一种适宜微量全血检测HBV-DNA裂解液的评价

通过核裂解液与氯仿／酚处理法以及与另四个生产厂家的裂解液对指尖全血处理法的比较,检测ＨＢＶ－ＤＮＡ的结果表明：该裂解液可更有效除去全血中对Ｔａｑ酶有抑制性作用的血卟啉,扩增结果与用血清作标本结果一致,表明指尖全血用这种裂解液处理完全替代血清标本用于ＨＢＶ－ＤＮＡ的ＰＣＲ检测。     

一种适宜微量全血检测HBV—DNA裂解液的评价

通过核裂解液与氯仿／酚处理法以及与另四个生产厂家的裂解液对指法全血处理法的比较,检测ＨＢＶ－ＤＮＡ的结果表明：该裂解液可更有效除去全血中对Ｔａｑ酶有抑制性作用的血卟啉、扩增结果与用血清作标本结果一致,表明指尖全血用这种裂解液处理完全替代血清标本用于ＨＢＶ－ＤＮＡ的ＰＣＲ检测。     

用ESR自旋捕集技术研究正常人和病人血清中的SOD活力

本文探讨了用ESR自旋捕集技术测定SOD活力的有关实验条件,并研究了正常人,疾病和恶性肿瘤病人血清中SOD活力的变化,发现恶性肿瘤病人血清SOD活力明显升高,某些疾病患者亦有升高,各组间有显著统计学差异.与化学发光法测定结果比较表明,ESR法测定SOD活力的特异性优于化学发光法.     

深部真菌感染的微生物学诊断与防治研究

用简单、快速的念珠菌分类鉴定法对657例不同患者标本进行了鉴定,结果121例分得真菌,阳性率18.24％。分得真菌153株,其中酵母样真菌97株,占63.4％;曲霉23株,占15.03％.酵母样真菌97株中念珠菌83株,占酵母样真菌的85.57％。念珠菌中又以白色念珠菌为主,其次为热带念珠菌、克柔氏念珠菌。深部真菌感染∞％以上是由念珠菌引起的。用ELISA和GC法检测念珠菌感染患者血清中Mn—Ag,结果表明患者血清中Mn—Ag浓度明显高于正常人,用念珠菌感染动物后24h,在血清中可测到Mn—Ag,是一个早期快速、特异诊断念珠菌血行播散的方法。丁香、黄连、桂皮、木香对真菌有抑杀菌作用。真菌感染与应用抗生素、激素的数量及时间密切相关。     

免疫印迹法在实验大鼠汉坦病毒监测中的应用及与间接免疫荧光法之比较

用汉坦病毒汉滩株（７６－１１８）重组核蛋白作为免疫印迹法（ＷｅｓｔｅｒｎＢｌｏｔ以下简称ＷＢ）的诊断抗原,用于实验感染大鼠血清抗体效价测定。同时与用汉城株（ＳＲ－１１）感染的Ｖｅｒｏ－Ｅ６细胞作抗原的间接免疫荧光法（以下简称ＩＦＡ）进行比较。ＷＢ法对３／４标本在大鼠接种病毒后第３天测得血清ＩｇＭ阳性,而ＩＦＡ法仅１／４标本出现阳性,ＩＦＡ效价为１：５１２０的血清,ＷＢ效价为１’：４０９６０,且在血清１：１０稀释时反应带亦清晰。两种方法分别测定６４份大鼠血清。甩ＩＦＡ法,４４份（６８．８％）出现类似阳性的荧光颗粒,而用ＷＢ法测定,无特异的反应带出现。非感染Ｖｅｒｏ－Ｅ６细胞作ＩＦＡ抗原,３０份（４６．９％）与正常细胞抗原有反应,此结果表明ＷＢ法在特异性和敏感性方面均高于ＩＦＡ法。ＩＦＡ法中的非特异性反应系血清与细胞成份之反应。     

免疫沉淀法测定乳酸脱氢酶同工酶1的研究

应用免疫沉淀法测定了乳酸脱氢酶同工酶1(LD1).血清与抗血清用量为10:1,加入抗血清5min后再加入与血清量相等的饱和硫酸铵溶液.离心后测定上清液中的LD.总酶活性在618U/L内线性关系良好.二份标本批内精度CV值分别为3.76%和4.70%,批间CV值为7.00%,免疫沉淀法与电泳法高度相关(n=22,r=0.976).72例正常人LD参考值为102.31±16.4U/L,LD1为23.65±4.39U/L,LD1/LD为23.12±3.85%.免疫沉淀法的优点是特异性高,操作简单,可用于自动生化分析仪.精确度高,线性关系好,测定范围宽,是测定LD1的理想方法.     

蜂毒素分子的改造及其基因在毕赤酵母中的表达

为获得保留有抗菌活性而降低溶血作用的蜂毒素,对蜂毒素的分子结构进行了改造.将第5位的Val变为Arg,第15位Ala变为Arg,删除了第16位的Leu.用PCR技术获得了改造后的蜂毒素基因,将其克隆入酵母表达载体pPICZa-A,获得重组表达质粒pPICZa-A-MEA.该质粒转化毕赤酵母菌GS115,甲醇诱导下表达,发酵上清液经抑菌活性、溶血活性测定及亲和层析纯化,结果表明,蜂毒素基因成功地在毕赤酵母中表达,经改造后表达的蜂毒素保留了抗菌活性且溶血活性显著降低,经纯化后用Bradford法测定表达蜂毒素的含量约为0.29mg/ml.     

蜂毒素分子的改造及其基因在毕赤酵母中的表达

为获得保留有抗菌活性而降低溶血作用的蜂毒素,对蜂毒素的分子结构进行了改造。将第5位的Val变为Arg,第15位Ala变为Arg,删除了第16位的Leu。用PCR技术获得了改造后的蜂毒素基因,将其克隆入酵母表达载体pPICZa-A,获得重组表达质粒pPICZa-A-MEA。该质粒转化毕赤酵母菌GS115,甲醇诱导下表达,发酵上清液经抑菌活性、溶血活性测定及亲和层析纯化,结果表明,蜂毒素基因成功地在毕赤酵母中表达,经改造后表达的蜂毒素保留了抗菌活性且溶血活性显著降低,经纯化后用Bradford法测定表达蜂毒素的含量约为0.29mg／ml。     

电化学发光法在检测孕产妇乙肝中的应用

背景与目的：探讨电化学发光法（electrochemiluminescence ECL）在检测孕产妇乙肝病毒中的应用价值,从而正确指导乙肝孕产妇产后的喂养方式。方法：用ELISA法和ECL法平行测定孕产妇血清乙肝病毒血清标志物（HBV—M）,并对ELISA法检测表面抗原为阴性而ECL法为低浓度的标本,用荧光定量PCR测定病毒DNA。结果：ECL法表面抗原的检出率（9．66％）明显高于ELISA法（6.54％）,p〈0.05,ELISA法检测为阴性而ECL法为低浓度的标本,病毒DNA均为阳性。结论：ECL法测定HBV—M的敏感性比ELISA法高,可以更灵敏的检出低浓度的表面抗原,从而可以更好的指导孕产妇产后的喂养方式,但HBcAb阳性率过高。     

应用鞣化载体酶联金葡菌A蛋白的“ELISA”法检测抗核抗体的研究

本文报告用鞣化载体酶联 A 蛋白的“ELISA”法检测 DNA 抗体的研究。以OD 值492nm>0.14为阳性,对60例正常人和104例自身免疫病、心血管病及非免疫性疾病患者的1:25倍稀释血清进行了检测。上述同样标本也用免疫荧光法检测进行比较。酶标法阳性率为69.1%,荧光法阳性率为47.6%,提示酶标法比荧光法有较高的敏感性。本文也对其影响因素进行了探讨。结果显示该法对检测抗核抗体是一种简便、快速、特异、敏感的方法,其 OD 值的测定又具有定性与定量的双重     

胶红酵母虾青素纯品提取及分离纯化方法优化

以胶红酵母ZTHY2作为提取虾青素的出发菌株,通过对其破壁方法、浸提溶剂、皂化方法及提取条件的优化,筛选出胶红酵母虾青素纯品的提取方法。用酸热法、冻融超声波裂解法与二甲基亚砜无水乙醇法等法处理干菌体细胞,用KOH结合甲醇A、甲醇B与乙醇法分别对虾青素粗提液进行皂化处理,分别使用六种展开剂,通过薄层层析鉴定游离的虾青素,用200~300目硅胶对游离的虾青素进行柱层析,获得其纯品,最后用高效液相色谱仪测定虾青素纯品的含量。实验结果表明:胶红酵母ZTHY2干菌体细胞的最佳破壁方法是酸热法,浸提溶剂为乙酸乙酯+乙醇(2∶1)溶液,皂化液为20 g/L KOH的乙醇溶液,皂化条件是40℃、30 min;最佳展开剂和淋洗剂是正己烷+丙酮(5∶2)溶液;高效液相色谱仪测定的游离虾青素比率为35%,提取率为96. 8%。     

葡萄球菌及蜡样芽孢桿菌产生的青霉素内酰胺酶测定新青霉秦1241效价的研究

(一)新青霉素124l在一定条件下,不被耐药性葡萄球菌产生的青霉素内酰胺酶裂解。利用青霉素内酰胺酶裂解青霉素的专属性,以破环新青霉素124l样品中可能含有的青霉素。当无青霉素核存在时,可用蜡样芽孢杆菌产生的青霉素内酰胺酶裂解新青霉素124l,用碘滴定法测定新青霉素1241效价;有青霉素核存在时,应用微生物法测定新青霉 素1241效价。 (二)利用葡萄球菌产生的青霉素内酰胺酶可以鉴刖新青霉素中是否含有青霉素G(或V)。 (三)葡萄球菌产生的青霉素内酰胺酶裂解青霉素G及V的作用速度比率,在作用1小时为l：1．26。进一步研究酶对其他新青霉索与青霉素G裂解速度的此率,可以考虑作为定性鉴别青霉素类型之用。     

城口华溪蟹新模标本指定(十足目:溪蟹科:华溪蟹属)

城口华溪蟹Sinopotamon chengkuense Huang,LuoLiu,1986隶属于溪蟹科Potamidae Ortmann,1896华溪蟹属Sinopotamon Bott,1967。因其模式标本遗失,本文为该物种指定新模,并对其头胸甲、第三颚足、雄性腹部、雄性第一和第二腹肢,以及雌性生殖孔等形态特征予以描述。     

测定胸腺肽含量几种定量方法的比较

本文用凯氏定氮法、双缩脲法及福林－酚法测定了胸腺肽含量,并加以比较,说明三种方法对其含量测定没有显著差异．在实践中可以根据不同条件选择适当的方法进行实验．     

格氏栲群落林窗边缘效应研究

应用Shannon—Wiener物种多样性指数、Simpson生态优势度指标以及边缘效应强度指数,对福建三明格氏栲保护区森林群落林窗的边缘效应现象进行了研究．格氏栲群落的38个林窗样地不同部位上述指标的测定结果表明,用物种多样性指数测定的林窗边缘效应强度值为0．7～1．3左右;而用生态优势度值测定的林窗边缘效应强度值为0．3～1．8左右,林窗边缘区由于边缘效应的作用有增大物种多样性的趋势,林窗的面积及林窗所在的森林群落类型,都对处于不同发育阶段的林窗的边缘效应强度产生影响．从而为格氏栲群落生物多样性保护与森林经营管理提供理论基础．     

亚洲小车蝗痘病毒增效因子的初步研究

OaEPV经2×SDS包涵体碱性裂解缓冲液裂解,离心,分别用上清液及沉淀与绿僵菌孢子混合感染黄胫小车蝗,上清液的增效活性比沉淀大2.5倍。用三种不同方法(2×SDS包涵体碱性裂解液法,0.02 mol/L NaOH裂解法,8 mol/L尿素裂解法)裂解OaEPV所得蛋白液与绿僵菌混用,生测结果表明,包涵体裂解液法制备所得蛋白增效活性最高,NaOH裂解法次之,尿素裂解法制备的蛋白几乎没有增效活性。将OaEPV用包涵体碱性裂解液裂解后,用葡聚糖G-200凝胶柱层析进行分离,出现两个洗脱峰,这两个峰的洗脱液浓缩后进行生物测定,初步表明增效作用主要为第二个峰的蛋白片段。经SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳,第二个峰的蛋白片段的分子量为40kDa左右。     

亚洲小车蝗痘病毒增效因子的初步研究

OaEPV经2×SDS包涵体碱性裂解缓冲液裂解,离心,分别用上清液及沉淀与绿僵菌孢子混合感染黄胫小车蝗,上清液的增效活性比沉淀大2.5倍.用三种不同方法(2×SDS包涵体碱性裂解液法,0.02 mol/L NaOH裂解法,8 mol/L尿素裂解法)裂解OaEPV所得蛋白液与绿僵菌混用,生测结果表明,包涵体裂解液法制备所得蛋白增效活性最高,NaOH裂解法次之,尿素裂解法制备的蛋白几乎没有增效活性.将OaEPV用包涵体碱性裂解液裂解后,用葡聚糖G-200 凝胶柱层析进行分离,出现两个洗脱峰,这两个峰的洗脱液浓缩后进行生物测定,初步表明增效作用主要为第二个峰的蛋白片段.经SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳,第二个峰的蛋白片段的分子量为40 kDa左右.     

抗人铁蛋白单克隆抗体的制备及其在肝癌病人血清铁蛋…

铁蛋白是一种肿瘤相关蛋白质,我们从人肝癌组织中分离纯化了铁蛋白,并筛选到一株抗该铁蛋白的单克隆抗体杂交瘤细胞株（６Ｄ６）,它针对铁蛋白上的构象决定簇,并对人源铁蛋白高度专一。然后我们用此单抗建立了测定铁蛋白浓度的夹心ＥＬＩＳＡ法,并对方法的灵敏度,精确度及特异性作了研究。本法用于测定不同血清标本的结果表明：肝癌病人血清中的铁蛋白浓度明显高于正常人,这可能对临床诊断会有使用价值。     

抗人铁蛋白单克隆抗体的制备及其在肝癌病人血清铁蛋白测定中的应用

铁蛋白是一种肿瘤相关蛋白质。我们从人肝癌组织中分离纯化了铁蛋白,并筛选到一株抗该铁蛋白的单克隆抗体杂交瘤细胞株（６Ｄ６）,它针对铁蛋白上的构象决定簇,并对人源铁蛋白高度专一。然后我们用此单抗建立了测定铁蛋白浓度的夹心ＥＬＩＳＡ法,并对方法的灵敏度,就确度及特异性作了研究。本法用于测定不同血清标本的结果表明：肝癌病人血清中的铁蛋白浓度明显高于正常人,这可能对临床诊断会有使用价值。     

从12S rRNA基因序列研究中国蛙科24种的进化关系

测定了中国蛙科动物24种和蟾蜍科的中华大蟾蜍线粒体12S rRNA基因长约400bp片段的序列。采用邻接法,对其数据的系统发生分析表明24种可分成3个支系：第一个支系包括棘腹蛙、合江棘蛙、棘胸蛙、大头蛙、虎纹蛙、倭蛙、泽陆蛙共７种,其中３种棘蛙组成一个单系;第二个支系由３种湍蛙,即戴云湍蛙、华南湍蛙和武夷湍蛙组成,应属于湍蛙亚科;第三支系包含余下的１４种蛙,其中５种林蛙和４种臭蛙分别组成一个单系;２种侧褶蛙先聚合后,再与弹琴水蛙聚合,２种粗上先聚合在一起,再与由林蛙组成的单系群聚合。第三支系首先与第二支系相聚,然后它们与第一支系形成姐妹群,即由蛙亚科的７个物种组成的第一支系,不与蛙亚科另１４个物种组成的第三支系直接聚合,表明第一支系的物种可能不属于蛙亚科。此外,分子证据提示把陆蛙属、大头蛙属、虎纹蛙属、棘棘属、臭蛙属、粗皮蛙属和侧褶蛙属从原来的蛙属分出有其合理性。、