,蔗糖浓度等因素,可导致诱导频率及正常胚比例不同,影响植株再生。本研究选用黑龙江省主栽大豆基因型的未成熟子叶,在含高浓度生长素的MSB培养基上诱导体细胞胚产生。合丰25和东农7819为优选基因型,生育前期下部英位大小为2－4mm未成熟子叶体细胞胚发生效果最好;四种光周期下体细胞胚诱导频率相近,但连续弱光了正常胚比例高;NAA诱导优于2－4,D;10mg/1NAA与1．5％蔗糖配比组合最佳。     

人-兔异种核移植构建克隆胚的实验研究

“治疗性克隆”是人类最关注的课题之一,而人体细胞核移植是治疗性克隆的基础和前提。异种核移植的方法虽已被引入人体细胞克隆胚的构建,但供体细胞的类型、培养代数及准备方法与其效率之间的关系尚有待探讨。本实验以不同培养代数和不同准备方法的人卵丘细胞、皮肤成纤维细胞和软骨细胞为供体构建了克隆胚,对其发育情况的比较表明,以卵丘细胞为供体时重构胚的体外发育率高于其余二者,差异显著（P〈0．05）;不同培养代数的成纤维细胞克隆胚和不同冷藏天数供体细胞克隆胚体外发育率无明显差异。此外,本实验还尝试用荧光原位杂交法检测所构建的异种克隆胚核遗传物质的来源,结果显示来自人体细胞。本研究表明,人一兔异种核移植构建克隆胚切实可行;体细胞的类型与核移植效率相关;供体细胞的体外培养传代对克隆胚的发育并无影响;而冷藏是一种简便有效的供体细胞准备方法;此外,用FISH方法对重构胚进行核遗传物质的鉴定切实可行。