五种缘毛类纤毛虫遗传关系的ISSR研究

应用ISSR分子标记揭示了5种缘毛类纤毛虫(Carchesium polypinum,Epistylis chrysemydis,E.plicatilis,E.urceolata和Vorticella campanula)的遗传关系.从34个引物中筛选到13个多态性高的引物进行研究.得到的遗传距离(0.666 7～1.000 0)显示ISSR技术具有较高的分辨率.依据构建的UPGMA聚类树,V.campanula首先和其他种类分开;C.polypinum和E.chrysemydis聚在了一起;在3种Epistylis纤毛虫中,E.plicatilis和E.urceolata聚在了一起.对比由核糖体小亚基RNA基因序列构建的系统发育树,发现:1)ISSR引物在缘毛类纤毛虫基因组中可以得到多态扩增;2)C.polypinum与Epistylis的关系近于V.campanula,在缘毛类纤毛虫分类中,单生或群居是重要的系统发育特征;3)E.plicatilis和E.urceolata的关系近于E.chrysemydis.在Epistylis属纤毛虫中,柄的中空与否是一个有用的系统发育和分类特征.本研究表明ISSR方法在纤毛虫相近和相似种遗传关系研究中是一种新的有用方法.     

缘毛类纤毛虫伸缩泡收缩频率的研究

纤毛虫伸缩泡的主要功能是排出进入体内的多余水分及部分代谢废物(Kudo,1966)。Kitching(1948),Tsukuda et al.(1984)等曾对纤毛虫伸缩泡的收缩频率进行研究,但国内尚未见这方面的报道。鉴于缘毛类纤毛虫对环境的生物监测及污染水体的生物治理中具有重要作用,为探索有关规律,我们测定了53种缘毛类纤毛虫伸缩泡的收缩频率以及盐度和温度对伸缩泡收缩频率的影响。材料和方法缘毛类纤毛虫(简称缘纤虫)多固着在水生动植物及杂质上,可通过采集水生动植物、水中杂质或水中挂片得到。将采得的被固着物直接放于显微镜下观察,鉴定种类,以秒表记录每…     

四种淡水缘毛类纤毛虫的形态学研究

通过活体显微观察及银染法对采自武汉东湖的4种固着缘毛类纤毛虫: 粗茎睫纤虫Ophrydium crassicaule Penard, 1922, 念珠伪钟虫Pseudovorticella monilata (Tatem, 1870) Foissner & Schiffmann, 1974, 垂盖虫Opercularia nutans (Ehrenberg, 1831) Stein, 1854和一个鞘居虫未定种Vaginicola sp.的活体、纤毛图式、银线系以及细胞核的形态学特征进行详细的描述, 补充和完善了缘毛类纤毛虫的形态学资料, 为纤毛虫分类和系统发育学的研究提供重要信息。此外, 首次在伪钟虫中观察到有性生殖现象, 为纤毛虫生殖进化的研究提供了基础资料。     

锯缘青蟹(Scylla serrata)Hsp70基因cDNA的克隆及序列分析

采用RT-PCR及RACE技术克隆锯缘青蟹(Scylla serrata)的热休克蛋白Hsp70基因并进行序列分析。克隆测序后拼接得到一条长2482 bp的cDNA序列,该序列ORF(Open reading frame,开放阅读框)为1950 bp,编码649个氨基酸,分子量约为71.06 kD,理论等电点为5.24。3'UTR(untranslated region,非编码区)为158 bp,5'UTR为40 bp。通过antheprot分析发现2个Hsp70家族的签名序列:IFDLGGGTFDVSIL,IVLVGGSTRIPKIQK;Dnak特征基序DLGTT-S-V;非细胞器基序:RARFEEL;核定位信号标签:KKDPSESKRALRRL;胞质Hsp70特征基序EEVD。同源性分析表明,锯缘青蟹Hsp70编码区核苷酸序列与凡纳滨对虾(Litopenaeus vannamei)、斑节对虾(Penaeus monodon)、罗氏沼虾(Macrobrachium rosenbergii)的相似性分别为84.02%、83.87%和79.60%;核苷酸序列所推导出的Hsp70氨基酸序列,与凡纳滨对虾、斑节对虾和罗氏沼虾的相似性分别为92.79%、92.17%和96.47%。本研究克隆了锯缘青蟹Hsp70基因,为进一步深入研究锯缘青蟹的抗逆机理及其遗传改良奠定了基础。     

利用三种分子标记研究缘毛类纤毛虫的系统发育地位

为了探讨缘毛类纤毛虫的系统发育地位 ,利用RAPD方法得到了 9种缘毛类纤毛虫、 1种四膜虫和1种喇叭虫的 3个随机引物的电泳带谱 ;测定了 7种缘毛类纤毛虫rRNA基因中的间隔区 1(ITS1)和小亚基核糖体核糖核酸 (SSrRNA)基因序列 ,并构建了相应的系统树。在比较和分析RAPD、ITS1和SSrRNA基因序列在缘毛类纤毛虫系统发育研究中的适用范围的基础上 ,以SSrRNA基因序列为分子标记研究了缘毛类纤毛虫系统发育地位 ,结果表明 :①缘毛亚纲是单系的 ,作为寡膜纲中一个亚纲的分类地位是合理的 ;②缘毛类纤毛虫可能是寡膜纲中较高等的一个类群。     

大鼠Notch 1胞质段的克隆及其表达

Notch 1信号途径参与决定细胞命运,其水解后产生的活性片段——胞质段（Notch 1 intracellular cytoplasmic domain, NICD）能被转运进核,激活下游靶基因的表达.Notch 1参与细胞的增殖、分化、程序性死亡、发育过程中的形态发生和器官形成等许多重要过程.为了获得重组的NICD,以大鼠脑cDNA文库为模板,用PCR方法扩增出编码NICD的基因片段,克隆至谷胱甘肽-S-转移酶（GST）融合表达载体pGEX-KG中,并在大肠杆菌中获得较高水平的表达.表达的融合蛋白GST-NICD分子质量约为120 ku左右,以包涵体和可溶性两种形式存在,易于亲合层析纯化.为制备抗体和进一步的功能研究奠定了基础.     

两种入侵粉虱热激基因Hsp70的克隆及温度胁迫下的种间差异表达

为了检测B型烟粉虱和温室白粉虱在受到温度胁迫时热激基因Hsp70的差异表达谱,克隆了2种粉虱Hsp70基因的全长cDNA序列,并用实时定量PCR的方法分析了在不同温度条件下该基因的表达谱。结果表明:B型烟粉虱和温室白粉虱的Hsp70基因BTH-sp70和TVHsp70(GenBank登录号分别为DQ093385和EU861391),在5’-非编码区(UTR)中有类似TATA-box样元件;在3’-UTR中有poly(A)信号AATAA和富含A-T区;根据基因开放阅读框序列(ORF)推导的氨基酸序列均含有全部3个Hsp70蛋白家族高度保守的基序。在整个检测的温度范围内(-19℃～46℃),诱导温室白粉虱Hsp70表达的起始温度(Ton)或最大温度(Tmax)要比B型烟粉虱低2.5℃～7.5℃。这些结果表明,所克隆的基因属于有功能的温度诱导型Hsp70基因;在基因表达水平上,温室白粉虱比B型烟粉虱更耐冷,而后者更耐热;Hsp70的Ton(或者Tmax)能代表这2种粉虱的温度耐受能力。本研究结果在一定程度上解释了自然界中这2种粉虱种群地理分布和季节发生差异的原因。     

西藏三种苔藓栖生纤毛虫的形态和系统发育分析

本研究利用活体观察和蛋白银染色方法对采自西藏日喀则和那曲的3种苔藓栖生纤毛虫,鬃异源棘尾虫(Tetmemena pustulata)、棘毛虫未定种(Sterkiella sp.)和殖口虫未定种(Gonostomum sp.)进行了形态学研究,描述了活体、核器以及纤毛图式等形态学特征.同时,测定了这3种纤毛虫的SSU r...     

一种淡水缘毛类纤毛虫————沟钟虫的形态学研究

利用活体观察及蛋白银染色技术对一淡水缘毛目纤毛虫——沟钟虫（Vorticella convallaria）的形态学和表膜下纤维系进行了研究。结果表明：沟钟虫的活体个员自然伸展时外形较稳定,并呈明显的倒置钟状,长宽约为50—85μm×40—75μm;口围缘完全外展时为虫体最宽处;伸缩泡一个,较大,位于口围唇下方及口前庭的左侧。胞质均匀而透明,无脂肪滴存在,游泳体呈圆柱形。细胞表面横纹从口围唇到反口纤毛环为74—78条,自反口纤毛环到帚胚为18—24条。大核呈大幅度盘绕的长肠状,两端高度弯曲,纵贯于细胞内。蛋白银制片后表膜下纤维系特征为：虫体纵向纤维稀疏而粗壮,37—42条,似灯笼状;口围盘纤维呈典型的倾斜态分布,并呈放射状排列。第三咽膜（P3）在近口末端处呈明显的分离态,可视为该物种重要的分类学依据。     

基于线粒体细胞色素b基因序列的虹雉属鸟类的系统发育关系

通过雉科虹雉属(Lophophorus)、角雉属(Tragopan)、勺鸡属(Pucrasia)和血雉属(Ithaginis)7种鸟类的细胞色素b(cyt b)基因序列比较,构建的虹雉属及其近缘属的分子系统树表明：①3种虹雉构成一个单系群(monophyletic group),虹雉属与角雉属、勺鸡属构成一个单系群;②虹雉属内分为白尾梢虹雉,以及棕尾虹雉和绿尾虹雉两个演化枝。综合分子系统学、地理分布格局和形态学的证据,推测虹雉属鸟类起源于中国的横断山脉,其中繁衍生活在原地的一枝演化为白尾梢虹雉;另一枝则分别进入喜马拉雅山区(西)和中国西南部(东),向西的演化为棕尾虹雉,向东的则为绿尾虹雉。     

Distinguishing integral and receptor-bound heat shock protein 70 (Hsp70) on the cell surface by Hsp70-specific antibodies

Cell Stress & Chaperones journal has become a major outlet for papers and review articles about anti-heat shock protein (HSP) antibodies. In the last decade, it became evident that apart from their intracellular localization, members of the heat shock protein 90 (Hsp90; HSPC) and Hsp70 (HSPA) family are also found on the cell surface. In this review, we will focus on Hsp70 (HSPA1A), the major stress-inducible member of the human Hsp70 family. Depending on the cell type, the membrane association of Hsp70 comes in two forms. In tumor cells, Hsp70 appears to be integrated within the plasma membrane, whereas in non-malignantly transformed (herein termed normal) cells, Hsp70 is associated with cell surface receptors. This observation raises the question whether or not these two surface forms of Hsp70 in tumor and normal cells can be distinguished using Hsp70 specific antibodies. Presently a number of Hsp70 specific antibodies are commercially available. These antibodies were generated by immunizing mice either with recombinant or HeLa-derived human Hsp70 protein, parts of the Hsp70 protein, or with synthetic peptides. This review aims to characterize the binding of different anti-human Hsp70 antibodies and their capacity to distinguish between integrated and receptor-bound Hsp70 in tumor and normal cells.     

Hsp70蛋白自身磷酸化对其分子伴侣功能的影响

近年对分子伴侣蛋白Hsp70作用机制的研究发现,其ATP功能区域X光晶体结构有一个新的钙离子结合区域,这个新的功能区域与Hsp70分子的ADP结合、ATP水解及合成有关.有报道认为Hsp70蛋白的NDP激酶样作用,通过形成酸不稳定性自身磷酸化中间体催化γ 磷酸基团在ATP和ADP间传递,组氨酸H89与这个新的区域有密切关系,有可能与Hsp70蛋白形成自身磷酸化中间体有关.本研究运用基因定位诱导突变技术,将89位组氨酸以丝氨酸替代(H89S),通过比较Hsp70野生型及突变型蛋白的自身磷酸化过程的改变,及其对Hsp70蛋白体外荧光素酶活性影响的不同,初步探讨Hsp70作用机制.结果发现,突变的H89S蛋白自身磷酸化过程及体外变性荧光素酶重折叠受到抑制.野生型蛋白未受到影响,野生型Hsp70可以形成酸不稳定的自身磷酸化中间体,产生CDP依赖性解磷酸反应,而H89S突变型蛋白不能形成这种反应.89位组氨酸点突变能显著降低ATP酶交换反应及体外变性荧光素酶重折叠水平,但它的自身磷酸化可能并非唯一必需的介导位点或只是一个选择性的功能侧链.     

以mtDNA细胞色素b基因探讨斑翅山鹑的分类地位

以线粒体DNA细胞色素b(mtDNA Cytb)基因作为分子标记,提取鸡形目雉科10个属18个样本的DNA,PCR扩增自动测序,获得序列长度828bp。将山鹑属中的斑翅山鹑(Perdix dauuricae)与其近缘属排序对比,分别以角叫鸭(Anhima cornuta)和海龟(Kachuga dhongoka)为外群,用邻接法、最大简约法和最小进化法构建分子系统发生树。邻接法构建的系统树显示斑翅山鹑与雉聚类,核苷酸序列差异值斑翅山鹑与环颈雉为15．2％,与石鸡为16．1％。分析认为在雉科中斑翅山鹑与雉类更接近,而与真正的鹑亲缘关系较远。同时以mtDNA分析鸟类系统发生时海龟更适合作为外群。以角叫鸭为外群加入西方松鸡(Tetrao urogallus)时,则斑翅山鹑的分类地位不能确定,这可能与鸡形目的适应辐射有关。     

基于线粒体COI基因探讨鹟亚科部分属和种的分类地位

采用PCR扩增、测序的方法,对鹟亚科(Muscicapinae)6属16种鸟类的线粒体COI基因序列1176bp进行测定,并以荒漠伯劳和发冠卷尾作为外群构建Bayes、ML、MP3棵系统发育树。结果支持:寿带属(Terpsiphone)、扇尾鹟属(Rhipidura)、方尾鹟属(Culicicapa)3属与鹟亚科其他鸟类亲缘关系较远,扇尾鹟属与方尾鹟属亲缘关系较近;鹟属(Muscicapa)为单系发生,本研究结果未能确定它与仙鹟属、姬鹟属的进化关系;铜蓝鹟(Muscicapa thalassina)从鹟属中移出,归入仙鹟属。上述结论解决了鹟亚科部分属间的进化关系,为鹟亚科分类系统的研究提供了分子水平证据。     

Hsp70 localizes differently from chaperone Hsc70 in mouse mesoangioblasts under physiological growth conditions

Mouse A6 mesoangioblasts express Hsp70 even in the absence of cellular stress. Its expression and its intracellular localization were investigated under normal growth conditions and under hyperthermic stress. Immunofluorescence assays indicated that without any stress a fraction of Hsp70 co-localized with actin microfilaments, in the cell cortex and in the contractile ring of dividing cells, while the Hsc70 chaperone did not. Hsp70 immunoprecipitation assays confirmed that a portion of Hsp70 binds actin. Immunoblot assays showed that both proteins were present in the nucleus. After heat treatment Hsp70 and actin continued to co-localize in the leading edge of A6 cells but not on microfilaments. Although Hsp70 and Hsc70 are both basally synthesized they showed different cellular distribution, suggesting an Hsp70 different activity respect to the Hsc70 chaperone. Moreover, we found Hsp70 in the culture medium as it has been described in other cell types.     

鹳形目12种鸟类核c-mos 基因和线粒体12S rRNA基因序列分析及其系统发生研究

鹳形目鸟类的传统分类一直存在分歧,而近期的分子系统学研究大多只用单个基因,其结论的可信度需要进一步验证.本文通过核c-mos基因和线粒体12S rRNA基因序列分别和合并分析,采用分子系统学方法探讨了鹳形目6科12种鸟类的系统发生关系.文中测出鹳形目鸟类6种核c-mos基因的片断序列,结合来自Genebank的其他种类的c-mos和12S rRNA基因序列,分别经Clustal W软件对位排列后,以原鸡为外类群用最大似然法、邻接法和最大简约法建立系统树.系统树分析表明, 鹳形目6科之间的系统发生关系总结为：（鹭科,（（鹮科,美洲鹫科）,（鹳科,（鲸头鹳科,锤头鹳科））））.鹭科7个属之间的系统发生关系总结为：（麻（开鸟）属（夜鹭属（池鹭属（苍鹭属（中白鹭属（白鹭属,大白鹭属））））））.分别基于两个单基因的系统树有一定差异,而基于合并数据的系统树支持率和分辨率都高于基于单基因的系统树,表明使用在遗传上相对独立的分子数据合并建立系统树有较高的可信度和分辨率,是一种更好的研究方法.     

基于matR基因序列分析的山茶科系统关系

通过线粒体matR基因序列分析探讨了山茶科的分类学范围和系统演化关系。结果显示,传统山茶科的两个核心——山茶亚科（Theoideae或Camellioideae）和厚皮香亚科（Ternstroemioideae）不构成姐妹群关系,山茶亚科是一个支持率很高的单系类群,厚皮香亚科没有形成单系;山茶亚科下可区分出3个明显的分支,基部的分支由紫茎属（Stewartia）和舟柄茶属（Hartia）组成,木荷属（Schima）、美洲荷属（Franklirda）和美国大头茶属（Gordonia）构成第2个分支,该分支与由山茶属（Camellia）、核果茶属（Pyrenaria）、多瓣核果茶属（Parapyrenaria）、石笔木属（Tutcheria）、大头荣属（Polyspora）和圆籽荷属（Aptersperma）组成的第3个分支互为姐妹群。研究结果很好地支持了Prince和Parks等学者提出的的狭义山茶科（仅含山茶亚科）和狭义大头茶属的概念以及科下3个族（紫茎族Stewartieae、大头茶族Gordonieae和山茶族Theeae）的划分。但本研究更为清晰地揭示了科下3个族间的系统关系,即紫茎族是最基部的分支,山茶族与大头茶族间有更近的亲缘关系。同时,本文认为,厚皮香（亚）科是否为单系类群值得进一步研究。     

Metazoan Hsp70 machines use Hsp110 to power protein disaggregation

Accumulation of aggregation‐prone misfolded proteins disrupts normal cellular function and promotes ageing and disease. Bacteria, fungi and plants counteract this by solubilizing and refolding aggregated proteins via a powerful cytosolic ATP‐dependent bichaperone system, comprising the AAA+ disaggregase Hsp100 and the Hsp70‐Hsp40 system. Metazoa, however, lack Hsp100 disaggregases. We show that instead the Hsp110 member of the Hsp70 superfamily remodels the human Hsp70‐Hsp40 system to efficiently disaggregate and refold aggregates of heat and chemically denatured proteins in vitro and in cell extracts. This Hsp110 effect relies on nucleotide exchange, not on ATPase activity, implying ATP‐driven chaperoning is not required. Knock‐down of nematode Caenorhabditis elegans Hsp110, but not an unrelated nucleotide exchange factor, compromises dissolution of heat‐induced protein aggregates and severely shortens lifespan after heat shock. We conclude that in metazoa, Hsp70‐Hsp40 powered by Hsp110 nucleotide exchange represents the crucial disaggregation machinery that reestablishes protein homeostasis to counteract protein unfolding stress.