柞蚕生产与生态环境的关系

柞蚕生产是辽宁省的传统产业和优势产业,在实现农业增效、农民增收、建设小康社中发挥着重要作用。柞蚕生产与生态环境的关系,直接关系到柞蚕生产能否发展,以及怎样发展的问题。本文从理论和生产的角度,分析了柞蚕场和柞蚕生产与生态环境的关系,提出了柞蚕场遭受破坏的主要原因,并就如何充分利用资源优势,发展柞蚕生产,实现经济效益、生态效益和社会效益同步增长提出了建议。     

柞蚕微孢子虫孢子分离纯化方法

柞蚕微粒子病是柞蚕Antheraea pernyi(Guérin-Méneville)的主要胚胎传染性病害,病原为柞蚕微孢子虫Nosema pernyi(Wenet Ding),其病原分离提纯技术研究对于柞蚕微粒子病的防治具有重要意义。本文利用差速离心和Percoll密度梯度离心法研究了柞蚕微孢子虫孢子的分离纯化方法,结果表明,采用不连续密度梯度分离纯化柞蚕微孢子虫孢子的效果比单一浓度的效果好,以浓度为25%、50%、75%、100%不连续梯度,15000r/min离心30min分离纯化得到的柞蚕微孢子虫孢子纯净度高。     

抗柞蚕核型多角体病毒病免疫卵黄抗体制备和防治效果研究

柞蚕脓病是柞蚕Antheraea pernyi养殖面临的主要病害之一。卵黄球蛋白作为来源丰富的多克隆抗体,提供了一种经济、安全、高效的动物疾病防治手段。本研究使用柞蚕脓病病原柞蚕核型多角体病毒(Ap NPV)免疫产蛋母鸡,制备抗Ap NPV免疫卵黄抗体(Ig Y),并测定了Ig Y对柞蚕的安全性;随后饲喂试验确定了Ig Y的最佳稀释倍数;探索添食Ig Y对柞蚕脓病的预防和治疗效果。结果显示:(1)免疫抗原后6～8周收集的Ig Y具有最高效价,达到1∶210;(2)安全性试验未发现不良影响,且Ig Y最佳稀释倍数为64倍;(3)同时饲喂Ig Y和病毒处理的叶片时,柞蚕脓病发病率显著降低,对柞蚕脓病抑制效果最佳;先饲喂病毒叶后给予Ig Y叶也有一定的效果。研究结果表明,抗Ap NPV Ig Y对柞蚕脓病具有防治作用,为柞蚕脓病的防治探索了一条新途径。     

中国柞蚕寄生复索线虫生活史的初步研究

我国有关昆虫寄生线虫的生活史知识和研究资料还是非常贫乏的。线虫是柞蚕主要寄生虫,在辽宁、吉林、山东、河南、贵州等省危害柞蚕非常严重,使柞蚕生产受到很大损失。如何有效地防治线虫的危害,保证柞蚕生产,已成为多年来急待解决的一个难题。1973年以来,我们对柞蚕寄生线虫进行了大量的工作,初步鉴定有索科线虫(Mermithidae)     

介绍柞蚕染色体制片的三种方法

一、柞蚕脑细胞染色体压片法;二、柞蚕精巢染色体涂片法;三、柞蚕精巢染色体压片法     

中国柞蚕寄生索科线虫(Mermithidae)分类的初步研究

在我国,柞蚕寄生线虫是柞蚕的主要寄生虫病,在辽宁、吉林、山东、河南、贵州五个省的部分放养柞蚕区均有发生。寄生线虫以辽宁省的分布最广,危害也最重,目前已知分布在16个县102个公社,其中受害严重的蚕场也有70万亩之多。在没有采取有效防治措施的地区,柞蚕的感染率通常为50—60％,严重的高达90％以上,使柞蚕生产受到很大     

间接竞争ELISA法对柞蚕微孢子虫的检测

柞蚕微孢子虫病是柞蚕唯一的检疫性病害,其致病病原物为柞蚕微孢子虫(Nosema pernyi Ding,Su&Wen),因此,柞蚕微孢子虫的检测对于该病的防治具有重要意义。本文通过制备柞蚕微孢子虫多克隆抗体,建立柞蚕微孢子虫间接竞争ELISA检测法。结果表明,柞蚕微孢子虫多克隆抗体效价为1∶104、浓度为3 mg·mL-1,主要由2条大小约50 ku和25 ku蛋白条带组成,可作为后续试验多克隆抗体材料。间接竞争ELISA法最佳抗原工作浓度为2.0μg·mL-1微孢子虫孢壁蛋白溶液,最佳抗体工作浓度为兔抗血清按1∶102倍浓度稀释,酶标二抗最佳工作浓度为1∶5×104倍稀释,柞蚕微孢子虫间接竞争ELISA检测法的灵敏度为1.6×105spores·mL-1。间接竞争ELISA法在柞蚕微孢子虫的检测方面具有一定的应用价值。     

密码子优化后的柞蚕溶菌酶在酵母中的表达及活性测定

【目的】提高柞蚕溶菌酶在毕赤酵母中的表达量,对柞蚕溶菌酶活性进行测定。【方法】根据毕赤酵母密码子偏爱性对柞蚕溶菌酶基因进行优化,并在目的基因3′端加上6个组氨酸标签,优化后的基因克隆至表达p PIC9K载体中,并通过电转化的方法导入毕赤酵母GS115中。利用不同浓度梯度的G418进行高拷贝转化子的筛选,经甲醇诱导实现分泌表达。通过硫酸铵盐析、镍柱亲和层析等工艺分离纯化柞蚕溶菌酶,利用琼脂扩散方法测定柞蚕溶菌酶对溶壁微球菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、大肠杆菌、苍白杆菌及过氧化醋杆菌的抑菌作用,利用比浊法测定酶活大小。【结果】密码子优化后的柞蚕溶菌酶在诱导温度25°C、甲醇量0.75%和p H 7.0条件下实现了最高表达,表达量达到了2.4 g/L,并且纯化后的柞蚕溶菌酶酶活达到23 970 U/mg。【结论】密码子优化后的柞蚕溶菌酶在毕赤酵母中实现了高效表达,纯化后的柞蚕溶菌酶对溶壁微球菌、金黄色葡萄球菌、枯草杆菌、大肠杆菌、苍白杆菌及过氧化醋杆菌均有抑菌作用。     

柞蚕绒茧蜂生物学特性的观察

柞蚕绒茧蜂(Apanteles sp.)亦称柞蚕小茧蜂,是柞蚕主要害虫之一,过去报道甚少。为了摸清其生物学特性,为防治提供线索,笔者对此虫进行了初步观察。 一、分布、为害及寄主 柞蚕绒茧蜂的国内分布尚无系统资料,据我们调查,在辽宁、吉林、黑龙江、安徽、山东、河南、贵州等省柞蚕区都有此虫发生。在辽宁分布广,危害亦较重。如主要柞蚕区凤城、宽甸、岫岩、庄河、东沟、西丰、盖县、新金、辽阳、复县和丹东市郊区均有此虫为害。     

柞蚕卵壳的结构及其与赤眼蜂寄生的关系

柞蚕是我国的一项特产,产茧量占世界总产量的百分之九十以上。中国劳动人民早在两千多年以前就饲养柞蚕,汉代用其茧作絮,到唐宋时利用柞蚕茧丝已相当盛行,所以柞蚕生产在我国具有悠久的历史。蚕区分布在我国东北地区和山东、河南、贵州等省。柞蚕丝是纺织工业的重要原料,除供服饰外,还是多种工业用材,推进柞蚕生产对繁荣山区经济、提供工业原料,具有一定的意义。 柞蚕卵是比较大而坚硬的昆虫卵。文献报道昆虫卵的卵壳是由围绕着卵母细胞的滤泡细胞连续分泌出卵壳蛋白,沉积于卵母细胞外周而形成的(Kafatos 1976)。Paul 等人(1972)对柞蚕卵壳蛋白质的种类做了分析,Kawasaki 等人(1971)分析了柞蚕卵壳蛋白中     

柞蚕主要病敌害及防治

蚕分为桑蚕和柞蚕两种。我们北方主要以养柞蚕为主。柞蚕属完全变态昆虫,一个世代经卵、幼虫、蛹和成虫4个发育阶段,蚕是由神经系统来调节活动的,与周围环境保持协调关系。外界环境条件发生的任何变化,蚕体不能适应,表现出机能紊乱,发生病态。这里主要介绍一下柞蚕常见的病害和敌害,以供参考。     

柞蚕主要害鸟防除方法的研究

柞蚕害鸟对柞蚕危害很重,其危害损失率一般达30％以上,因此,防除害鸟在柞蚕生产中是很重要的。 我所从1977年开始对柞蚕害鸟的种类及防除方法进行了研究。危害较重的有:大嘴乌鸦(Corvus macrorhynchus)、小嘴乌鸦(Corvus corone)、大山雀(Parus major)和沼泽山雀     

柞蚕蛹期灵菌败血病Serratia marcescens C3菌株分离鉴定

以柞蚕(Antheraea pernyi)蛹为替代寄主繁殖白蛾周氏啮小蜂(Chouioia cunea)技术在辽宁、北京、天津、上海、河北、山东等地美国白蛾(Hyphantria cunea)的生物防治中发挥了重要作用。利用柞蚕蛹繁殖白蛾周氏啮小蜂时,柞蚕蛹期软化病是繁蜂的主要障碍。通过对利用柞蚕蛹繁蜂时蛹内组织液化后呈粉红色这一未知软化病的典型症状进行病原细菌的分离和纯化,得到C3菌株。经Biolog系统和16S rRNA序列分析,鉴定C3菌株为灵菌(Serratia marcescens),经过柯赫法则检验,确定灵菌C3菌株是导致柞蚕蛹期灵菌败血病的病原菌。描述了繁蜂时柞蚕蛹期灵菌败血病发病期的认别特征。     

柞蚕微孢子虫Nosema pernyi微管蛋白基因的克隆及系统发育分析

【目的】柞蚕微粒子病的病原为柞蚕微孢子虫Nosemapernyi,为解明柞蚕微孢子虫微管蛋白基因的序列信息,明确柞蚕微孢子虫的系统分类学地位。【方法】采用RT-.PCR、3′RACE(Rapid amplification ofcDNAends)等技术克隆得到了柞蚕微孢子虫的α、β和y-微管蛋白基因,并利用α、β-微管蛋白序列,分别采用NJ、ML法构建进化树。【结果】将克隆得到的基因序列提交NCBI(GenBank登录号:KF154086、KF023271、KF740389)。构建的系统发育树显示,微孢子虫类以一个独立群位于真菌群体中,与真菌的虫霉门关系较近,且与担子菌、球囊菌、壶菌、接合菌及部分子囊菌互为姐妹群。从部分微孢子虫的系统发育分析结果可以看出,20种微孢子虫分为2个分支,柞蚕微孢子虫与其他Nosema属聚为一类。【结论】本研究克隆得到了柞蚕微孢子虫α、β和y-微管蛋白基因,系统发育分析为更进一步了解柞蚕微孢子虫奠定了基础。     

中国柞蚕幼虫腹足趾钩的研究

趾钩是鳞翅目幼虫分类上常用的特征之一。从本世纪40年代起,神冈等对家蚕幼虫腹足趾钩进行了广泛的研究,中岛(1956)对柞蚕幼虫腹足趾钩有过简短的报告。柞蚕幼虫腹足趾钩不但与地理品种分化有关,而且,由于柞蚕幼虫在野外山林中生活,柞蚕取食等活动,均靠趾钩把握柞枝,趾钩与柞蚕把握力有着密切关系。现将柞蚕幼虫腹足趾钩的形态特征扼要报告如下。     

以柞蚕NPV为载体在柞蚕蛹体内表达外源基因获得成功

辽宁省农科院大连生物技术研究所张春发等人利用柞蚕核型多角体病毒(ApNpV)组建成转移载体,并以此载体携带外源基因(人白细胞介素-4、DE糖蛋白)在草地贪夜蛾Sf9昆虫细胞、柞蚕卵巢细胞以及柞蚕蛹活体中表达成功。实验表明,表达产物的确以非融合蛋白形式出现,从而建立了柞蚕NpV载体—柞蚕蛹活体宿主表达系统。这是继菌苜蓿纹夜蛾核多角体病毒(AcNpV)—Sf9细胞载体表达系统和家蚕核多角体病毒(BmNpV)——家蚕幼虫载体表达系统以后又一个昆虫杆状病毒载体达表系统。由于该系统是利用柞蚕蛹活体为宿主     

五种柞树及蒿柳对柞蚕生长发育、抗病力及茧丝质量的影响

放养柞蚕(Antheraea pernyi Guer)的柞树均属于壳斗科(Fugaceae)栎属(Quercus)。栎属在我国有五十多种,其中用来饲养柞蚕的主要有六种:即檎栎(外棡)(Q.aliena)、柞栎(椁椤)(Q.dentata)、蒙栎(蒙古柞)(Q.mongolica)、辽东栎(辽东柞)(Q.liatungensis)、麻栎(尖柞)(Q.acutissima)及栓皮栎(黑栎)(Q.variabils)。在辽宁柞蚕产区,栓皮栎很少,但有以杨柳科的蒿柳(Salix viminalis)作为代饲料的。除栓皮栎外,上述五种柞树及蒿柳在饲养柞蚕上,究竟谁优谁劣,迄无定论,各柞蚕产区对它们的评价也不一致。但这个问题,对于今后发展柞蚕生产是个关键问题,必须研究解决。为此,我们在柞蚕茧丝产量占全国80％左右的辽宁蚕区进行了如下的试验,其目的是从柞蚕的生长发育、抗病力及茧丝质量等方面来鉴定各种柞树的优劣,以及代饲料蒿柳的饲蚕效果,为今后柞蚕生产的发展提供科学资料。     

柞蚕蛹培养蛹虫草不同时间后的代谢组分析

为了解柞蚕蛹培养蛹虫草(简称柞蚕蛹虫草)不同时间后的代谢物变化规律,利用广泛靶向代谢组学技术,比较不同培养时期的柞蚕蛹虫草代谢产物成分,找出差异代谢物并进行代谢通路分析.在柞蚕蛹虫草的5个生长时期共检测到10类421种化合物,主要包括:氨基酸及其衍生物、核苷酸及其衍生物、萜类、酚酸、有机酸、糖及醇类、甾体、脂类、生物碱...     

利用蒿柳建设柞蚕保苗场的研究初报

1970年以来,我们先后在辽东、辽北、辽南各柞蚕主要产区开展了利用蒿柳建设柞蚕保苗场的科学试验,获得了良好效果。试验证明: 1.利用蒿柳(Salix viminalis Linn.)密植建设柞蚕专用保苗场,具有易繁殖、成活率高、生长快之优点,而     

柞蚕核型多角体病毒基因表达载体系统的构建与基因表达

柞蚕是一种野外饲养的经济昆虫,主要分布在我国东北部山区。柞蚕以蛹滞育越冬,其蚕蛹个大、容易固定、保存时间长、无须饲养、容易运输等优点。利用柞蚕蛹作为生物反应器生产外来蛋白质,可以大规模机械化生产,减少操作上的烦琐和劳动力。本文利用柞蚕核型多角体病毒(AnpeNPV)作为基因表达载体,在柞蚕培养细胞(AnPe细胞)和柞蚕蛹中成功地表达了β-半乳糖苷酶基因（LacZ）,并利用AnPe细胞筛选、纯化获得了AnpeLacZ重组病毒。该重组病毒的β-半乳糖苷酶产量,在TC-100(含10%FBS)培养的AnPe细胞中最高酶活性为感染后第12天的40.9 units/ml,在SF-900Ⅱ培养的AnPe细胞中最高酶活性为感染后第18天的59.9 units/ml,后者表达量稍高,但时间滞后。AnpeLacZ在5℃保存了7个月的柞蚕蛹中,感染后第15天酶活性达到最高,雌蛹14.3 units/g,雄蛹11.7 units/g,雌蛹比雄蛹略高。结果显示,柞蚕核型多角体病毒和柞蚕蛹可以作为一个可以机械化大规模生产的新型杆状病毒基因表达载体系统开发和利用。