树突状细胞与CIK细胞共培养诱生的DCCIK细胞群对肿瘤的杀伤作用

由树突状细胞(DC)与细胞因子诱导的同源杀伤细胞(CIK)的共培养诱生的细胞群(DCCIK)对肿瘤细胞的细胞毒活性的研究。DCCIK细胞体外杀伤肿瘤靶细胞A549(MTT法),效靶比为10∶1、5∶1时杀伤率分别为61%、52%。DCCIK细胞诱导培养3周后,效靶比为10∶1、5∶1时杀伤率分别为64%和56%。数据亦表明DCCIK细胞对靶细胞的杀伤优于CIK细胞。动物体内实验分荷瘤A549、BEL7404和A375三组,每组分(A)DCCIK 化疗、(B)单用化疗。治疗20天、35天后测量各组肿瘤消失率。结果显示:DCCIK 化疗的抑瘤效果明显好于单纯化疗。提示DCCIK细胞有临床应用前景。     

化疗药物对细胞因子诱导的杀伤细胞(CIK)的影响

探讨化疗药物及地塞米松对CIK细胞增殖活性及淋巴细胞亚群的影响。分别选取不同浓度顺铂、氟尿嘧啶、紫杉醇和地塞米松与不同诱导天数的CIK细胞共培养,在加入或不加入IL-2的情况下,采用MTT法检测各种药物对CIK细胞增殖活性的影响,流式细胞术检测CIK细胞中各亚群的比例。顺铂、氟尿嘧啶、紫杉醇及地塞米松均在一定程度上抑制CIK细胞的增殖活性,其中顺铂和紫杉醇表现出明显的剂量依赖性(P0.05);IL-2可对CIK细胞产生保护作用,在一定程度上降低化疗药物对CIK细胞的抑制作用(P0.05)。顺铂主要降低CD3+CD56+亚群比例(P0.05),对CD3+CD4+、CD3+CD8+亚群比例无显著影响(P0.05)。     

细胞因子诱导杀伤细胞对卵巢癌细胞耐药的影响

目的:探究细胞因子诱导杀伤细胞(cytokine-induced killers,CIK)对卵巢癌细胞耐药的影响。方法:选取荷人卵巢癌SKOV3/CDDP耐药细胞株,经培养后将其调整为细胞浓度为1×10~5/L的单细胞悬液,均分为2份,分别设定为实验组和对照组,其中对照组给予贝伐单抗,实验组加入CIK进行刺激,两组培养时间均为48 h,而后使用电镜观察细胞形态,并记录细胞凋亡率,而后吸取培养液上层清液,离心后采用放射免疫分析法测定其细胞因子转化生长因子-α(TGF-α)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的浓度,采用电化学发光法检测糖类抗原125(CA125)及人附睾蛋白4(HE 4)的水平。结果:治疗前,两组细胞形态较为饱满、圆润,无凋亡细胞;治疗后,实验组出现明显细胞萎缩、膜发泡,且出现较多凋亡细胞,实验组细胞凋亡率高于对照组,实验组早期和中晚期凋亡率均显著高于对照组(P0.05)。治疗前,两组细胞上清TGF-α、TNF-α、CA125、HE4水平比较差异无统计学意义(P0.05);治疗后,实验组细胞上清TGF-α、TNF-α、CA125、HE4水水平均显著低于对照组,差异具有统计学意义(P0.05)。结论:较贝伐单抗而言,CIK对卵巢癌耐药细胞具有更强的杀伤作用,能够显著降低CA125、HE4水平。     

DC-CIK细胞免疫治疗晚期结直肠癌患者的远期疗效及其影响因素分析

目的:探讨树突状细胞(DC)联合细胞因子诱导的杀伤(CIK)细胞免疫治疗晚期结直肠癌(CRC)患者的远期疗效及其影响因素分析。方法:收集我院2011年1月至2014年1月收治的112例晚期结直肠癌患者,依据是否接受DC-CIK细胞免疫治疗将患者分为对照组(n=47)和观察组(n=65),分别给予一般化疗方案治疗和化疗联合DC-CIK细胞免疫方案治疗,比较两组患者治疗前后血清肿瘤标志物癌胚抗原(CEA)、淋巴细胞亚群,治疗有效率(RR)、疾病控制率(DCR)、无进展生存期(PFS)和安全性改变,并分析影响疗效的危险因素。结果:两组治疗后CEA水平均显著低于治疗前(P0.05),治疗后对照组CD3+T细胞、CD4+T细胞、CD8+T细胞和NK细胞均显著减少(P0.05),观察组治疗后CD3+T细胞和CD8+T细胞数量显著高于治疗前和同期对照组(均P0.05);对照组RR、DCR和PFS分别为44.68%、65.96%、6.5个月,观察组治疗对应指标分别为46.15%、86.15%、9个月,观察组DCR和FPS均显著高于对照组(P0.05);多因素分析发现TNM分期达到Ⅳ级(P=0.023)和年龄超过60岁(P=0.006)是影响疗效的独立危险因素。结论:DC-CIK细胞免疫治疗晚期结直肠癌安全可靠,能显著改善患者免疫功能控制肿瘤进展,延长生存期,提高生存质量,值得临床推广。     

细胞因子诱导杀伤细胞过继免疫治疗恶性血液肿瘤的临床应用进展

细胞因子诱导的杀伤细胞(cytokine-induced killer cells,CIK cells)是将脐血、外周血和骨髓等不同来源的单个核细胞经适当浓度的IFN-γ、IL-2和CD3单抗等联合诱导后获得的异质细胞群。CIK细胞具有增殖能力强、溶瘤谱广、对耐药细胞株也有杀伤作用,且兼有T细胞强大的杀伤活性和NK细胞(nature killer cells)非主要组织相容性复合体(non-major histocompatibility complex,non-MHC)限制性的特点,使其在肿瘤治疗中具有广阔的临床应用前景。恶性血液肿瘤患者接受CIK细胞过继免疫治疗的生存时间延长,不良反应少,但仍面临许多问题。     

抗原负载DCs诱导的CIK细胞对B16黑色素瘤抑制作用的形态学观察

目的:探讨抗原负载树突状细胞(dentritic cells,DCs)诱导的CIK(cytokine induced killer)细胞对B16黑色素瘤的抑瘤作用。方法:分离、培养DC和CIK细胞,取部分DC进行肿瘤抗原负载,将其与CIK细胞按1:10的比例共培养3d,即为抗原负载的DC-CIK。建立B16黑色素瘤小鼠模型,分别于瘤周围皮下注射经Brdu标记的CIK、DC-CIK、抗原负载DC-CIK。按注射细胞进行分组,测量注射前后各组小鼠的瘤体积,计算抑瘤率,比较其抑瘤作用。应用免疫组化方法和透射电镜观察抗原负载DC-CIK细胞在皮肤中的分布及杀伤肿瘤细胞的形态学表现。结果:抗原负载DC诱导的CIK(细胞组抑瘤率(86.57%)高于CIK细胞组(33.34%,P<0.05)和DC-CIK细胞组(61.08%,P<0.05);光镜下抗原负载DC-CIK细胞主要分布在皮下组织,癌组织周围,特别是癌巢周边。透射电镜下抗原负载DC-CIK细胞体积大,核有切迹,细胞质内细胞器丰富,粗面内质网扩张。细胞表面有突起,与肿瘤细胞密切接触。大量肿瘤细胞凋亡、坏死。结论:CIK细胞经抗原负载DC诱导后抑瘤作用明显强于单纯CIK细胞和DC-CIK细胞。     

自体CIK细胞对化疗后晚期乳腺癌患者影响的临床对照研究

目的:评估自体CIK细胞治疗对改善化疗后晚期乳腺癌患者机体免疫力及生活质量的疗效及安全性。方法:通过开放的、非随机同期对照研究,比较自体CIK细胞治疗与一般对症治疗对化疗后晚期乳腺癌患者外周血T淋巴细胞亚群的影响,运用E-ORTC QLQ-C30生活质量测评量表分析CIK治疗前后患者生活质量改变,观察不良反应。结果:CIK治疗对化疗后晚期乳腺癌患者外周血CD3+、CD3+CD4+、CD3+CD56+T细胞亚群的升高作用优于一般对症治疗,自体CIK细胞治疗后患者临床症状、躯体功能及总健康状况较治疗前有明显改善,无严重不良反应。结论:自体CIK细胞对改善化疗后晚期乳腺癌患者机体免疫力及生活质量有较好疗效及安全性。     

重组人纤维蛋白片段诱导CIK的增殖及对肺癌耐顺铂细胞的杀伤作用

为探讨重组人纤维蛋白片段(RetroNectin)对CIK(Cytokine-induced killer cells)细胞活化、增殖的影响及CIK细胞的免疫学特性和对肺癌耐药细胞DDP-A549 (DDP: Cisplatin)的杀伤作用。提取健康人外周血中单个核细胞, Ⅰ组细胞接种于前一天用RetroNectin和CD3MAb包被好的培养瓶中, Ⅱ组接种于单独用CD3MAb包被好的培养瓶中, 接种当天加入IFN-γ, 第二天加入IL-2诱导CIK细胞。细胞计数法测定CIK细胞的增殖,并绘制细胞生长曲线, MTT法测定细胞杀伤活性,流式细胞术分析细胞表型。扫描电镜和透射电镜下观察CIK细胞对DDP-A549的杀伤和DDP-A549细胞的改变。RetroNectin对CIK细胞有很强的激活作用, 可使其细胞增殖总数达524.77倍, 其主要效应细胞CD3+CD56+可达(31.40±1.91)%; 对肺癌耐顺铂细胞DDP-A549的杀伤作用明显高于其亲代药物敏感株A549(P<0.01)。但两组CIK细胞对靶细胞的杀伤率在相同效靶比时无明显差异(P>0.05)。RetroNectin能显著增强CIK增殖活性, 但对CIK细胞的杀伤活性并无明显影响。CIK能够显著抑制DDP-A549的生长, 可用于耐顺铂肺腺癌的免疫治疗。     

DC与CIK细胞治疗难治复发急性髓细胞白血病的近期临床观察

目的：评估自体DC与CIK细胞治疗难治复发急性髓细胞白血病的近期疗效与安全性。方法：给予20例难治复发急性髓细胞白血病患者树突状细胞（DC）与细胞因子诱导的杀伤细胞（CIK）治疗,20例难治复发的应用同样化疗方案的急性髓细胞白血病患者做为对照组;治疗后4周观察两组患者临床疗效和生存质量（KVS）评分,DC与CIK细胞治疗前和治疗后1周检测T细胞亚群（CD3＋、CD3＋CD4＋、CD3＋CD8＋、CD3＋CD56＋）和细胞因子（IL-12、IL-2、IL-7、IFN-γ及TNF—α）水平的变化。结果：（1）DC与CIK细胞治疗组有效率和KPS评分明显高于对照组（P〈0．05）,所有患者的不良反应轻微,均可耐受。（2）DC与CIK细胞治疗后1周,患者T细胞亚群百分比和细胞因子含量较治疗前均明显升高,其中CD3＋、CD3＋CD56＋及IL-12、IL-7明显升高（P〈0．05）。结论：DC与CIK细胞免疫治疗难治复发急性髓细胞白血病安全有效。     

DC 与CIK细胞治疗难治复发急性髓细胞白血病的近期临床观察

目的：评估自体DC与CIK 细胞治疗难治复发急性髓细胞白血病的近期疗效与安全性。方法：给予20 例难治复发急性髓细 胞白血病患者树突状细胞(DC)与细胞因子诱导的杀伤细胞(CIK)治疗,20 例难治复发的应用同样化疗方案的急性髓细胞白血病 患者做为对照组;治疗后4 周观察两组患者临床疗效和生存质量(KPS)评分,DC 与CIK 细胞治疗前和治疗后1 周检测T细胞亚 群(CD3+、CD3+CD4+、CD3+CD8+、CD3+CD56+)和细胞因子(IL-12、IL-2、IL-7、IFN-酌及TNF-琢)水平的变化。结果：①DC 与CIK 细胞 治疗组有效率和KPS评分明显高于对照组(P<0.05),所有患者的不良反应轻微,均可耐受。②DC 与CIK 细胞治疗后1 周,患者T 细胞亚群百分比和细胞因子含量较治疗前均明显升高,其中CD3+、CD3+CD56+及IL-12、IL-7 明显升高(P<0.05)。结论：DC与CIK 细胞免疫治疗难治复发急性髓细胞白血病安全有效。     

化疗联合DC和CIK方案治疗非小细胞肺癌的临床疗效观察

目的：探讨化疗联合树突状细胞（DC）和细胞因子诱导的杀伤细胞（ELK）方案治疗非小细胞肺癌的临床疗效。方法：随机选取2008年10月份．2011年02月份因非小细胞肺癌就诊于我院进行治疗的患者120例,随机分为治疗组60例患者（采用化疗联合树突状细胞（DC）和细胞因子诱导的杀伤细胞（CIK方案治疗）,对照组60例患者（采用常规化疗）,统计两组患者的治疗效果以及生活质量情况,并对结果进行统计分析。结果：治疗组患者治疗总有效率为68．4％,生活质量提高率为88．4％,明显好于与对照组,经统计分析,P〈0．05,差异存在显著性。结论：化疗联合树突状细胞（DC）和细胞因子诱导的杀伤细胞（CIK）方案治疗非小细胞肺癌能够显著改善患者的生活质量,是治疗非小细胞肺癌的有效方法。     

化疗联合DC 和CIK方案治疗非小细胞肺癌的临床疗效观察

摘要目的：探讨化疗联合树突状细胞(DC)和细胞因子诱导的杀伤细胞(CIK)方案治疗非小细胞肺癌的临床疗效。方法：随机选取 2008年10月份-2011 年02 月份因非小细胞肺癌就诊于我院进行治疗的患者120 例,随机分为治疗组60 例患者（采用化疗联合 树突状细胞(DC)和细胞因子诱导的杀伤细胞(CIK)方案治疗）,对照组60 例患者（采用常规化疗）,统计两组患者的治疗效果以及 生活质量情况,并对结果进行统计分析。结果：治疗组患者治疗总有效率为68.4%,生活质量提高率为88.4%,明显好于与对照组, 经统计分析,P<0.05,差异存在显著性。结论：化疗联合树突状细胞(DC)和细胞因子诱导的杀伤细胞(CIK)方案治疗非小细胞肺癌 能够显著改善患者的生活质量,是治疗非小细胞肺癌的有效方法。     

抗GPC3 C端抗体辅助杀伤肝癌细胞HepG2的活性检测及抗原表位鉴定

目的：检测制备的7株抗磷脂酰肌醇蛋白聚糖3（GPC3）蛋白C端单克隆抗体是否具有辅助杀伤肝癌细胞的活性,并研究其识别的抗原表位。方法：用细胞增殖法检测制备的抗体是否具有抗体依赖细胞介导的细胞毒性（ADCC）活性;用生物信息软件分析GPC3蛋白C端（359～580残基）的结构及抗原特征,并据此将其分为4个截短片段,将克隆的各基因片段分别连接到原核表达载体pGEX-4T-1中,进行蛋白表达和纯化,用间接ELISA和Western印迹分析GPC3C端单克隆抗体的表位识别情况。结果与结论：制备的7株单克隆抗体对肝癌细胞HepG2均具有不同程度的辅助杀伤作用,其中5号单克隆抗体的辅助杀伤效果最好;表达并纯化了GPC3C端4个截短片段的重组蛋白;间接ELISA和Western印迹检测结果表明,7株抗体均特异性结合GPC3蛋白的473～525残基区段。