热休克对于高粱细胞质雄性不育系线粒体数目及其育性的影响(英文)

对高梁雄性不育系 ３ １９７Ａ（３Ａ）及其保持系 ３ １９７Ｂ（３Ｂ）均分别进行热激处理,以常温处理为对照,以处于花粉母细胞期的小穗为材料提取其线粒体,首次采用流式细胞仪测量线粒体的数量。首次观察到：经热激处理后,不育系 ３Ａ线粒体的数目增加约 ３．５倍;相反,保持系３Ｂ在常温时,线粒体数量为３Ａ的３．５５倍,热激后却无明显变化（Ｆｉｇ．１）。同时取热激处理及常温下３Ａ及３Ｂ的花药淀粉粒作碘化钾染色,结果表明：热激后３Ａ花药中出现饱满淀粉粒（Ｆｉｇ．２）;对其细胞色素氧化酶和过氧物酶同功酶的研究表明,热激后３Ａ电泳酶谱中有新条带出现,而且与３Ｂ的带型一致（Ｆｉｇ．３）。     

AHF及NE、人参皂甙对不同年龄大鼠VSMC c-myc基因和HSP_(70)基因表达的影响

用原位杂交法及激光光密度计灰度扫描半定量法,比较了老年组（２４月龄）与青年组（６周龄）Ｗｉｓｔａｒ大鼠离体培养的主动脉ＶＳＭＣ（５－１０代）ｃ－ｍｙｃ与ＨＳＰ７０基因的表达及红细胞抗高血压因子（ＡＨＦ）、去甲肾上腺素（ＮＥ）与人参皂甙对上述基因表达的影响。结果表明：１．增龄导致的ＶＳＭＣ增殖很可能与ｃ－ｍｙｃ基因的过度表达有关,ＮＥ、ＡＨＦ和人参皂甙可以通过调控ｃ－ｍｙｃ基因的表达来影响ＶＳＭＣ增殖。２．增龄伴随的应激能力下降可能与ＨＳＰ７０基因表达的减少有关。３．ＨＳＰ７０基因也可能参与了ＶＳＭＣ增殖与分化的调控,ＮＥ、ＡＨＦ与人参皂甙可能通过调控ＨＳＰ７０基因的表达来影响ＶＳＭＣ的增殖     

高温处理对高粱雄性不育系育性的影响

高粱雄性不育系植株被高温激发产生可育的黄花药的现象表明,这些植株本身已含有产生可育黄花药的物质和雄性可育基因的存在,但可能被调节因子所抑制。对花药的同工酶电泳分析得到了证明。雄性不育系的黄花药和白花药的酶谱,在单核花粉粒时期有与雄性可育系植株(保持系)相同形式的区带,当发育到三核花粉时期,白花药的某些区带消失,而黄花药则保留了与雄性可育系植株相同的区带。试验还指明了出现黄花药的临界温度为39—40℃和花粉母细胞时期为其对温度的敏感期。     

SREBP介导的基因表达的调控(英文)

SREBP转录因子是脂类代谢的重要调节者。当细胞有脂类需求时,在内质网膜上的SREBP前体通过蛋白水解被激活。然后,氨基端的SREBP片段被运到细胞核内激活靶基因的转录。细胞培养和转基因小鼠模型的研究已经证明,SREBP的主要靶基因包括负责脂肪和胆固醇合成的酶,以及低密度脂蛋白受体。早期对SREBP的研究相当完善地揭示了其前体被激活的机理。最近的研究又使我们认识了细胞核内SREBP的调控机理。在细胞核中,SREBP会结合特定的转录辅助因子,刺激或抑制其靶基因的转录,这些转录辅助因子包括CBP/p300和Mediator蛋白复合体。此外,细胞核内SREBP的稳定性受磷酸化和乙酰化的调节。细胞核内SREBP的这种蛋白质相互作用和修饰,使细胞内外信号(如胰岛素或氧化应激)更好地控制脂类合成。在正常生理状态下,脂质动态平衡是严格保持着的,然而,在有些病理条件下,如肥胖、二型糖尿病、心血管疾病和脂肪肝,SREBP往往会失调。因此,SREBP的新调控机制可能对治疗代谢性疾病提供新的机遇。     

囊胚形成的基因表达与调控(英文)

囊胚形成是胚胎早期发育过程中一个重要阶段 ,涉及几个重要的生理事件 ,即细胞融合 (compaction ,亦称致密化作用 )、囊胚腔出现、囊胚腔扩张及滋养层和内细胞团的分化。在细胞间连接蛋白的作用下 ,各种细胞间连接方式逐步建立起来 ,在合子型基因组表达调控下 ,促进了最终囊胚的形成。细胞间连接蛋白和细胞粘附相关蛋白参与组建各种细胞间连接 ,参与细胞融合、囊胚腔形成、滋养层分化和囊胚扩张等过程。通过顶部的紧密连接、侧部的缝隙连接和桥粒 ,建立起细胞的连接复合体。在人胚胎 8 细胞之前 ,卵裂球细胞界限明显 ,可能以中间连接方式相互作用 ;8 细胞期发生致密化作用 ,通过紧密连接将细胞分成顶部和基部 ,使得胚胎处于半封闭状态 ,促进胚胎内部积液 ,形成囊胚腔。细胞融合的同时也产生缝隙连接。桥粒最初出现在人胚胎达到 3 2 细胞阶段 ,桥粒连接参与囊胚腔形成以及在囊胚扩张时维持滋养层的稳定性。桥粒由一些跨膜粘蛋白组成 ,包括参与细胞内粘附的桥粒子和桥粒球以及一些细胞质内蛋白 (如desmoplakins,plakoglobin ,plakophilin) ,由细胞内蛋白质形成空斑结构并介导细胞角蛋白丝固定。对植入前牛胚胎的研究表明 ,只有DcII,DcIII和plako三种桥粒蛋白参与桥粒组建。在鼠囊胚中DcII的表达部位位于     

通过诱导剂作用于启动子的条件性基因表达(英文)

通过遗传工程技术获得的转基因动植物对分析某些生化过程和发育途径极为有用。通过化学诱导剂作用于启动子的条件性基因表达是分子生物学和生物技术应用研究中的强有力的手段。建立于目标基因激活和失活基础之上的几个化学分子诱导基因表达系统已有报道。将来自于原核生物、昆虫和其它动物的调节因子应用于新的物种有利于促进转基因技术的应用和有关基因的时空表达研究。本文综述了有关的基因表达调节系统 ,启动子激活的基因表达系统 ,启动子失活的基因表达系统 ,以及可诱导的基因过度表达和反义抑制系统     

猪肌肉组织Col3a1基因表达的发育性变化及其对肌内胶原特性的影响(英文)

以30~90kg体重莱芜猪和40~100kg体重鲁莱黒猪共84头去势公猪为试验对象(每组6头),采用相对定量RT-PCR方法,以β-actin作为内标,研究肌肉中编码Ⅲ型胶原的Col3a1基因表达的发育性变化及其对肌肉中胶原蛋白含量和性质(溶解度)的影响。结果表明:研究的两个品种猪肌肉中Col3a1基因表达的发育性变化基本一致,即随体重的增加,肌肉中Col3a1 mRNA表达呈逐渐增加趋势,但莱芜猪和鲁莱黑猪分别在70kg和80kg体重组表达量略有下降。总体上莱芜猪肌肉组织Col3a1 mRNA表达丰度显著高于鲁莱黑猪(P<0.05)。相关分析表明,莱芜猪肌肉组织Col3a1 mRNA表达的发育性变化与总胶原和不溶性胶原含量呈极显著正相关(P<0.01),与胶原溶解度呈极显著负相关(P<0.01)。鲁莱黑猪肌肉组织Col3a1 mRNA表达的发育性变化与不溶性胶原和胶原溶解度分别呈显著正相关和负相关(P<0.05)。研究结果提示:猪肌肉组织中Col3a1基因表达具有明显的体重发育和品种特征,其mRNA表达对于肌内胶原的含量和性质有重要影响。     

热休克对于高粱细胞质雄性不育系线粒体数目及其育性的影响

对高粱雄性不育系3197A（3A）及其保持系3197B（3B）均分别进行热激处理,以常温处理为对照,以处于花粉母细胞期的小穗材料提取其线粒体,首次采用流式细胞仪测量线粒体的数量。首次观察到：经热激处理后,不育系3A线粒体的数目增加约3．5倍;相反,保持系3B在常温时,线粒体数量为3A的3．55倍,热激后却无明显变化（Fig.1)。同时取热激处理及常温下3A及3B的花药淀粉粒作碘化钾染色,结果表明：热激后3A花药中出现饱满淀粉粒（Fig.2);对其细胞色素氧化酶和过氧物酶同功酶的研究表明,热激后3A电泳酶谱中有新条带出现,而且与3B的带型一致（Fig.3)。     

盐芥热激同源蛋白70基因(Thhsc70)的分子克隆及鉴定(英文)

热激蛋白70(hsp70s)具有分子伴侣的功能,其中在非胁迫条件下表达的hsp70s称为热激同源蛋白70(hsc70)。为更好地了解hsc70基因的特性,鉴定了盐芥(Thellungiella halophila(C. A. Mey. )O. E. Schulz)中编码胞质hsc70蛋白的基因Thhsc70。实验结果表明:在非胁迫条件下,Thhsc70基因具有组织特异性表达;Thhsc70基因受热胁迫和冷胁迫的诱导表达,但几乎不受盐诱导和干旱诱导。Thhsc70基因在拟南芥中过量表达后提高了转基因拟南芥的热耐受性和冷耐受性。     

雄性不育相关基因msLTP的反义RNA验证

根据普通白菜雄性不育相关的脂质转移蛋白基因(msLTP)的cDNA序列设计引物,从普通白菜花蕾的cDNA中扩增出312bp的片段,然后将该片段连接至双元载体pBI12l中,得到反义RNA植物表达载体并导入农杆菌LBA4404菌株中,通过农杆菌介导法转化菜心;利用PCR和Southern blot分析检测得到了25株转基因植株,转基因植株的花粉部分畸形或空瘪,花粉离体萌发率为38.56%,较未转化植株的萌发率(76.32%)降低了37.76个百分点.研究表明,反义RNA技术使msLTP基因沉默而导致了菜心转基因植株的部分花粉发育不良,说明msLTP基因在普通白菜和菜心等花粉发育中具有重要作用.     

激光佐治慢性皮肤溃疡疗效观察及诱导HSP70表达研究

目的:探讨激光治疗慢性皮肤溃疡的疗效及诱导创面组织热休克蛋白70(heat shock prote in 70,HSP70)表达情况。方法:将64例84处慢性皮肤溃疡创面随机分为传统治疗组和激光治疗组,激光治疗组在传统治疗基础上加用激光治疗,所有创面在治疗三周进行疗效判定;同期随机切取5例创面组织,并设正常皮肤为对照,行组织切片HSP70免疫组化染色,计数HSP70阳性细胞数并检测阳性细胞灰度值进行统计学分析;设计引物行RT-PCR检测HSP70mRNA表达情况。结果:两组慢性皮肤溃疡患者经相应治疗均较治疗前明显改善,但激光治疗组创面的治愈率和总有效率明显高于传统治疗组(P<0.05或P<0.01);免疫组化染色显示,正常皮肤和慢性溃疡组织中未见明显HSP70阳性表达细胞,激光治疗后三周后可见较多量的HSP70表达阳性细胞,其阳性细胞计数明显高于其它两组(P<0.01),细胞信号灰度表达明显低于其它两组(P<0.05),而传统治疗组与正常对照组无显著差异;RT-PCR结果发现激光治疗组组织中扩增到一条特异性泳带,大小约268 bp,正常皮肤和传统治疗组组织中未扩增到明显HSP70mRNA基因片段。结论:激光佐治慢性皮肤溃疡具有良好临床疗效,可能与激活创面细胞的热休克内源性保护机制而发挥抗感染和促进愈合作用有关。     

Identification of new subgroup of HSP70 in Bythograeidae (hydrothermal crabs) and Xanthidae

Crabs of the Bythograeidae family (Crustacea: Brachyura: Bythogreoidea) are the only endemic crab family living in hydrothermal fields. The hydrothermal environment is characterized by unique ecological parameters, such as the high temperature gradient around the hydrothermal chimney (2-350 degrees C), a fluid environment containing high levels of metals and numerous gases. The 70-kDa Heat Shock Protein (HSP70) group is the most-studied HSP, because it is ubiquitous, and a strong positive correlation has been found between the amounts of HSP70 produced in response to stress, and the ability of the organism to withstand stressful conditions. The 70-kDa heat shock protein genes from Bythograeids (species analyzed: Bythograea thermydron, Cyanagraea praedator and Segonzacia mesatlantica) were characterized. Our results revealed that Bythograeidae possess genes which are similar with those present in Xanthids (coastal crabs). The deduced protein sequences displayed motifs distinct from those in the other crustacean HSC70/HSP70s available in the databases. Phylogenetic analysis showed that these members of HSP70 family identified in Bythograeidae and Xanthidae constitute a new subgroup within this family.     

汉滩病毒感染诱导热休克蛋白70表达

为了解汉滩病毒感染后细胞的应激反应及ＨＳＰ７０的表达与病毒复制的关系,在汉滩病毒Ａ９株感染Ｖｅｒｏ－Ｅ６细胞后,用免疫组织化学及核酸分子原位杂交法,对细胞ＨＳＰ７０基因的表达进行了检测。结果表明,汉滩病毒感染细胞４ｈｙ后即可诱导Ｖｅｒｐ－Ｅ６细胞表达ＨＳＰ７０,表达可持续至感染后５ｄ且ＨＳＰ７０在细胞内的分布也有改变。提示汉滩病毒可直接诱导ＨＳＰ７０的高表达。     

高粱雄性不育系热激前后线粒体的变化与育性的关系

高粱雄性不育系3197A（3A）在花粉母细胞期进行热激处理后由不育变为可育。提取其处理小穗线粒体用流式细胞仪计数进行分析。结果发现经热激处理后,3A不育系的线粒体数目由1.55×106个／mg鲜穗增加至7.1×106／mg。同时对热激处理后3A的花粉育性及同工酶进行了研究,发现热激后3A的花粉粒变的饱满并可被I2朘I 溶液染色,其细胞色素氧化酶和过氧化物酶的电泳酶谱中出现与保持系3B一致的酶带。     

基因工程创造新的植物雄性不育系研究的新进展

报道了利用基因工程方法创造植物雄性不育系,恢复系及不育系的筛选和保留的研究成果。     

温度,热激蛋白与高粱育性的变化

高粱不育系3A在热激(43～45℃)诱导下结出了种子,由不育系转变为可育系。比较3A和3B线粒体在热激条件的热激蛋白得知,它们的热激蛋白是由核编码的,在细胞质中合成后才运到线粒体中,热激2h,3A出现70、31、24、18和16kDa 5条蛋白带,3B除出现上述5条蛋白带外还多出现96、94kDa 2条,而且70kDa含量比3A大。热激4h,3B的96、94kDa消失,两系趋于一致。此时,3A和3B线粒体总蛋白比热激前大量增加。此后HSPs急剧降低。热激8h,3B线粒体仅有70、31、24和16kDa 4条蛋白带,70kDa特别明显,而3A则全部消失。从而表明,HSPs在3B中是稳定的,在3A中是缺乏或不稳定的,这些差异可能与3B育性稳定性及3A不育性有关。     

Modulation of HSP70 GlcNAc-directed lectin activity by glucose availability and utilization

It is well-accepted that protein quality control (occurring either after protein synthesis or after cell damage) is mainly ensured by HSP, but the mechanism by which HSP decides whether the protein will be degraded or not is poorly understood. Within this framework, it has been hypothesized that O-GlcNAc, a cytosolic and nuclear-specific glycosylation whose functions remain unclear, could take a part in the protection of proteins against degradation by modifying both the proteins themselves and the proteasome. Because the synthesis of O-GlcNAc is tightly correlated to glucose metabolism and Hsp70 was endowed with GlcNAc-binding property, we studied the relationship between GlcNAc-binding activity of both Hsp70 and Hsc70 (the nucleocytoplasmic forms of HSP70 family) and glucose availability and utilization. We thus demonstrated that low glucose concentration, inhibition of glucose utilization with 2DG, or inhibition of glucose transport with CytB led to an increase of Hsp70 and Hsc70 lectin activities. Interestingly, the response of Hsp70 and Hsc70 lectin activities toward variations of glucose concentration appeared different: Hsp70 lost its lectin activity when glucose concentration was >5 mM (i.e., physiological glucose concentration) in contrast to Hsc70 that exhibited a maximal lectin activity for glucose concentration approximately 5 mM and at high glucose concentrations. This work also demonstrates that HSP70 does not regulate its GlcNAc-binding properties through its own O-GlcNAc glycosylation.